崔函，劉婉君，林麗娜，陳麗萍

（1. 沈陽醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)2017 級(jí)碩士研究生，遼寧 沈陽 110034；2. 臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)2016 級(jí)碩士研究生，3. 沈陽醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科）

過敏性疾病又稱為變態(tài)反應(yīng)性疾病，主要包括過敏性皮炎、蕁麻疹和濕疹等［1］。近年來由于生活方式的改變和環(huán)境污染問題的加劇，導(dǎo)致過敏性疾病的發(fā)病率逐年增加，給患者及家屬造成巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和心理壓力［2-3］。CD203／磷酸二酯酶（ectonucleotide pyrophosphatase／Phosphodiesterase，ENpp）家族中有 7 個(gè)成員，CD203c（ENPP3）就是家族成員之一［4］。隨著流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展和嗜堿性粒細(xì)胞活化實(shí)驗(yàn)（basophil activation test，BAT）的應(yīng)用，大量研究表明采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)嗜堿性粒細(xì)胞／肥大細(xì)胞膜表面的CD203c的活化情況和功能狀態(tài)，對(duì)過敏性疾病的研究具有重要的價(jià)值［4-7］。本文基于最新研究進(jìn)展，對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞／肥大細(xì)胞CD203c 的表達(dá)與其在過敏性疾病臨床應(yīng)用中的研究作一綜述。

1 BAT 的應(yīng)用

研究發(fā)現(xiàn)，40%的美國人對(duì)一種或多種常見的吸入或食物過敏原過敏，其中50%人群在未接觸過敏原時(shí)就會(huì)出現(xiàn)癥狀［8］。過敏性疾病的診斷主要依靠病史和過敏原的檢測(cè)，目前臨床上對(duì)過敏原的檢測(cè)方法大致分為兩類［9］，一類為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，以皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)最常見；另一類為體外實(shí)驗(yàn)，以特異性免疫球蛋白E（specific immunoglobulin E，sIgE）和總IgE 含量的測(cè)定為主。BAT 是用流式細(xì)胞儀測(cè)定 CD203c、CD63 等膜蛋白，在遇到過敏原刺激后嗜堿性粒細(xì)胞的活化情況。近些年隨著流式細(xì)胞儀的發(fā)現(xiàn)和使用，人們開始使用BAT 輔助診斷過敏性疾病。皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)簡(jiǎn)便易行，因藥物和皮膚反應(yīng)性等因素的影響，引起假陽性或假陰性結(jié)果的概率比較大［10］。國內(nèi)學(xué)者通過分析50 487 例臨床病例發(fā)現(xiàn)，sIgE 測(cè)量陽性的受試者出現(xiàn)過敏反應(yīng)癥狀的僅占40%，血清sIgE 陰性的受試者仍可能被診斷為過敏性疾?。?1］。Imoto等［12］納入1 987 名日本柳杉花粉 sIgE 陽性的受試者，發(fā)現(xiàn)其中552 名受試者在有日本柳杉花粉傳播的季節(jié)沒有出現(xiàn)任何過敏癥狀，研究人員對(duì)所有受試者使用BAT 測(cè)定CD203c 后發(fā)現(xiàn)，與日本柳杉花粉傳播的季節(jié)無癥狀的sIgE 陽性的受試者相比，有癥狀的花粉sIgE 陽性的受試者 CD203c明顯升高。與皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)和 sIgE 測(cè)定相比，BAT 不僅安全、準(zhǔn)確，不容易受藥物和皮膚反應(yīng)性的影響，而且BAT 能更準(zhǔn)確地顯示機(jī)體對(duì)于過敏原刺激的反應(yīng)性，間接評(píng)估出受試者過敏性鼻炎發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)程度。朱曉敏等［13］認(rèn)為BAT 不僅能幫助診斷sIgE 陽性的過敏患者，也對(duì)非sIgE 介導(dǎo)的過敏的診斷有幫助。因此臨床應(yīng)用BAT 對(duì)于診斷過敏性疾病具有重要價(jià)值。

2 嗜堿性粒細(xì)胞的CD203c 的表達(dá)和過敏性疾病

嗜堿性粒細(xì)胞是罕見的粒細(xì)胞，在外周血白細(xì)胞中所占的比例不到1%，胞質(zhì)內(nèi)的異染顆粒可被甲苯胺藍(lán)等堿性染料著色［14-15］。嗜堿性粒細(xì)胞作為參與過敏性炎癥的重要細(xì)胞，只存在于血液循環(huán)中，成為過敏性疾病研究的重要突破點(diǎn)。CD203 是調(diào)節(jié)嘌呤代謝的胞外酶，其家族中的CD203c 是一種糖基化Ⅱ型跨膜分子，又稱為神經(jīng)細(xì)胞表面分化抗原，屬于胞外核苷焦磷酸二酯酶家族，催化寡核苷酸，磷酸核苷和 NAD 的水解［10，12］。雖然 IgE 與嗜堿性粒細(xì)胞結(jié)合能引起Ⅰ型超敏反應(yīng)，但 Bühring 等［16］認(rèn)為在外周血中，樹突狀細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和B 細(xì)胞等也可檢測(cè)到IgE 的表達(dá)，因此IgE 對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞無特異性。在外周血中，CD203c 只表達(dá)在嗜堿性粒細(xì)胞的表面，存在于其成熟的各個(gè)階段，影響嗜堿性粒細(xì)胞的分化。因此CD203c成為嗜堿性粒細(xì)胞表面特異性活化和識(shí)別標(biāo)記［17］。

嗜堿性粒細(xì)胞的CD203c 在無過敏原刺激時(shí)低表達(dá)，在接觸過敏原刺激時(shí)，CD203c 的表達(dá)會(huì)迅速升高，在刺激大約5 min 后達(dá)到峰值，可能是因?yàn)榘麅?nèi)預(yù)存的CD203c 分子能夠快速轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜表面，引起 CD203c 活化后的迅速高表達(dá)［17-18］。Eberlein-K?nig 等［19］檢測(cè)了 25 例健康受試者和 43例對(duì)昆蟲毒液過敏的患者嗜堿性粒細(xì)胞CD203c 的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)昆蟲毒液致敏的患者嗜堿性粒細(xì)胞CD203c 表達(dá)水平上調(diào)，與其他活化標(biāo)記相比，CD203c 的靈敏度更高。Itoh-Nagato 等［20］研究發(fā)現(xiàn)，蛋清過敏的受試者在接觸過敏原后，嗜堿性粒細(xì)胞 CD203c 表達(dá)水平上調(diào)。Kim 等［21］研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)頭孢克洛過敏的受試者，在接觸過敏原后，CD203c 表達(dá)水平明顯上調(diào)。CD203c 作為嗜堿性粒細(xì)胞的活化標(biāo)記，不僅用于過敏性疾病的體外診斷，還可以判斷過敏性疾病的嚴(yán)重程度和評(píng)估疾病的預(yù)后和治療效果。蔣家利等［22］通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)哮喘患兒嗜堿性粒細(xì)胞的活化情況，發(fā)現(xiàn)急性發(fā)作期的過敏性哮喘患兒嗜堿性粒細(xì)胞CD203c 表達(dá)水平明顯上調(diào)，急性發(fā)作次數(shù)越多，嗜堿性粒細(xì)胞 CD203c 的表達(dá)水平越高。Gernez等［23］研究顯示，對(duì)堅(jiān)果過敏的患者血液中嗜堿性粒細(xì)胞CD203c 的表達(dá)水平上調(diào)，接受過敏原刺激后嗜堿性粒細(xì)胞CD203c 進(jìn)一步上調(diào)，這兩種情況在注射奧馬珠單抗（抗IgE 單克隆抗體）后，嗜堿性粒細(xì)胞CD203c 的表達(dá)水平降低。這提示奧馬珠單抗通過阻斷IgE 與嗜堿性粒細(xì)胞表面的受體（Fc?RI）結(jié)合，阻斷了嗜堿性粒細(xì)胞活化，使嗜堿性細(xì)胞 CD203c 表達(dá)水平下調(diào)。Ye 等［24］研究發(fā)現(xiàn)，慢性蕁麻疹患者中的嗜堿性細(xì)胞CD203c 表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組，重度慢性蕁麻疹患者的嗜堿性粒細(xì)胞CD203c 表達(dá)水平明顯高于非重度慢性蕁麻疹患者。Caruso 等［25］發(fā)現(xiàn)對(duì)墻草類過敏的過敏性鼻炎患者，通過口服脫敏劑治療12 個(gè)月后，CD203c 表達(dá)水平明顯降低。過敏原進(jìn)入人體后與 IgE 結(jié)合，IgE 與 Fc?RI 結(jié)合，嗜堿性粒細(xì)胞發(fā)生活化，其細(xì)胞膜表面的CD203c 表達(dá)水平上調(diào)，阻斷 IgE 后 CD203c 的表達(dá)水平降低，采用BAT 檢測(cè)嗜堿性粒細(xì)胞CD203c，未來有可能成為診斷過敏性疾病的可靠方法。

3 肥大細(xì)胞CD203c 的表達(dá)和過敏性疾病

肥大細(xì)胞起源于骨髓中的CD4＋造血干細(xì)胞，經(jīng)血液循環(huán)遷移到皮下組織并在此成熟，最終進(jìn)入黏膜或結(jié)締組織，在那里發(fā)育為成熟的肥大細(xì)胞［26］。肥大細(xì)胞與外周血中的嗜堿性粒細(xì)胞相似，能觸發(fā)包括 IgE 和非 IgE 介導(dǎo)的各種變態(tài)反應(yīng)［14，27］。CD203c 作為一種膜蛋白，在黏膜組織中僅僅表達(dá)在肥大細(xì)胞的表面，2005 年Krauth 等［28］采用單克隆抗體和間接免疫熒光染色技術(shù)建立了人胃腸肥大細(xì)胞膜表型，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)人胃腸道肥大細(xì)胞 CD203c 存在高表達(dá)。肥大細(xì)胞CD203c 在過敏領(lǐng)域的研究比較晚，Valent 等［29］和Hauswirth 等［30］研究發(fā)現(xiàn)肥大細(xì)胞性增多癥患者的肥大細(xì)胞CD203c 表達(dá)水平上調(diào)，與IgE 受體交聯(lián)后進(jìn)一步上調(diào)。Cop 等［26］在體外培養(yǎng)正常人外周血中的肥大細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)，IgE 與受體結(jié)合后促進(jìn)肥大細(xì)胞 CD203c 表達(dá)水平上調(diào)。國外研究發(fā)現(xiàn)，CD203c 通過水解ATP 負(fù)性調(diào)節(jié)嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞的慢性過敏性炎癥反應(yīng)，在缺乏CD203c 的情況下，嗜堿性細(xì)胞和肥大細(xì)胞被過度激活，引起嚴(yán)重的慢性過敏性炎癥［31-32］。近年來有研究表明RNA 測(cè)序可以判斷IgE 受體介導(dǎo)的肥大細(xì)胞活化情況，此研究可以為肥大細(xì)胞對(duì)過敏性疾病發(fā)生機(jī)制研究提供新的認(rèn)識(shí)［33］。

4 測(cè)定CD203c 的表達(dá)應(yīng)用于臨床的局限性

與皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)和血清sIgE 測(cè)定相比，嗜堿性粒細(xì)胞CD203c 表達(dá)水平測(cè)定，診斷過敏性疾病敏感性、特異性和準(zhǔn)確性更高。但是目前測(cè)定嗜堿性粒細(xì)胞CD203c 的表達(dá)水平，仍然存在很多需要解決的問題，因此并未被廣泛應(yīng)用于臨床。CD203c 的表達(dá)水平的測(cè)定對(duì)標(biāo)本的要求比較嚴(yán)格，但是目前國際上對(duì)標(biāo)本的存放條件、存放時(shí)間和處理沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，仍需要進(jìn)一步探索和確認(rèn)［34］。CD203c 表達(dá)水平的測(cè)定作為一種新型實(shí)驗(yàn)，在測(cè)定過程中需要對(duì)CD203c、CD123 和HLA-DR 等使用免疫熒光標(biāo)記，還需要使用流式細(xì)胞分析儀等儀器，價(jià)格普遍比較昂貴，成本太高，推廣比較困難［1］。成熟的肥大細(xì)胞不存在于血液中，只存在于黏膜或結(jié)締組織中，相較于血液樣本，提取比較繁瑣，在提取樣本的過程中肥大細(xì)胞的損失不可避免，直接影響到測(cè)定肥大細(xì)胞CD203c 表達(dá)水平的敏感性。肥大細(xì)胞CD203c 表達(dá)水平的測(cè)定在過敏領(lǐng)域的研究起步比較晚，發(fā)展比較緩慢，臨床研究比較少，未來應(yīng)用于臨床，還有很長(zhǎng)的路要走。

5 小結(jié)

過敏性疾病病因復(fù)雜，發(fā)病率不斷激增，急性發(fā)作的風(fēng)險(xiǎn)高，WHO 已經(jīng)將過敏性疾病列為當(dāng)今世界重點(diǎn)研究和診治的疾病之一。與目前臨床上常用的過敏性疾病的檢測(cè)方法相比，BAT 測(cè)定CD203c 的表達(dá)水平不僅可以診斷過敏性疾病，還可以監(jiān)測(cè)疾病的嚴(yán)重程度和評(píng)價(jià)治療效果。但是嗜堿性粒細(xì)胞CD203c 的表達(dá)水平的測(cè)定在臨床驗(yàn)證的過程中仍然存在很多問題，主要包括標(biāo)本的處理標(biāo)準(zhǔn)未統(tǒng)一和儀器的價(jià)格比較昂貴。肥大細(xì)胞CD203c 表達(dá)水平的測(cè)定在過敏領(lǐng)域的臨床研究比較少，對(duì)過敏性疾病的臨床研究和診斷，有待未來行進(jìn)一步深入研究。