李杰 劉保國 寧春妹 杭柏林*

（1，河南省新鄉(xiāng)市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測檢驗中心 453003；2，河南科技學(xué)院動物科技學(xué)院 453003）

新城疫（Newcastle Disease）是雞和鴿常見的一種病毒性傳染病，發(fā)病率和死亡率高，是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定的動物A 類疫病，也是我國的I 類動物疫病[1]。常用疫苗免疫進行預(yù)防新城疫的發(fā)生。新城疫病毒抗體的檢測常采用血凝抑制試驗進行檢測，測定的抗體常稱為血凝抑制（HI）抗體。當(dāng)鴿體內(nèi)新城疫病毒HI 抗體效價高，可有效降低鴿新城疫的發(fā)生。鴿群新城疫病毒HI 抗體的合格率高可有效保護鴿群不受鴿新城疫的影響。疫苗免疫后，檢測新城疫病毒HI 抗體效價時常常發(fā)現(xiàn)不同個體之間的HI 抗體效價不整齊，表現(xiàn)出一定的離散性[2,3]。為了了解鴿新城疫病毒HI 抗體效價合格率與離散度之間的相關(guān)性，本研究檢測了免疫鴿血清中新城疫病毒的HI 抗體，分析了HI 抗體效價的合格率和離散度，借助軟件分析了合格率和離散度之間的相關(guān)性，希望為鴿新城疫的防控提供一些幫助。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試劑

檸檬酸鈉（分析純）和氯化鈉（分析純）購自天津市天力化學(xué)試劑有限公司，健康公雞購自新鄉(xiāng)市洪門鎮(zhèn)中心菜市場，碘伏購自山東利爾康醫(yī)療科技股份有限公司，乙醇（75%）購自新鄉(xiāng)市三偉消毒劑有限公司，雞新城疫活疫苗（La Sota 株）購自哈藥集團生物疫苗有限公司。其他為實驗室常用試劑與耗材。

1.1.2 儀器

離心機（型號為TG16-WS）購自湘儀離心機儀器有限公司，生化培養(yǎng)箱（型號為GNP-9270）購自上海精宏實驗設(shè)備有限公司）購自，電子天平（型號為 LT202B）購自常熟市天量儀器有限責(zé)任公司，移液器（Research plus）購自德國 Eppendorf 股份有限公司，高壓蒸汽滅菌器（型號為MJ-78A）購自施都凱儀器設(shè)備（上海）有限公司，冰箱（型號為 BCD-325WKY1DPM）購自廣東容聲電器股份有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 血液樣本的采集

199 份鴿血液樣本采集自鶴壁市某鴿場的21 棟鴿舍，樣本采集鴿均曾用新城疫病毒疫苗免疫過。采集時用碘伏擦拭，再用75%乙醇脫碘，然后用一次性無菌注射器從鴿翅部靜脈采集0.5～1ml 血液，4℃保存 2～4h。

1.2.2 血清樣本的制備

采集的血液于4000 轉(zhuǎn)/min 離心10min，將上清轉(zhuǎn)移至另一個無菌離心管中，-20℃保存。

1.2.3 雞紅細胞懸液的制備

按照鴿子血液樣本的采集方法從雞翅靜脈采集血液，用3.8%檸檬酸鈉抗凝，按照文獻[4]的方法制備1%雞紅細胞懸wHI 抗體效價的測定，按照文獻[4]方法進行制備。當(dāng)HI 抗體效價≥5log2 時，認為個體的免疫合格，HI 抗體效價＜5log2 時，認為個體的免疫不合格；當(dāng)HI 抗體效價≥7log2 時，群體免疫合格[2]?？贵w的離散度用變異系數(shù)來表示，變異系數(shù)=（標(biāo)準(zhǔn)差/平均值）×100%，抗體的離散度≤10%為佳[2]。

1.2.5 相關(guān)性分析

鴿血清抗體效價合格率和離散度之間的非參數(shù)相關(guān)性（Spearman）利用GraphPad Prism 軟件中的統(tǒng)計工具進行分析，p 值為兩尾檢驗，置信區(qū)間為95%；同時利用該軟件中的線性回歸分析繪制回歸線，置信區(qū)間為95%。

2 結(jié)果與分析

2.1 鴿新城疫病毒HI 抗體效價的合格率與離散度

抽檢鴿的新城疫病毒HI 抗體檢測結(jié)果如附表所示。從附表中可以看出，新城疫病毒HI 抗體效價合格率最高為100%，共有8 棟鴿舍，占采樣總棟數(shù)的38.09%；合格率低于70%的鴿舍有8 棟，占采樣總棟數(shù)的38.09%；合格率最低為20%，有2棟鴿舍，占采樣總棟數(shù)的 9.52%；HI 抗體效價平均值大于7log2 的有7 棟鴿舍，群體免疫合格率為33.33%。從抗體離散度來看，所抽檢的21 棟鴿舍鴿新城疫病毒HI 抗體的離散度均大于10%，均不是很好，僅7 棟鴿舍鴿新城疫病毒HI 抗體的離散度小于20%。結(jié)果說明，部分鴿舍中某些鴿的新城疫病毒免疫發(fā)生了失敗，部分鴿舍可能發(fā)生新城疫病毒野毒的感染。因此，需要進行新城疫病毒的緊急免疫和再次加強免疫。

2.2 鴿新城疫病毒HI 抗體效價合格率與離散度的相關(guān)性

鴿新城疫病毒HI 抗體效價合格率與離散度之間的相關(guān)性如附圖所示。從附圖中可以看出，鴿新城疫病毒HI 抗體效價的合格率與離散度之間的相關(guān)系數(shù)r=-0.99136，P＜0.0001，呈極顯著性負相關(guān)。

3 討論

隨著疫苗的應(yīng)用，禽群爆發(fā)典型新城疫的幾率大大降低，但免疫禽群常常出現(xiàn)非典型新城疫。禽群中長期存在新城疫病毒強毒是免疫禽群出現(xiàn)非典型新城疫的重要原因之一。當(dāng)免疫禽只的抗體效價下降，導(dǎo)致禽群群體免疫水平下降，不能抵抗強毒的攻擊，禽群將可能發(fā)生新城疫。因此，需要經(jīng)常檢測免疫禽只的抗體效價，以確定再次免疫的時間。

免疫后新城疫病毒HI 抗體效價是否合格的判定主要根據(jù)抗體效價的保護臨界值，高于臨界值時認為是合格的，低于臨界值時認為是不合格。但有人認為新城疫的保護性HI 抗體效價的臨界值為4log2[5]，但也有參照 《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 16550-2008）認為 5log2 是保護臨界值[2]。本著嚴格的要求，在本研究中以5log2 為合格的判定臨界值。一般認為群體中有70%～80%的動物有抵抗力，不會發(fā)生大規(guī)模的爆發(fā)性流行[1]。在本研究中，有1/3 鴿舍的抗體合格率低于70%，同時個體間抗體離散度高。這可能與免疫方法有關(guān)。經(jīng)詢問得知，鴿場主要采用飲水方法進行新城疫疫苗的免疫。而不同鴿的飲水量不同，導(dǎo)致攝入的疫苗量不同，最終機體產(chǎn)生的抗體量也不同，在鴿舍間出現(xiàn)出不同的抗體效價合格率和抗體效價離散度。本研究分析發(fā)現(xiàn)，鴿新城疫病毒HI 抗體效價的合格率與離散度之間呈顯著的負相關(guān)。這提示，正確免疫，確保每羽鴿接種相同劑量的疫苗，可以降低抗體效價的離散度，同時提高抗體效價的合格率。因此，我們建議鴿場進行免疫時應(yīng)嚴格按照疫苗使用說明書進行每羽鴿的皮下注射滅活苗或點眼滴鼻弱毒苗，同時加強抗體效價監(jiān)測，及時加強免疫，以確保免疫效果。