王明，王亮，何翔 滄州市中心醫(yī)院，河北滄州061001

食管癌是上消化道常見的惡性腫瘤之一，是全球第八大常見惡性腫瘤。食管癌早期通常無明顯癥狀，一旦出現(xiàn)吞咽困難癥狀就診時(shí)，多數(shù)患者病程已進(jìn)入中晚期，病死率較高，預(yù)后較差，5年生存率僅15%～25%[1]。目前，食管癌主要采取以手術(shù)為主的綜合治療，但效果并不能令人滿意，部分患者即使經(jīng)積極治療仍可出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移[2]。細(xì)胞分裂周期蛋白25B(CDC25B)是CDC25家族中的重要成員，其基因定位于人染色體20p13。CDC25B既具有酪氨酸激酶活性又具有絲氨酸激酶活性，能夠通過激活細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶2，促進(jìn)正常細(xì)胞的有絲分裂。近年研究發(fā)現(xiàn)，CDC25B基因是一種潛在的致癌基因，在多種腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)，如皮膚鱗癌、子宮內(nèi)膜癌、非小細(xì)胞肺癌等，其表達(dá)上調(diào)可促進(jìn)腫瘤生長和惡性轉(zhuǎn)化[3-4]。凋亡抑制蛋白PED/PEA-15基因定位于人染色體1q23.2，其基因編碼含有死亡效應(yīng)域的小分子蛋白質(zhì)，具有蛋白激酶C內(nèi)源性底物的特殊分子結(jié)構(gòu)，對(duì)凋亡起負(fù)性調(diào)控作用。有研究發(fā)現(xiàn)，在食管鱗癌、腎透明細(xì)胞癌組織中PED/PEA-15表達(dá)上調(diào)，其表達(dá)上調(diào)能夠抑制腫瘤細(xì)胞程序性死亡，促進(jìn)腫瘤惡性進(jìn)展[5-6]。但目前鮮見CDC25B、PED/PEA-15與食管癌關(guān)系的報(bào)道。2011年6月—2014年12月，本研究觀察了食管癌組織CDC25B、PED/PEA-15表達(dá)變化，并探討二者表達(dá)與患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇同期滄州市中心醫(yī)院收治的食管癌患者80例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)術(shù)后病理學(xué)檢查明確食管癌診斷；②初診；③接受食管癌根治術(shù)或姑息性切除術(shù)；④入院前未接受放化療或免疫抑制劑治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他消化系統(tǒng)疾病者；②合并嚴(yán)重心肺功能障礙者；③合并免疫系統(tǒng)疾病者；④合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤者。其中，男50例、女30例，年齡31～78歲；腫瘤直徑：≤5 cm 38例，>5 cm 42例；腫瘤部位：胸上段17例，胸中段41例，胸下段22例；腫瘤組織分化程度：高中分化49例，低分化31例；腫瘤臨床分期：Ⅰ、Ⅱ期56例，Ⅲ期24例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例。本研究符合《赫爾辛基宣言》，經(jīng)滄州市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者或其家屬簽屬知情同意書。

1.2 CDC25B、PED/PEA-15表達(dá)檢測 取術(shù)中切除的食管癌組織及其癌旁組織(距腫瘤組織邊緣超過3 cm，并經(jīng)病理學(xué)檢查明確為正常食管組織)，中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚切片。切片經(jīng)60 ℃烤片過夜，二甲苯Ⅰ、Ⅱ脫蠟兩遍，梯度乙醇水化，然后置于檸檬酸緩沖液中，微波爐加熱抗原修復(fù)，自然冷卻，3%雙氧水滅活內(nèi)源性過氧化物酶。5%山羊血清封閉1 h，滴加CDC25B、PED/PEA-15一抗(稀釋比均為1∶400)，37 ℃孵育2 h。次日加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗(稀釋比為1∶500)，室溫孵育2 h，DAB顯色，蘇木精染核，梯度乙醇脫水，中性樹膠封固，顯微鏡下觀察。

所有切片由兩位病理科醫(yī)師盲法獨(dú)立閱片。CDC25B陽性染色定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒狀。PED/PEA-15陽性染色定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒狀。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野(200×)，以染色強(qiáng)度評(píng)分和陽性細(xì)胞比例評(píng)分綜合判定CDC25B、PED/PEA-15陽性表達(dá)，二者乘積≥3為陽性表達(dá)[6]。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細(xì)胞比例評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：無陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞比例<25%為1分，陽性細(xì)胞比例25%～<50%為2分，陽性細(xì)胞比例≥50%為3分。

1.3 隨訪 患者出院后通過電話方式定期隨訪，每個(gè)月隨訪1次，隨訪截至2019年12月，共隨訪5年，終點(diǎn)事件為患者死亡或至隨訪截至日期。統(tǒng)計(jì)患者5年總體生存率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析法。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log-rank檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 食管癌組織與癌旁正常組織CDC25B、PED/PEA-15表達(dá)比較 食管癌組織CDC25B、PED/PEA-15陽性表達(dá)率分別為52.50%(42/80)、66.25%(53/80)，癌旁正常組織分別為1.25%(1/80)、8.75%(7/80)。食管癌組織CDC25B、PED/PEA-15陽性表達(dá)率均高于癌旁正常組織(χ2分別為53.461、57.427，P均<0.01)。

2.2 食管癌組織CDC25B、PED/PEA-15陽性表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 見表1。

表1 食管癌組織CDC25B、PED/PEA-15陽性表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系

2.3 食管癌組織CDC25B表達(dá)與PED/PEA-15表達(dá)的關(guān)系 在食管癌組織CDC25B陽性表達(dá)者中，PED/PEA-15陽性表達(dá)35例份、陰性表達(dá)7例份；在食管癌組織CDC25B陰性表達(dá)者中，PED/PEA-15陽性表達(dá)18例份、陰性表達(dá)20例份。Spearman秩相關(guān)分析顯示，食管癌組織CDC25B表達(dá)與PED/PEA-15表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(ρ=0.580，P<0.01)。

2.4 食管癌組織CDC25B、PED/PEA-15表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系 至隨訪截至日期，共隨訪2～60個(gè)月，無失訪病例，隨訪期間死亡64例。

CDC25B陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者5年總體生存率分別為9.52%(4/42)、31.58%(12/38)，CDC25B陽性表達(dá)者5年總體生存率低于CDC25B陰性表達(dá)者(χ2=4.557，P<0.05)；PED/PEA-15陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者5年總體生存率分別為7.55%(4/53)、44.44%(12/27)，PED/PEA-15陽性表達(dá)者5年總體生存率低于PED/PEA-15陰性表達(dá)者(χ2=3.845，P<0.05)。

3 討論

食管癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，全球每年死亡約40萬例。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國食管癌發(fā)病和死亡負(fù)擔(dān)幾乎占到全球一半，并且其發(fā)病率還有不斷上升趨勢[7]。目前，食管癌主要采取以手術(shù)為主的綜合治療，但效果并不能令人滿意，部分患者即使經(jīng)積極治療仍可出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移[2]。近年研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤的發(fā)生與癌基因的過度激活和抑癌基因的失活有關(guān)，從而導(dǎo)致了細(xì)胞增殖與凋亡失衡[8]。因此，探索影響腫瘤發(fā)生、發(fā)展的驅(qū)動(dòng)基因，對(duì)研發(fā)新的靶向治療藥物具有重要的臨床價(jià)值。

CDC25B是CDC25磷酸酶家族成員之一，是細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶激活所必需的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)劑，可參與個(gè)體發(fā)育、組織分化、組織再生等生物學(xué)過程。近年研究發(fā)現(xiàn)，在多種惡性腫瘤組織中存在CDC25B表達(dá)上調(diào)現(xiàn)象，其表達(dá)上調(diào)能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞過度增殖，從而導(dǎo)致腫瘤惡性進(jìn)展。體外實(shí)驗(yàn)亦證實(shí)，抑制CDC25B表達(dá)后，腫瘤細(xì)胞增殖明顯受到抑制[3]。因此，CDC25B有可能是惡性腫瘤潛在的治療靶點(diǎn)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，食管癌組織CDC25B陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織。提示CDC25B可能參與食管癌的發(fā)生、發(fā)展，但其具體作用機(jī)制尚不清楚。有研究報(bào)道，正常狀態(tài)下miR-152能夠結(jié)合CDC25B的3′非編碼區(qū)，降低CDC25B mRNA的穩(wěn)定性，抑制CDC25B表達(dá)；腫瘤發(fā)生時(shí)miR-152表達(dá)降低，CDC25B mRNA穩(wěn)定性增加，從而引起CDC25B表達(dá)上調(diào)[4]。此外，CDC25B磷酸酶的活性受其亞細(xì)胞定位調(diào)節(jié)，CDC25B在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)的穿梭過程中受14-3-3支架蛋白調(diào)節(jié)，腫瘤發(fā)生時(shí)14-3-3支架蛋白表達(dá)上調(diào)，能夠促進(jìn)CDC25B進(jìn)入細(xì)胞核，促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程[9]。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，食管癌組織CDC25B陽性表達(dá)與腫瘤臨床分期有關(guān)，提示CDC25B表達(dá)上調(diào)能夠促進(jìn)食管癌惡性進(jìn)展。細(xì)胞正常有絲分裂受CDK1/Cyclin B調(diào)節(jié)，而CDC25B作為磷酸酶去除抑制性磷酸基，能夠激活CDK1/Cyclin B，從而促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞無限增殖，繼而使腫瘤臨床分期升高[10]。

PED/PEA-15是在哺乳動(dòng)物中普遍表達(dá)的小分子蛋白質(zhì)，是調(diào)節(jié)多種細(xì)胞過程(如細(xì)胞增殖、凋亡)的關(guān)鍵多蛋白結(jié)合分子。PED/PEA-15能夠與絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)途徑中的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1和2(ERK1/2)、Fas相關(guān)死亡域蛋白結(jié)合，參與調(diào)控細(xì)胞增殖和凋亡，維持細(xì)胞增殖與凋亡平衡。近年研究發(fā)現(xiàn)，在多種惡性腫瘤組織中PED/PEA-15表達(dá)上調(diào)，并具有抗凋亡和抗炎特征，有可能成為惡性腫瘤潛在的治療靶點(diǎn)[11-12]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，食管癌組織PED/PEA-15陽性表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織，提示PED/PEA-15可能參與食管癌的發(fā)生、發(fā)展。有研究報(bào)道，腫瘤組織miR-212表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致其無法結(jié)合到PED/PEA-15 mRNA的3′非編碼區(qū)，從而使PED/PEA-15表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞凋亡[13]。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，食管癌組織PED/PEA-15陽性表達(dá)與腫瘤臨床分期有關(guān)，表明PED/PEA-15表達(dá)上調(diào)可能促進(jìn)食管癌惡性進(jìn)展。研究表明，PEA-15與ERK1/2結(jié)合能夠阻斷其與ERK的質(zhì)膜結(jié)合，并防止成纖維細(xì)胞受體底物2α(FRS2α)的蘇氨酸磷酸化，這一作用延長了成纖維細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)的FRS2α酪氨酸磷酸化，從而維持MEK和ERK的活化，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞惡性增殖，繼而導(dǎo)致腫瘤臨床分期升高[14]。

本研究發(fā)現(xiàn)，食管癌組織CDC25B表達(dá)與PED/PEA-15表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，提示二者可能共同促進(jìn)食管癌的發(fā)生、發(fā)展，其機(jī)制可能與這兩種蛋白均參與G蛋白偶聯(lián)受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)MAPK/ERK途徑有關(guān)[15]。本研究還發(fā)現(xiàn)，CDC25B、PED/PEA-15陽性表達(dá)者5年總體生存率均低于其陰性表達(dá)者，這表明CDC25B、PED/PEA-15表達(dá)變化與食管癌患者預(yù)后有關(guān)。有研究報(bào)道，CDC25B、PED/PEA-15表達(dá)升高可能會(huì)導(dǎo)致腫瘤患者預(yù)后不良[16]，本研究結(jié)果與其基本一致。

綜上所述，食管癌組織CDC25B、PED/PEA-15表達(dá)升高，其表達(dá)變化與腫瘤臨床分期和患者預(yù)后有關(guān)。CDC25B、PED/PEA-15有可能成為食管癌早期診斷和靶向治療的生物標(biāo)志物。