李彥飛，馮澤騰，張小軍

(中農(nóng)立華生物科技股份有限公司，北京 100052)

苯唑草酮(topramezone)，化學(xué)名稱為[3-(4,5-二氫-3-異噁唑基)-4-甲基磺酰-2-甲基苯]-(5-羥基-1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲酮，是由巴斯夫公司開發(fā)的一類對(duì)羥基苯基丙酮酸酯雙氧化酶(HPPD)類抑制劑。其屬于苯甲酯吡唑酮類除草劑，能有效防除玉米田闊葉雜草及禾本科雜草，但對(duì)莎草科雜草效果較差，具有活性高、殺草譜廣、可混性強(qiáng)以及對(duì)作物和環(huán)境安全等優(yōu)點(diǎn)[1-3]。三氯吡氧乙酸(triclopyr)，又名綠草定，化學(xué)名稱為3,5,6-三氯-2-吡啶氧基乙酸，是由陶氏化學(xué)公司開發(fā)的一種內(nèi)吸傳導(dǎo)型選擇性吡啶氧羧酸類除草劑，在植物體內(nèi)可傳導(dǎo)到全株，造成植物根、莖、葉畸形，儲(chǔ)藏物質(zhì)耗盡，維管束被栓塞或破裂，植株逐漸死亡。禾本科作物對(duì)三氯吡氧乙酸具有耐藥性，因此，該劑可用于非耕地防除木本植物及闊葉雜草，也可用于禾本科作物如高粱、燕麥、小麥和玉米等作物田中闊葉雜草的防治[4-7]。

目前有關(guān)苯唑草酮及三氯吡氧乙酸單劑的分析方法有較多文獻(xiàn)記載，但對(duì)于二者復(fù)配制劑的分析方法尚無(wú)報(bào)道。本文旨在建立一種可同時(shí)對(duì)25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑中的苯唑草酮和三氯吡氧乙酸進(jìn)行定量分析的高效液相色譜法。該方法操作簡(jiǎn)便、快速穩(wěn)定，適用于農(nóng)藥制劑中苯唑草酮和三氯吡氧乙酸的定量分析。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

美國(guó)Agilent 1220型高效液相色譜儀配紫外檢測(cè)器及色譜工作站(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；TU-1901型普析通用紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。

乙腈(色譜純)(Thermofisher)，85%磷酸(分析純)(國(guó)藥集團(tuán))，新蒸二次蒸餾水；苯唑草酮標(biāo)樣(純度≥99%)，三氯吡氧乙酸標(biāo)樣(純度≥99%)，北京勤誠(chéng)亦信科技開發(fā)有限公司提供；25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑，自制。

1.2 色譜條件

液相色譜柱：安捷倫ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，內(nèi)裝5 μm C18填充物)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(體積比50∶50)，流量：0.8 mL/min；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；進(jìn)樣體積：5.0 μL。在上述色譜操作條件下，苯唑草酮和三氯吡氧乙酸的保留時(shí)間分別約為3.6 min和9.7 min。苯唑草酮及三氯吡氧乙酸標(biāo)樣及制劑樣品的高效液相色譜圖分別見圖1、2。

圖1 苯唑草酮(進(jìn)樣濃度200 mg/L)及三氯吡氧乙酸(進(jìn)樣濃度800 mg/L)標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖2 25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑高效液相色譜圖

1.3 溶液的配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取0.02 g苯唑草酮標(biāo)樣(精確至0.000 02 g)或0.08 g三氯吡氧乙酸標(biāo)樣(精確至0.000 2 g)，分別置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，搖勻，脫氣后備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取0.4 g 25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑樣品(精確至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，搖勻，脫氣后備用。

1.4 測(cè)定

在以上色譜條件下，待儀器基線狀態(tài)穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針相對(duì)響應(yīng)值的復(fù)性，待各針標(biāo)樣相對(duì)響應(yīng)值的變化小于1.5%時(shí)按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液順序進(jìn)行分析測(cè)定。重，的

1.5 計(jì)算

將測(cè)得的2針試樣溶液及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的苯唑草酮或三氯吡氧乙酸峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(%)按下式計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)平均峰面積值；A2為樣品溶液中苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)平均峰面積值；m1為苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)標(biāo)樣的質(zhì)量(g)；m2為樣品的質(zhì)量(g)；P為標(biāo)樣中苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)

2 結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相的選擇

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)選用甲醇與水混合溶劑為流動(dòng)相時(shí)，苯唑草酮的出峰時(shí)間太早且峰形較差，拖尾嚴(yán)重，而采用乙腈-水混合溶劑為流動(dòng)相時(shí)，苯唑草酮的峰形明顯優(yōu)于以甲醇-水作為流動(dòng)相的峰形，且加入0.1%磷酸后其峰形和分離度均有明顯改善。當(dāng)流動(dòng)相中乙腈比例太高時(shí)，苯唑草酮及三氯吡氧乙酸出峰時(shí)間均提前，分離度變差。當(dāng)流速控制在0.8 mL/min，乙腈-0.1%磷酸水溶液的體積比為50∶50時(shí)，苯唑草酮和三氯吡氧乙酸的出峰時(shí)間相對(duì)適中，且峰形尖銳對(duì)稱，無(wú)拖尾，分離效果最好。

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

利用TU-1901型普析通用紫外可見分光光度計(jì)對(duì)苯唑草酮和三氯吡氧乙酸標(biāo)樣溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)紫外掃描，得到苯唑草酮或三氯吡氧乙酸的最大吸收波長(zhǎng)與相關(guān)濃度響應(yīng)值的紫外吸收光譜圖。經(jīng)驗(yàn)證，苯唑草酮和三氯吡氧乙酸在波長(zhǎng)254 nm下均有較大紫外吸收，且能夠得到較好的峰型，同時(shí)避免雜質(zhì)的干擾。因此本試驗(yàn)選定254 nm作為本分析方法的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.3 分析方法的線性相關(guān)性

分別稱取5個(gè)不同質(zhì)量的苯唑草酮、三氯吡氧乙酸標(biāo)樣于5個(gè)100 mL的容量瓶中，配制成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照本方法所確定的液譜條件進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表1。以苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)的進(jìn)樣質(zhì)量(x)為橫坐標(biāo)，以苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)同質(zhì)量濃度溶液的峰面積(Y)為縱坐標(biāo)作圖，得苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)的線性關(guān)系曲線，見圖3和圖4?？梢?，苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)的質(zhì)量濃度與其響應(yīng)值之間呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，其線性方程分別為y苯唑草酮=1 642.5x+8.046 2，y三氯吡氧乙酸=92.661x-4.406 2，相關(guān)系數(shù)分別為r2苯唑草酮=0.999 9，r2三氯吡氧乙酸=0.999 4。

表1 線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果

圖3 苯唑草酮進(jìn)樣質(zhì)量與峰面積之間的線性關(guān)系

2.4 方法的精密度

從同一批25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑樣品中準(zhǔn)確連續(xù)稱取5個(gè)試樣，在上述規(guī)定操作條件下進(jìn)行分析，試驗(yàn)結(jié)果見表2。由表2可見，苯唑草酮和三氯吡氧乙酸的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.012%和0.013%，變異系數(shù)分別為0.24%和0.06%，說明該方法的精密度良好，能滿足日常定量分析的要求。

2.5 方法的準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確稱取5個(gè)25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑試樣，加入一定量的苯唑草酮和三氯吡氧乙酸標(biāo)樣，按1.2的液相色譜條件進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。可見，苯唑草酮和三氯吡氧乙酸加標(biāo)回收率分別為99.0%～100.5%和99.3%～101.6%，平均回收率分別為99.5%和99.7%，說明該方法準(zhǔn)確度較高，可滿足定量分析要求。

圖4 三氯吡氧乙酸進(jìn)樣質(zhì)量與峰面積之間的線性關(guān)系

表2 25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑分析方法精密度試驗(yàn)

表3 25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑加標(biāo)回收率試驗(yàn)

3 結(jié)論

本文建立了采用高效液相色譜法同時(shí)快速測(cè)定混配制劑中苯唑草酮和三氯吡氧乙酸的方法。采用C18不銹鋼色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)和紫外檢測(cè)器，以乙腈-0.1%磷酸水溶液(體積比50∶50)為流動(dòng)相，同一色譜柱定量分析檢測(cè)25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑中的苯唑草酮和三氯吡氧乙酸2種有效成分，得到2種有效成分的加標(biāo)回收率和精密度相對(duì)較高，線性關(guān)系良好。該方法具有操作簡(jiǎn)便快速、檢測(cè)過程穩(wěn)定、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、分離效果好等特點(diǎn)，可用于25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑生產(chǎn)過程中產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)與質(zhì)量控制。