蔣 磊，陳 杰

(1.宿州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽 宿州 234000；2.安徽海大飼料有限公司，安徽 池州 247100)

凝結(jié)芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)為硬壁菌門屬兼性厭氧型革蘭氏陽性菌，具有乳酸菌屬產(chǎn)酸抑菌的能力，同時兼?zhèn)溲挎邨U菌屬耐高溫、適合制粒的強抗逆性及高黏附性等優(yōu)勢。自20世紀初首次被發(fā)現(xiàn)以來[1]，經(jīng)過數(shù)十年的篩選與改良，凝結(jié)芽孢桿菌的益生性及安全性得到了國內(nèi)外的普遍認可，現(xiàn)已被我國農(nóng)業(yè)部正式列入《飼料添加劑品種目錄(2013)》，成為替代抗生素的新型飼料添加劑。[2]有研究表明，凝結(jié)芽孢桿菌可分泌多種消化酶及活性物質(zhì)，促進機體養(yǎng)分消化吸收，提高生長速度；刺激機體免疫器官發(fā)育，提高免疫水平和抗病力[3]；增強機體血清中抗氧化酶活性，降低氧化應(yīng)激對細胞的損傷。[4]目前，凝結(jié)芽孢桿菌的應(yīng)用研究主要集中于AA肉雞，本試驗擬以817肉雞為模型，探究飼糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌對肉雞生長性能、免疫功能和血清指標的影響，旨在評價其“替抗”的作用效果，為進一步在畜禽生產(chǎn)中更合理的應(yīng)用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用凝結(jié)芽孢桿菌為粉劑，含活菌總數(shù)≥5.0×108cfu/g，由鄭州益富源生物有限公司提供；試驗動物為1日齡健康817肉仔雞(羅斯308父母代公雞×海蘭褐商品代母雞)120只，由安徽海大飼料有限公司合作農(nóng)戶提供。

1.2 試驗設(shè)計

試驗于2018年8月在安徽海大飼料有限公司合作養(yǎng)殖場進行，選取1日齡817肉雞120只，隨機分為3組，每組5個重復(fù)，每個重復(fù)8只。其中，對照組飼喂基礎(chǔ)日糧；抗生素組飼喂基礎(chǔ)日糧+50mg/kg金霉素、5mg/kg黃霉素；凝結(jié)芽孢桿菌組飼喂基礎(chǔ)日糧+300mg/kg凝結(jié)芽孢桿菌制劑。試驗期分1～21日齡和22～49日齡兩個階段，全程共49天，肉雞采用多層籠養(yǎng)，自由采食、飲水，常規(guī)免疫，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 指標測定

1.3.1 生長性能

第1、21和49日齡分別以每個重復(fù)為單位進行空腹稱重，試驗期間每天記錄耗料量，計算每階段平均日采食量、平均日增重、料重比指標。

1.3.2 血清生化指標

第21和49日齡從每個重復(fù)中隨機選取2只接近平均體重的健康肉雞翅下采血2mL，3000r/min離心后分離血清，分裝保存于-20℃冰箱待測。采用羅氏MODULP800全自動生化分析儀測定血清總蛋白、白蛋白、球蛋白和尿素含量，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.3.3 免疫器官指數(shù)

翅下采血后屠宰，分別摘取胸腺、脾臟和法氏囊，剔除附著組織后，用電子天平稱重，計算免疫器官(包括胸腺、脾臟、法氏囊)指數(shù)。免疫器官指數(shù)為免疫器官鮮重(mg)與肉雞空腹活重(g)的比值。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)利用Excel2013進行整理，采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行方差分析和多重比較，結(jié)果以平均值±標準差表示，以P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 凝結(jié)芽孢桿菌對肉雞生長性能的影響

由表2可知，1～21和22～49日齡，與對照組相比，凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞各生長性能指標均無顯著性差異(P>0.05)，但末體重、平均日采食量和平均日增重指標呈上升趨勢，料重比呈下降趨勢；與抗生素組相比，凝結(jié)芽孢桿菌組各指標變化趨勢不同，均無顯著性差異(P>0.05)。

表2 不同日齡各處理組肉雞生長性能指標

2.2 凝結(jié)芽孢桿菌對肉雞免疫器官指數(shù)的影響

由表3可知，21日齡，與對照組相比，凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞3種免疫器官指數(shù)均無顯著性差異(P>0.05)；與抗生素組相比，凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)差異顯著(P<0.05)，而法氏囊指數(shù)差異不顯著(P>0.05)。49日齡，與對照組相比，凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞脾臟指數(shù)顯著提高了45.12%(P<0.05)，而胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)無顯著差異(P>0.05)；與抗生素組相比，凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞3種免疫器官指數(shù)均差異顯著(P<0.05)。

表3 不同日齡各處理組肉雞免疫器官指數(shù)(mg·g-1)

2.3 凝結(jié)芽孢桿菌對肉雞血清生化指標的影響

由表4可知，21日齡，與對照組相比，凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞血清生化指標均無顯著性差異(P>0.05)；與抗生素組相比，凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞血清中球蛋白含量差異顯著(P<0.05)，而其他含量差異不顯著(P>0.05)。49日齡，與對照組相比，凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞血清中總蛋白和球蛋白含量分別提高了29.78%和40.84%，差異顯著(P<0.05)，而白蛋白和尿素含量無顯著性差異(P>0.05)；與抗生素組相比，凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞血清中總蛋白、白蛋白和球蛋白含量差異顯著(P<0.05)，而尿素含量無顯著性差異(P>0.05)。

表4 不同日齡各處理組肉雞血清生化指標

3 討論

3.1 凝結(jié)芽孢桿菌對肉雞生長性能的影響

試驗結(jié)果表明，飼糧中添加300mg/kg凝結(jié)芽孢桿菌使肉雞1～21和22～49日齡階段的生長性能有提高趨勢，但效果不顯著。王政等[5]在1～42日齡肉雞飲水中添加1×106cfu/mL凝結(jié)芽孢桿菌，結(jié)果顯示試驗期末肉雞平均日增重、料重比與對照組無顯著性差異。Wu等[6]與Li等[7]研究也顯示，飼糧中添加2×106cfu/g凝結(jié)芽孢桿菌對22～42日齡AA肉雞平均日增重和飼料轉(zhuǎn)化率未產(chǎn)生顯著影響。夏濤等[2]研究在抗生素基礎(chǔ)上添加3×106cfu/g凝結(jié)芽孢桿菌的飼喂效果，結(jié)果顯示凝結(jié)芽孢桿菌能一定程度提高肉雞末體重、平均日采食量和日增重，但均未達到顯著水平。而有些研究與本試驗結(jié)論不一致，趙娜等[8]研究報道，添加3×105cfu/g飼用凝結(jié)芽孢桿菌可顯著提高22～42日齡肉雞平均日采食量和日增重。Bami等[9]研究表明，飼糧中添加100mg/kg凝結(jié)芽孢桿菌可顯著提高肉雞體增重，降低料重比。以上研究結(jié)果的差異可能與凝結(jié)芽孢桿菌的添加量不同有關(guān)，林麗華等[10]研究證實了這一點，飼糧中添加1×105～3×105cfu/g凝結(jié)芽孢桿菌3種劑量水平，結(jié)果顯示，其中2×105cfu/g添加劑量的肉雞平均日增重和飼料轉(zhuǎn)化率提高最顯著。曹廣軍等[11]也認為，凝結(jié)芽孢桿菌對肉雞生長性能的改善效果與添加量存在依賴性。

3.2 凝結(jié)芽孢桿菌對肉雞免疫器官指數(shù)的影響

胸腺、脾臟和法氏囊是家禽參與中樞、外周和體液免疫的重要器官，其器官指數(shù)可用于評價機體的免疫狀況，即指數(shù)越高，表明免疫功能越強。在本試驗條件下，抗生素組肉雞免疫器官指數(shù)均存在一定程度的降低，其中49日齡肉雞脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)顯著低于對照組。周艷[12]與李虎等[13]在飼糧中添加不同濃度的硫酸黏桿菌素，結(jié)果顯示試驗組肉雞胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)均顯著降低，且隨著抗生素添加濃度的增加呈下降趨勢，這表明飼糧中添加抗生素可抑制肉雞免疫器官的發(fā)育，抑制程度與添加濃度呈正相關(guān)。本試驗結(jié)果顯示，與對照組相比，除42日齡肉雞脾臟指數(shù)外，飼糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌對肉雞其他免疫器官指數(shù)均無顯著影響。王藝茹等[14]研究表明，添加3×106cfu/g凝結(jié)芽孢桿菌對42日齡育成雞的胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)無顯著差異，這與宮秀燕等[15]報道一致，4×105cfu/g飼用凝結(jié)芽孢桿菌對35日齡肉雞免疫器官指數(shù)無顯著影響。這表明凝結(jié)芽孢桿菌促進生長初期肉仔雞免疫器官發(fā)育的效果不明顯，可能由于生長初期免疫系統(tǒng)未成熟，細胞分化緩慢，導(dǎo)致差異不顯著。然而，Khalaifa 等[16]與趙娜等[8]研究表明，飼用凝結(jié)芽孢桿菌可顯著提高35和42日齡肉雞胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)或法氏囊指數(shù)。這可能也與生長性能相似，研究結(jié)論的差異與凝結(jié)芽孢桿菌的添加劑量相關(guān)，適量添加有利于肉雞免疫功能的增強。

3.3 凝結(jié)芽孢桿菌對肉雞血清生化指標的影響

家禽血清總蛋白含量可反映機體蛋白質(zhì)攝入及代謝狀況，主要分為白蛋白和球蛋白。白蛋白作為重要的運輸?shù)鞍?，具有運輸營養(yǎng)物質(zhì)，維持血液滲透壓和穩(wěn)定免疫球蛋白等功能，與肝臟機能密切相關(guān)[10]；球蛋白參與機體體液免疫。趙娜等[8]研究顯示，飼糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌顯著提高21和42日齡肉雞血清總蛋白和球蛋白含量，而白蛋白無顯著變化，與林麗花等[10]結(jié)論基本一致。曾麗莉等[17]在肉鴨飼糧中添加300mg/kg凝結(jié)芽孢桿菌，結(jié)果表明與對照組相比，21日齡肉鴨血清總蛋白含量顯著提高，而21和42日齡白蛋白含量均無顯著性差異。王向榮等[18]研究不同水平凝結(jié)芽孢桿菌對蛋鴨血清生化指標的影響，飼喂28天后顯示蛋鴨血清總蛋白、白蛋白和球蛋白含量均無顯著變化。本試驗結(jié)果顯示，與對照組相比，凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞血清白蛋白含量無顯著變化，球蛋白含量顯著提高，與前人研究結(jié)果基本一致。這說明飼糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌可顯著提高肉雞血清球蛋白含量，而對白蛋白含量無顯著影響，可能由于凝結(jié)芽孢桿菌能夠增強機體特異性的體液免疫，顯著提高血清中IgA、IgG和IgM等免疫球蛋白的含量。

尿素是蛋白質(zhì)分解代謝的主要產(chǎn)物，血清中尿素含量直接反映家禽蛋白質(zhì)代謝水平，即含量越低表明蛋白氮利用率越高。[19]本試驗結(jié)果顯示，與對照組相比，凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞49日齡血清總蛋白含量顯著提高，而尿素含量無顯著變化，說明血清中尿素的含量一定程度的降低了，這與林麗花等[10]研究結(jié)果一致，表明飼料中添加凝結(jié)芽孢桿菌可有效促進肉雞蛋白質(zhì)的利用，增強合成代謝，降低分解代謝。

4 結(jié)論

在本試驗條件下，飼糧中添加300mg/kg凝結(jié)芽孢桿菌可顯著提高49日齡肉雞脾臟指數(shù)，血清總蛋白和球蛋白的含量，促進蛋白質(zhì)的合成代謝，但對肉雞的生長性能無顯著性影響。