李 孟 張靖柯 石靜亞 湯迎迎 孫彥君

1.河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，河南鄭州 450046；2.呼吸疾病中醫(yī)藥防治省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心，河南鄭州 450046

菊花（Chrysanthemum morifolium Ramat.）為菊科植物菊的干燥頭狀花序，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。其味甘、苦，性微寒，主歸肺、肝經(jīng)，具有疏散風(fēng)熱、平肝明目、清熱解毒的功效[1-2]。菊花作為我國(guó)傳統(tǒng)的一味中藥材，種類(lèi)繁多，分布廣泛，具有很高的藥用價(jià)值。菊花在藥用和保健方面都有很好的效果，是我國(guó)衛(wèi)生部發(fā)布的第一批藥食兩用藥材。目前國(guó)內(nèi)對(duì)菊花的應(yīng)用研究較多，對(duì)菊花莖葉的綜合利用研究相關(guān)報(bào)道較少，大量菊花莖葉因其藥用保健價(jià)值未能充分開(kāi)發(fā)利用而遭丟棄。

2015版《中華人民共和國(guó)藥典》新增“懷菊花”這一品種，與“亳菊”“滁菊”“貢菊”“杭菊”共同作為“菊花”入藥，肯定了懷菊的藥用地位。文獻(xiàn)研究表明，懷菊花及其莖葉均含有以單萜類(lèi)和倍半萜類(lèi)及其含氧衍生物為主的揮發(fā)油類(lèi)成分、黃酮類(lèi)成分等[3-4]。為了全面探究懷菊花及其莖葉的化學(xué)成分，本研究采用索氏提取法提取其脂溶性成分，并運(yùn)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）法對(duì)其脂溶性成分組成進(jìn)行鑒定分析，同時(shí)采用清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基能力的方法測(cè)定其脂溶性成分的抗氧化活性，以期為懷菊花整株資源的綜合有效利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent7890/7000B三重串聯(lián)四級(jí)桿氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)安捷倫公司）；BT-25S型十萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）；AB204-N型萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)梅特勒公司）；索氏提取器（南京金正玻璃儀器廠）；調(diào)溫試電熱套（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；N1100VWD型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海愛(ài)朗儀器有限公司）。分析純石油醚（沸程60～90℃）、甲醇、正己烷無(wú)水硫酸鈉、三氟化硼均為分析純。

1.2 材料

菊花及其莖葉采自河南焦作，經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)董誠(chéng)明教授鑒定為菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的花和莖葉，晾干，待用。

2 方法

2.1 樣品制備

取1.2項(xiàng)下的樣品，粉碎成粗粉備用。稱(chēng)取各樣品10g，以石油醚為溶劑，80℃索氏提取6h，提取液減壓濃縮，得提取物，菊花為淺黃色油狀物，菊花莖葉為淺綠色油狀提取物。加入0.5mol/L氫氧化鉀甲醇溶液，60℃恒溫水浴30min，冷卻后加入三氟化硼甲醇溶液5mL，于60℃水浴，加熱回流5min，冷卻，加正己烷和飽和氯化鈉水溶液各2mL，取上清液加無(wú)水Na2SO4干燥，取樣分析。

2.2 GC-MS分析

2.2.1 氣相色譜條件 色譜柱為HP-FFAP型石英毛細(xì)管柱（30mm×0.25mm，0.25μm），載氣為高純氦氣（99.999%），氦氣流速1.0mL/min；進(jìn)樣口溫度為240℃；分流；升溫程序?yàn)?0℃保持2min，按10℃/min升溫至190℃，保持2min，以2℃/min升溫至230℃，保持15min，氣化室溫度為280℃，接口溫度為240℃。

2.2.2 質(zhì)譜條件 離子源：電子轟擊源，電子能量70eV；掃描范圍m/z30～600AMU，離子源溫度230℃，溶劑延遲：4.5min，GC-MS接口溫度240℃。

2.3 數(shù)據(jù)處理

用NIST98系統(tǒng)譜庫(kù)自動(dòng)檢索組分的質(zhì)譜，結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)，分別與八峰索引、EPA/NIH相對(duì)照，匹配度均在80%以上?；衔锏亩渴褂肏ewlettPackard軟件按峰面積歸一化法計(jì)算相對(duì)含量[5]。

2.4 DPPH法測(cè)定抗氧化能力

采用清除自由基的方法測(cè)定脂溶性成分的抗氧化能力[6]：DPPH自由基清除活性測(cè)定采用96孔板法，不同濃度的樣品液及維生素C各取100μL放置于96孔板中，再添加100μL DPPH自由基溶液，在室溫中反應(yīng)30min后采用酶標(biāo)儀測(cè)定其在517nm處的吸光度值。清除率的計(jì)算公式為：

清除率=[（A0-Ai）/A0]×100%

其中，A0表示空白組吸光度，Ai為樣品組的吸光度，所有測(cè)定操作重復(fù)3次，取平均值。

3 結(jié)果

3.1 懷菊花及其莖葉脂溶性成分種類(lèi)比較分析

依照上述條件對(duì)懷菊花及其莖葉的脂溶性成分進(jìn)行分析，得出的總離子流圖見(jiàn)圖1，其脂溶性成分分析結(jié)果見(jiàn)表1。從懷菊花和懷菊莖葉中共鑒定出69個(gè)脂溶性成分，其中懷菊花鑒定出56個(gè)成分，檢出成分相對(duì)含量占91.19%；懷菊莖葉鑒定出37個(gè)成分，檢出成分相對(duì)含量占85.10%。

懷菊花的脂溶性成分主要有脂肪酸類(lèi)（45.70%）、烷烴類(lèi)（24.10%）、萜類(lèi)（15.41%）以及少量的醇類(lèi)、醛類(lèi)、酮類(lèi)等，主要成分（相對(duì)含量＞5.00%）有棕櫚酸甲酯（10.41%）、肉豆蔻酸甲酯（7.85%）、二十一烷（9.32%）、二十五烷（6.66%）、亞油酸甲酯（6.57%）；懷菊莖葉的脂溶性成分主要是脂肪酸類(lèi)成分（76.87%）以及少量的萜類(lèi)等，其中不飽和脂肪酸占懷菊莖葉脂溶性成分的44.15%，飽和

脂肪酸占懷菊莖葉脂溶性成分的32.72%，主要成分（相對(duì)含量＞5%）為亞麻酸甲酯（29.16%）、棕櫚酸甲酯（18.47%）和亞油酸甲酯（11.68%）。由此看出，懷菊花和其莖葉的脂溶性成分差異較大。而懷菊花和莖葉的脂溶性成分，共有峰是24個(gè)，分別占其相對(duì)含量的50.56%和81.78%，說(shuō)明其脂溶性成分同時(shí)也具有一定的相似性。

表1 懷菊花及其莖葉脂溶性成分GC-MS分析

續(xù)表

表2 懷菊花及其莖葉脂溶性成分對(duì)DPPH自由基清除能力（%）

3.2 懷菊花及其莖葉脂溶性成分抗氧化活性研究

清除DPPH自由基能力的試驗(yàn)結(jié)果提示，懷菊花和莖葉脂溶性成分對(duì)DPPH有一定的清除作用，且隨著濃度的增加，清除率也隨之上升，有明顯的量效關(guān)系，見(jiàn)表2，其對(duì)DPPH自由基的半數(shù)清除率IC50分別為9.76mg/mL和7.96mg/mL。

從懷菊花和懷菊莖葉中，共鑒定出69個(gè)脂溶性成分，共有成分24種，懷菊花的脂溶性成分主要為脂肪酸類(lèi)、烷烴類(lèi)和萜類(lèi)，懷菊莖葉主要是脂肪酸類(lèi)?；钚越Y(jié)果提示，其脂溶性成分具有一定的抗氧化活性。

4 討論

菊花始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，具有疏散風(fēng)熱、平肝明目、清熱解毒的功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，菊花具有改善心肌營(yíng)養(yǎng)、去除活性氧自由基、加強(qiáng)毛細(xì)血管的抵抗力、降低血液中脂肪和膽固醇的含量、抑制腫瘤、延緩衰老及增強(qiáng)人體免疫力等功效。懷菊花作為“四大懷藥”之一，主產(chǎn)于河南武陟、溫縣地區(qū)，種植的歷史較悠久，為河南道地藥材[7]。課題組前期對(duì)懷菊花的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從中得到了一系列愈創(chuàng)木烷型倍半萜內(nèi)酯類(lèi)、黃酮類(lèi)、糖苷類(lèi)等化合物[8-10]，劉曉薇等[11]對(duì)懷菊花的揮發(fā)性成分進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)懷菊花中的揮發(fā)性成分主要為單萜類(lèi)和倍半萜類(lèi)及其含氧衍生物。目前對(duì)菊花莖葉化學(xué)成分的研究主要集中在揮發(fā)油[12]、黃酮類(lèi)、酚酸類(lèi)及多糖類(lèi)成分等方面，研究和開(kāi)發(fā)利用相對(duì)較少，其資源的處置多為棄去或做飼料用，造成環(huán)境污染和資源浪費(fèi)。

本研究采用GC-MS對(duì)懷菊花和其莖葉的脂溶性成分進(jìn)行分析，從懷菊花和懷菊莖葉中共鑒定出69個(gè)脂溶性成分，懷菊花鑒定出56個(gè)，懷菊莖葉鑒定出37個(gè)，共有成分24個(gè)，分別占其相對(duì)含量的50.56%和81.78%。懷菊花的主要成分是棕櫚酸、肉豆蔻酸、二十一烷、二十五烷、亞油酸等；懷菊莖葉的主要成分是亞麻酸（29.16%）、棕櫚酸（18.47%）、亞油酸（11.68%）等。亞麻酸作為人體必需脂肪酸，只能通過(guò)食物攝取，是合成前列腺素的前體，參與脂肪代謝，與視力、腦發(fā)育和行為發(fā)育有關(guān)；棕櫚油酸對(duì)肥胖癥、糖尿病和脂肪肝等具有一定的療效，且對(duì)傷口發(fā)炎具有抑制效果以及改善皮膚光滑度等[13]；亞油酸是人體自身不能合成但必需的不飽和脂肪酸，具有降低血脂、防止動(dòng)脈粥樣硬化及預(yù)防脂肪肝、抑制血栓形成的功效[14]。另外，懷菊花中鑒定出單萜和倍半萜類(lèi)化合物20余種（15.41%）、烷烴類(lèi)7個(gè)（24.1%），這是與懷菊莖葉的主要差異成分，說(shuō)明兩者的脂溶性成分具有一定的差異性。

劉東順等[15]對(duì)菊花、葉、莖的水提物和醇提物抗氧化活性的研究表明，菊花、葉和莖提取物均有較強(qiáng)的抗氧化活性，菊葉抗氧化作用與菊花相當(dāng)。本研究采用DPPH法測(cè)定懷菊花和莖葉脂溶性成分的抗氧化能力，結(jié)果提示，懷菊花和莖葉的脂溶性成分均具有抗氧化活性。本研究從化學(xué)成分的角度，進(jìn)一步說(shuō)明懷菊莖葉作為天然抗氧化劑有較好的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值，為懷菊資源的充分利用提供科學(xué)依據(jù)。