辛思源 楊志新 郭建恩 林鳳 李春華

摘 要：本研究觀察電針對類痛經模型大鼠的鎮(zhèn)痛效應、以及血漿血栓素B2和六酮前列腺素F1α的影響，來探討針刺對胞宮疼痛緩解作用的機制，對“三陰交-懸鐘”的特異性進行初步探討。

關鍵詞：電針;三陰交-懸鐘;痛經;扭體反應;血栓素B2;六酮前列腺素F1α

一、材料與方法

（一）實驗動物與分組

本動物實驗選用48只清潔級健康雌性SD大鼠，鼠齡3個月，體重為（240±20）g，性成熟且未交配。飼養(yǎng)期給予普通清潔級飼料和自由飲水，室溫為（20±1）℃，濕度為（45±5）%，日光燈照射。采用隨機方法將大鼠分為：對照組、模型組、三陰交組、懸鐘組、“三陰交-懸鐘”組、非穴組，共6組，每組8只。

（二）主要儀器與實驗試劑

G6805-Ⅱ型電針儀;一次性針灸針;5415R高速離心機;MDF-u50A型超低溫冰箱;苯甲酸雌二醇注射液;縮宮素注射液;6-酮-前列腺素F1α放免試劑盒;血栓素B2放免試劑盒;乙二胺四乙酸及抑膚酶。

（三）實驗造模

選擇處在動情間期的大鼠，來制備實驗性類痛經大鼠模型。模型組及各電針組要連續(xù)10d于皮下注射苯甲酸雌二醇，期間第一、第10天每只大鼠為皮下給藥0.5mg，余下日為0.2mg，待第10天注射苯甲酸雌二醇1h后給予腹腔注射縮宮素0.2mL/只。對照組：每日每只大鼠皮下注射同等劑量的生理鹽水，待第10天皮下注射生理鹽水1h后，每只大鼠予以腹腔注射生理鹽水0.2mL。

（四）實驗取穴及針刺方法

實驗取穴：根據大鼠的生理特點、形態(tài)以及解剖的位置，依據《實驗針灸學》中穴位的定位標準，選取相對穴“三陰交-懸鐘”。三陰交穴：于大鼠后肢內踝尖上10mm處;懸鐘穴：于大鼠后肢外踝尖上10mm處，與三陰交穴位置相對;非穴：與三陰交、懸鐘穴處于同一水平，旁開對照點，分別于兩穴左側旁開3mm處。每組皆為雙側選穴。

電針方法：三陰交、懸鐘和非穴均為直刺3mm左右，相對穴“三陰交-懸鐘穴”為透刺，透刺方向為三陰交透懸鐘，且要于該穴位近心端約旁開2-3mm處，再行一針，淺入皮膚即可，在兩針之間放置一棉球以防止發(fā)生短路，并用膠布固定。分別使兩針連電針儀正極、負極，刺激頻率為2/15Hz，強度為1mA，20min。在實驗開始開始后的第1、3、5、7d進行實驗干預，共4次。對照組與模型組以同樣的方法和時間固定，不給予電針處理。

（五）大鼠扭體反應分級

扭體反應是目前公認的評價指標，將扭體行為分為0～3級。大鼠前爪平放于盒底的正常探查行為視為0級;大鼠身體斜向一邊視為1級;大鼠后肢伸展、后爪背屈的同時軀體伸展、并伴有頻繁盆向骨側旋轉視為2級;大鼠腹部肌肉收縮、后肢后伸視為3級。需記錄實驗開始20min內大鼠的扭體評分、扭體潛伏期。扭體總分為：0級×0分+1級×1分+2級×2分+3級×3分，扭體潛伏期：注射縮宮素后直至出現(xiàn)扭體反應的時間段。

（六）實驗取材及檢測方法

將大鼠斷頭后取血，每只大鼠取血2mL，將其血液放置于抗凝試管（30μL EDTA，40μL抑肽酶）中，經過低溫離心（4℃，3500r/min），15min后，再將其血漿放置于-20℃環(huán)境中，以保存?zhèn)溆?。血漿中TXB2及其6-keto-PGF1α的含量分別采用常規(guī)放射免疫法來測定。

（七）統(tǒng)計分析

本實驗數(shù)據應用SPSS21.0進行分析，基礎數(shù)據用均數(shù)±標準差（x±s）來表示。各組間差異采用單因素方差分析或非參數(shù)檢驗進行比較，以P<0.05或P<0.01作為差異有統(tǒng)計學意義。

二、實驗結果

（一）電針對扭體的影響

與對照組相比，模型組的扭體評分值明顯增高，扭體潛伏期時長明顯縮短（P<0.01），證實模型大鼠已成功制備。與對照組比較，各電針組（除“三陰交-懸鐘”組外）扭體評分值明顯增高，扭體潛伏期時長明顯縮短（P<0.01，P<0.01）。與模型組相比，各電針組的扭體評分值明顯減少，扭體潛伏期時長明顯延長（P<0.01，P<0.01）。

各電針組之間比較，“三陰交-懸鐘”組、三陰交組的扭體評分較懸鐘組、非三陰交-懸鐘組明顯降低（P<0.01），“三陰交-懸鐘”組、三陰交組、懸鐘組扭體潛伏期較非三陰交-懸鐘組明顯延長（P<0.05，P<0.01）。詳見表1。

（二）電針對血漿TXB2、6-keto-PGF1α的含量以及二者比值的影響

和對照組相比，模型組血漿TXB2的含量、TXB2/6-keto-PGF1α的比值顯著增高（P<0.01），血漿6-keto-PGF1α的含量顯著降低（P<0.01）;各電針組的血漿TXB2（除“三陰交-懸鐘”組）、TXB2/6-keto-PGF1α的比值顯著增高（P<0.01），血漿6-keto-PGF1α的含量顯著降低（P<0.01）。

和模型組相比，各電針組血漿TXB2的含量、TXB2/6-keto-PGF1α的比值（除“三陰交-懸鐘”組）顯著降低（P<0.01），“三陰交-懸鐘”組6-keto-PGF1α的含量顯著增高（P<0.01），其他各電針組血漿6-keto-PGF1α的含量無明顯變化（P>0.05）。

各電針組間相比較，“三陰交-懸鐘”組、三陰交組、懸鐘組血漿中TXB2的含量、TXB2/6-keto-PGF1α的比值較非三陰交-懸鐘組顯著降低（P<0.01）;“三陰交-懸鐘”組TXB2的含量較三陰交組顯著降低（P<0.05）;“三陰交-懸鐘”組血漿TXB2/6-keto-PGF1α的比值較三陰交組和懸鐘組顯著降低（P<0.01）;“三陰交-懸鐘”組和三陰交組血漿中6-keto-PGF1α的含量較非三陰交-懸鐘組顯著增高（P<0.01），“三陰交-懸鐘”組血漿6-keto-PGF1α的含量較三陰交組、懸鐘組顯著增高（P<0.01）。詳見表2。

三、討論

文獻研究顯示，痛經是針灸治療婦產科疾病中應用最多的病種[1]，且三陰交-懸鐘的聯(lián)合應用對于痛經具有較好的治療效果。本實驗結果提示：在痛經大鼠的血液中，其內在的血小板存在激活、釋放反應的相對增強，從而可以導致血漿中TXB2升高，致使二者的比值TXB2/6-keto-PGF1α也隨之失衡，以致子宮內缺血缺氧，痛經發(fā)生。

各電針組血漿中TXB2的含量、及其二者的比值TXB2/6-keto-PGF1α顯著降低，可能是由于電針可以降低血漿中TXB2的含量，從而調節(jié)二者的比值以抑制血漿中血小板的聚集，使血管痙攣狀態(tài)得以改善，以緩解疼痛?！叭幗?懸鐘”組中TXB2的含量較三陰交組較明顯著降低，可能是由于電針相對穴“三陰交-懸鐘”可調節(jié)血管收縮和血管舒張，并通過血管的舒縮物質對TXB2和6-keto-PGF1α兩者的平衡加以調節(jié)，使其作用效果較單純針刺單一穴位更為明顯。

有研究結果表明：相對穴“三陰交-懸鐘”具有協(xié)同增效作用[2]。電針三陰交-懸鐘能夠較為明顯的降低TXB2的含量以及TXB2/6-keto-PG F1α的比值，從而調整子宮內在的微環(huán)境，以緩解痛經。

本實驗初步證實：電針相對穴“三陰交-懸鐘”可調節(jié)血管舒張、收縮物質，且與其他單穴相比，相對穴具有一定的特異性，從而進一步證實經穴效應的存在，且“三陰交”“懸鐘”二者在解剖位置上陰陽表里相對，“三陰交-懸鐘”屬相對穴。故在實驗層面進一步提示“相對穴”與“經穴效應”的內在關系。

參考文獻：

[1]辛思源，龐嘉，郭建恩，等.從經穴效應角度探討相對穴三陰交-懸鐘的內在關系[J].遼寧中醫(yī)雜志，2017，44（12）：2631-2633.

[2]趙雅芳，李春華，嵇波，等.電針三陰交、血海對痛經模型大鼠子宮微循環(huán)的影響[J].微循環(huán)學雜志，2011，（2）：10-14.

基金項目：2018年4月河北省高等學?？茖W技術研究項目：基于三陰交-懸鐘對疼痛的調控作用探討相對穴與經穴效應的相關性（No.NQ2018082）

作者簡介：辛思源（1986—），女，漢族，河北承德人，碩士，講師，研究方向：經穴主治規(guī)律研究。

通訊作者：李春華（1982—），女，漢族，河北保定人，博士，副主任醫(yī)師，研究方向：穴位效應特異性研究。