張山佳

（許昌學(xué)院體育學(xué)院，河南 許昌 461000）

雙孢蘑菇（Agaricus bisporus） 是蘑菇科（Agaricaceae） 蘑菇屬（Agaricus） 真菌，又名白蘑菇、紐扣蘑菇、洋蘑菇等[1]。因其是次級(jí)同宗結(jié)合的食用菌，每個(gè)擔(dān)孢子含有2個(gè)減數(shù)分裂不同交配型細(xì)胞核，多數(shù)擔(dān)子上產(chǎn)生2個(gè)擔(dān)孢子因而得名“雙孢”。雙孢蘑菇是一種被世界廣泛認(rèn)可的蘑菇，很早就已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了人工栽培和工廠化栽培，是世界上栽培國(guó)家最多、面積最大的一種食用菌。目前在我國(guó)雙孢蘑菇的產(chǎn)量和消費(fèi)量正逐年增長(zhǎng)，已經(jīng)成為了重要的食用菌品種[2]。雙孢蘑菇肉厚、潔白光滑，具有特殊的氣味，口感和味道受到世界各地人們的認(rèn)可，常被水漬、鹽漬或罐裝成各類(lèi)食材，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值也很高。富含多種氨基酸和蛋白質(zhì)，還有銅、磷、硒、鉀和鋅等微量元素，而且雙孢蘑菇的熱量很低，但確能夠提供非常高水平的多糖、類(lèi)黃酮和多酚類(lèi)化合物和抗氧化劑，對(duì)高血壓等心血管疾病、腫瘤和炎癥等均有一定的療效[3]。目前，雙孢蘑菇的藥用價(jià)值正在被不斷挖掘，其富含的多糖等生物活性物質(zhì)在現(xiàn)代運(yùn)動(dòng)保健和提高運(yùn)動(dòng)免疫力方面受到了廣泛的關(guān)注[4]。目前，對(duì)雙孢蘑菇的特殊鮮味和生物活性物質(zhì)的研究受到了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。針對(duì)雙孢蘑菇的生物活性成份對(duì)運(yùn)動(dòng)免疫力的影響開(kāi)展研究，探討雙孢蘑菇提取液有效成分對(duì)機(jī)體運(yùn)動(dòng)的抗氧化能力和免疫力的作用和影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鮮雙孢蘑菇采購(gòu)自河南泌陽(yáng)縣真菌研究開(kāi)發(fā)有限公司的“享菇事”品牌，開(kāi)傘度≤7、菌蓋直徑≥3.0 cm均勻、菌蓋厚度≥1.2cm、殘缺菇≤1%、雜質(zhì)≤0.1%、水分≤90%。

蒸餾水、亞硫酸鈉（分析純），天津金匯太亞化學(xué)試劑有限公司；檸檬酸、D-異抗壞血酸鈉（有效物質(zhì)含量≥99.6%），鄭州裕和食品添加劑有限公司；丙二醛（MDA） 試劑盒、超氧化物岐化酶（SOD）試劑盒，上海優(yōu)選生物科技有限公司。

1.2 儀器設(shè)備

FA1204N型電子分析天平，北京海天友誠(chéng)科技有限公司；SCM800型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)，世邦工業(yè)科技集團(tuán)股份有限公司；DZF-6050MBE型真空干燥箱，北京海天友誠(chéng)科技有限公司；ASC04D型有機(jī)玻璃離子交換柱，新鄉(xiāng)市正安過(guò)濾設(shè)備有限公司；BW-TDM709型動(dòng)物實(shí)驗(yàn)跑臺(tái)，上海軟隆科技發(fā)展有限公司；HT82-BTS-330全自動(dòng)生化分析儀，北京海富達(dá)科技有限公司；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)UV-1800PC，上海美譜達(dá)儀器有限公司。

1.3 雙孢蘑菇粉及其提取液的制備

試驗(yàn)所用雙孢蘑菇粉提取采用黃凡等人提出的熱風(fēng)干燥工藝制備[5]。將新鮮的雙孢蘑菇清洗干凈后，切成2 cm左右厚度的薄片備用。將蒸餾水過(guò)離子交換柱去除水中的離子，取100 g去離子蒸餾水，加入D-異抗壞血酸鈉0.5 g，檸檬酸、亞硫酸鈉各0.2 g混合均勻后加入雙孢蘑菇切片，浸泡2 h后取出用蒸餾水沖洗2遍，放入烘箱中60℃烘干2 h，取出用粉碎機(jī)打成粉末，過(guò)100目篩，即得雙孢蘑菇粉。將雙孢蘑菇粉按1∶10的料液比與蒸餾水混合制成雙孢蘑菇提取液備用。

1.4 試驗(yàn)分組

試驗(yàn)用SPF級(jí)小鼠購(gòu)自上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部），動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滬） 2018-0007；體重 （22.2±3.5） g，雌雄各半，按照GB 14925-2010標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定配制小鼠飼養(yǎng)條件和設(shè)施，按照GB 14924.3-2010配制小鼠飼料，保證小鼠生長(zhǎng)所需的各種營(yíng)養(yǎng)，嚴(yán)格按照SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)小鼠的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后對(duì)小鼠進(jìn)行為期3 d的跑臺(tái)適應(yīng)性訓(xùn)練，將BW-TDM709型動(dòng)物實(shí)驗(yàn)跑臺(tái)的跑臺(tái)傾角設(shè)置為-15°，不使用電刺激，跑臺(tái)的速度設(shè)置為15 m·min-1，讓小鼠進(jìn)行跑臺(tái)適應(yīng)性訓(xùn)練，一次可進(jìn)行6只小鼠的跑臺(tái)訓(xùn)練，選擇能夠連續(xù)正常跑步15 min以上的小鼠，按體重隨機(jī)分成3組，每組10只。

高劑量組每天灌胃0.3 mL的雙孢蘑菇提取液；中劑量組每天灌胃0.2 mL的雙孢蘑菇提取液；低劑量組每天灌胃0.1 mL的雙孢蘑菇提取液；空白對(duì)照組灌胃同樣體積蒸餾水。每天小鼠灌胃結(jié)束后1 h進(jìn)行跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)。使用適應(yīng)性訓(xùn)練時(shí)的系統(tǒng)參數(shù)，利用跑臺(tái)的自我保護(hù)設(shè)置。根據(jù)試驗(yàn)小鼠的實(shí)際跑步時(shí)間，自動(dòng)判別并記錄小鼠的力竭跑步時(shí)間。以上灌胃處理及跑步訓(xùn)練連續(xù)進(jìn)行4周。

1.5 小鼠血液指標(biāo)檢測(cè)

末次跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)結(jié)束后，對(duì)小鼠頜下用酒精消毒后固定，用采血針進(jìn)行頜下一股靜脈采血。每次采血量控制在0.2 mL左右，如一次采血量不足可反復(fù)進(jìn)行，采血完成后再次用酒精消毒止血。將采集的血樣用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行血液紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白HGB指標(biāo)的檢測(cè)。

雙孢蘑菇提取液的抗氧化性通過(guò)檢測(cè)血液中丙二醛（MDA）的含量來(lái)完成。利用氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸，生成過(guò)氧化脂質(zhì)后逐漸分解，生成丙二醛，檢測(cè)血液中的丙二醛含量即可得到脂質(zhì)氧化的水平，從而評(píng)價(jià)雙孢蘑菇提取液的抗氧化能力。丙二醛測(cè)試盒的工作原理是：丙二醛與硫代巴比妥酸（Thiobarbituric Acid，TBA）縮合，生成紅色產(chǎn)物，在532 nm有吸收峰，進(jìn)行比色后可估測(cè)樣品中過(guò)氧化脂質(zhì)的含量；同時(shí)測(cè)定600 nm下的吸光度，利用532 nm與600 nm下的吸光度的差值計(jì)算MDA的含量。

同時(shí)通過(guò)超氧化物歧化酶（SOD） 來(lái)進(jìn)一步評(píng)價(jià)雙孢蘑菇提取液的抗氧化性，超氧化物歧化酶廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成過(guò)氧化氫和氧氣。超氧化物歧化酶不僅是超氧化物陰離子的催化酶，也是過(guò)氧化氫的主要生成酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)試盒的工作原理是：通過(guò)黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子，超氧陰離子再反應(yīng)產(chǎn)生水溶性染料甲臜，后者在450 nm處有吸收；而超氧化物歧化酶可以有效抑制超氧陰離子，從而抑制了甲臜的形成；反應(yīng)液黃色越深，說(shuō)明超氧化物歧化酶的活性越低，反之則活性越高。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 雙孢蘑菇提取液對(duì)小鼠血液RBC、HGB含量的影響

雙孢蘑菇提取液后對(duì)小鼠RBC、HGB含量的影響見(jiàn)表1。

表1 雙孢蘑菇提取液對(duì)小鼠血液RBC、HGB含量的影響Tab.1 Effect of Agaricus bisporus powder on RBC and HGB content in blood of mice

由表1可知，3組小鼠紅細(xì)胞含量與對(duì)照組相比均有明顯的上升，高劑量組、中劑量組、低劑量組與對(duì)照組相比分別上升了10.39%、19.57和29.47%，灌胃劑量與紅細(xì)胞含量呈一定的正比量?jī)r(jià)關(guān)系。中劑量組和低劑量組小鼠血紅蛋白含量與對(duì)照組相比分別上升了3.53%和2.75%，影響不大，但高劑量組血紅蛋白含量上升了16.02%。試驗(yàn)結(jié)果顯示高劑量雙孢蘑菇提取液的灌胃對(duì)與血紅蛋白含量影響較大，而中劑量組和低劑量組基本沒(méi)有影響。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，3個(gè)組的紅細(xì)胞數(shù)量均有所增加，分析其主要原因是運(yùn)動(dòng)量的加大，一方面促使人體產(chǎn)生更多的紅細(xì)胞來(lái)增加攜氧量；另一方面，雙孢蘑菇提取液為體內(nèi)紅細(xì)胞的新陳代謝提供了營(yíng)養(yǎng)，修復(fù)了部分因運(yùn)動(dòng)而受損的紅細(xì)胞，從而增加了體內(nèi)紅細(xì)胞的總量。從而提升了肌肉的運(yùn)動(dòng)能力。

2.2 雙孢蘑菇提取液對(duì)小鼠抗氧化能力的影響

雙孢蘑菇提取液對(duì)小鼠抗氧化能力的影響見(jiàn)表2。

表2 雙孢蘑菇提取液對(duì)小鼠抗氧化能力的影響Tab.2 Effect of Agaricus bisporus powder on the antioxidant capacity of mice

由表2可知，低劑量組與對(duì)照組相比MDA含量略微上升了2.56%，中劑量組與對(duì)照組相比MDA含量略微下降了1.87%，而高劑量組的MDA含量與對(duì)照組相比明顯下降達(dá)13.29%；高劑量組、中劑量組、低劑量組與對(duì)照組相比SOD含量均有所上升，高劑量組、中劑量組、低劑量組上升幅度分別為16.47%、26.62%和57.26%，雙孢蘑菇提取液的灌胃劑量與SOD含量呈一定的正比量?jī)r(jià)關(guān)系。

雙孢蘑菇提取液的抗氧化試驗(yàn)表明。高劑量的雙孢蘑菇提取液對(duì)清除體內(nèi)的MDA效果良好，而中、低劑量組效果一般。而灌胃了高劑量雙孢蘑菇提取液的小鼠MDA含量明顯較低，其主要原因就是雙孢蘑菇提取液中的生物活性物質(zhì)對(duì)MDA的清除作用，能夠有效預(yù)防機(jī)體組織的過(guò)氧化現(xiàn)象，減少自由基對(duì)機(jī)體的傷害。推測(cè)雙孢蘑菇中的多糖、多酚等大分子等是提高機(jī)體抗氧化能力的主要活性物質(zhì)。而中劑量組和低劑量組效果不明顯的主要原因可能是活性物質(zhì)數(shù)量太少，對(duì)過(guò)量自由基的清除效果不佳，導(dǎo)致MDA含量變化不大。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，SOD抗氧化酶的含量與雙孢蘑菇提取液的灌胃劑量呈一定的正比量?jī)r(jià)關(guān)系。灌胃了雙孢蘑菇提取液的小鼠，體內(nèi)SOD含量均有所升高，說(shuō)明了雙孢蘑菇對(duì)小鼠體內(nèi)抗氧化能力和免疫力的提升具有積極的作用，高劑量組、中劑量組和低劑量組的雙孢蘑菇提取液均對(duì)運(yùn)動(dòng)免疫力的提升有一定的功效。

3 討論

運(yùn)動(dòng)分為有氧運(yùn)動(dòng)和無(wú)氧運(yùn)動(dòng)，短時(shí)間的無(wú)氧運(yùn)動(dòng)對(duì)免疫力的影響相對(duì)較??；而長(zhǎng)時(shí)間的有氧運(yùn)動(dòng)由于考驗(yàn)的是運(yùn)動(dòng)機(jī)體的有氧代謝能力，即肌肉在長(zhǎng)時(shí)間、相對(duì)低強(qiáng)度下的運(yùn)動(dòng)能力。對(duì)免疫力的影響相對(duì)較大。在長(zhǎng)時(shí)間的耐力運(yùn)動(dòng)時(shí)，機(jī)體對(duì)氧氣的需求量持續(xù)位于高位，運(yùn)動(dòng)時(shí)的心肌、骨骼肌等運(yùn)動(dòng)參與的肌肉細(xì)胞會(huì)因長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)動(dòng)而出現(xiàn)缺水、過(guò)氧化狀態(tài)。同時(shí)，長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)動(dòng)也會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)和免疫系統(tǒng)的超負(fù)荷工作，增加病毒入侵機(jī)會(huì)，出現(xiàn)“運(yùn)動(dòng)性免疫”問(wèn)題，即因長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)而產(chǎn)生的免疫力低下癥狀。對(duì)機(jī)體健康和免疫功能造成嚴(yán)重影響。

運(yùn)動(dòng)性免疫力低下產(chǎn)生的主要原因就是身體長(zhǎng)期處于過(guò)氧化狀態(tài)，身體內(nèi)產(chǎn)生過(guò)量的自由基，出現(xiàn)過(guò)氧化現(xiàn)象。通過(guò)采用動(dòng)物試驗(yàn)對(duì)雙孢蘑菇提取液的“免疫抑制”功效進(jìn)行了研究。血液指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果表明，模擬有氧運(yùn)動(dòng)的小鼠在灌胃了雙孢蘑菇提取液后，機(jī)體的血液指標(biāo)表現(xiàn)出了一定的抗氧化能力，能夠改善運(yùn)動(dòng)時(shí)出現(xiàn)的機(jī)體免疫力下降現(xiàn)象，補(bǔ)充機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)也有效提高了機(jī)體的運(yùn)動(dòng)免疫力。試驗(yàn)結(jié)果可為雙孢蘑菇提取液藥用價(jià)值的開(kāi)發(fā)提供參考。