吳高峰

【摘要】 目的：觀(guān)察絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥（OP）患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化，并分析其臨床意義。方法：選取筆者所在醫(yī)院2016年3月-2019年3月60例絕經(jīng)后女性為研究對(duì)象，其中30例OP患者設(shè)為OP組，另30例非OP患者設(shè)為對(duì)照組。兩組均采用流式細(xì)胞儀檢查其外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：OP組外周血T淋巴細(xì)胞、抑制性淋巴細(xì)胞（Ts）及輔助性T細(xì)胞（Th）均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。OP組Th/Ts比值、NK細(xì)胞（CD16+CD56+）及B淋巴細(xì)胞均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：絕經(jīng)后OP患者的外周血T淋巴細(xì)胞亞群改變可能引起T淋巴細(xì)胞、Ts、Th降低，導(dǎo)致其體液免疫及免疫應(yīng)答改變，使絕經(jīng)期女性發(fā)生免疫系統(tǒng)紊亂。

【關(guān)鍵詞】 絕經(jīng) 骨質(zhì)疏松癥 T淋巴細(xì)胞亞群

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.25.026 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2020）25-00-03

[Abstract] Objective： To observe the changes of peripheral blood T lymphocyte subsets in postmenopausal osteoporosis （OP） patients and analyze its clinical significance. Method： A total of 60 postmenopausal women in our hospital from March 2016 to March 2019 were selected as the study objects， among which 30 patients with OP were set as the OP group and the other 30 non-OP patients as the control group. The peripheral blood T lymphocyte subsets of both groups were examined by flow cytometry and analyzed statistically. Result： The levels of peripheral blood T lymphocytes， inhibitory lymphocytes （Ts） and helper T cells （Th） in the OP group were lower than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The Th/Ts ratio， NK cell （CD16+CD56+） and B lymphocytes in the OP group were higher than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion： The change of T lymphocyte subsets in peripheral blood of postmenopausal OP patients may cause the decrease of T lymphocytes， Ts and Th， resulting in the changes of humoral immunity and immune response， and the immune system disorder of menopausal women.

[Key words] Menopause Osteoporosis T lymphocyte subsets

First-authors address： Zhongshan Hospital， Xiamen University， Xiamen 361004， China

骨質(zhì)疏松癥（OP）是一種代謝性骨病變，主要癥狀為骨組織量減少，發(fā)生于任何年齡且男女不限，多見(jiàn)于絕經(jīng)后女性和老年男性[1]。有研究顯示，OP與女性體內(nèi)分泌系統(tǒng)密切相關(guān)，特別表現(xiàn)為雌性激素下降，人體免疫細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等作為多溶性介質(zhì)，也可影響骨細(xì)胞[2]。人體外周血淋巴細(xì)胞主要分為T(mén)淋巴細(xì)胞、抑制性淋巴細(xì)胞（Ts）、輔助性T細(xì)胞（Th）、細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Tc）、效應(yīng)T淋巴細(xì)胞（Te）、B淋巴細(xì)胞及NK細(xì)胞（CD16+CD56+）。有研究表明，絕經(jīng)后OP患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化可影響人體免疫功能，抑制免疫應(yīng)答發(fā)生[3]。本研究通過(guò)抽取筆者所在醫(yī)院30例絕經(jīng)后OP患者與30例絕經(jīng)后非OP患者，對(duì)比分析其外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平，以期進(jìn)一步明確OP是否能影響絕經(jīng)后女性免疫系統(tǒng)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取筆者所在醫(yī)院2016年3月-2019年3月60例絕經(jīng)后女性為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均為絕經(jīng)后婦女;（2）近2個(gè)月未接受其他藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）近期無(wú)新生骨折;（2）長(zhǎng)期服用治療骨組織藥物;（3）有自身免疫性疾病、感染性疾病及腫瘤等。其中30例OP患者設(shè)為OP組，另30例非OP患者設(shè)為對(duì)照組。根據(jù)世界衛(wèi)生組織OP診斷標(biāo)準(zhǔn)，T值≥-1.0為骨組織量正常，-2.50.05），有可比性。本研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。患者及家屬簽署同意書(shū)。

1.2 方法

采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群：（1）制備單細(xì)胞懸液，將1X10-7的細(xì)胞放入1.5 ml離心管中3 000 r/min離心5 min，棄上清液，然后加入FACS緩沖液100 μl懸浮細(xì)胞;（2）封閉表面Fc受體，在步驟（1）得到的液體中加入Fc受體抗體0.5 μl（0.5 mg/ml），水浴3 min;（3）細(xì)胞與熒光抗體結(jié)合，在步驟（2）得到的液體中加入熒光抗體1 μl（0.5 mg/ml），水浴30 min;（4）洗細(xì)胞去除游離的熒光抗體，在步驟（3）中加入FACS緩沖液350 μl，輕輕搖晃混勻，放置3 000 r/min的離心機(jī)離心5 min，棄上清液，重復(fù)步驟此操作2次;（5）上樣前處理，取100 μl儀器緩沖液加入細(xì)胞沉淀中，輕輕混勻懸浮細(xì)胞，將細(xì)胞懸液移入FACS專(zhuān)用管中，準(zhǔn)備進(jìn)行儀器檢測(cè)和分析[6]。

1.3 觀(guān)察指標(biāo)

比較兩組T淋巴細(xì)胞、Ts、Th、Th/Ts、CD16+CD56+、B淋巴細(xì)胞水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血T淋巴細(xì)胞、Ts、Th比較

OP組T淋巴細(xì)胞、Ts、Th均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2 兩組外周血Th/Ts、CD16+CD56+及B淋巴細(xì)胞水平比較

OP組外周血Th/Ts、CD16+CD56+及B淋巴細(xì)胞水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

3 討論

OP是由于人體正常骨質(zhì)量低下，骨結(jié)構(gòu)受損引起骨脆性升高的一種全身性骨病，分為原發(fā)性和繼發(fā)性?xún)纱箢?lèi)，發(fā)病機(jī)制包括內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂、機(jī)體代謝紊亂及其他因素，臨床上主要癥狀有腰背疼痛、骨折、呼吸功能下降。人到中老年時(shí)期，由于免疫功能低下，可能會(huì)引起此疾病產(chǎn)生，部分女性絕經(jīng)后雌性激素下降也可導(dǎo)致OP發(fā)生。有研究顯示，絕經(jīng)年齡可判斷OP發(fā)病率，即年齡越晚，發(fā)病率越低，與女性絕經(jīng)后體內(nèi)雌性激素水平下降有關(guān)，由于雌性激素能抑制破骨細(xì)胞的活性，雌性激素水平越低，破骨細(xì)胞活性越強(qiáng)，骨組織吸收量遠(yuǎn)大于骨形成量[7]。

T細(xì)胞是人體內(nèi)重要的免疫細(xì)胞，也是淋巴細(xì)胞的主要組分，能直接殺死靶細(xì)胞，輔助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，其分泌的炎性因子與配體，能有效促進(jìn)骨組織的形成吸收，另外，T淋巴細(xì)胞通過(guò)CD40配體及刺激分子，共同調(diào)節(jié)骨間質(zhì)細(xì)胞及成骨細(xì)胞之間的代謝，維持骨形成和骨吸收的動(dòng)態(tài)平衡，這些細(xì)胞按功能可分為三個(gè)亞群，包括Th、Ts和Tc，Th通過(guò)與多肽發(fā)生反應(yīng)并分泌細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)，增生免疫細(xì)胞;Th會(huì)協(xié)助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，與巨噬細(xì)胞結(jié)合后會(huì)去辨認(rèn)抗原，抗原刺激后釋放白介素，使得B細(xì)胞大量繁殖;Ts能抑制Th活性，從而抑制B細(xì)胞分化及Tc殺傷功能，負(fù)向調(diào)節(jié)體液免疫和細(xì)胞免疫;Tc分泌各種細(xì)胞因子參與免疫作用，能殺死某種病毒及腫瘤細(xì)胞等抗原物質(zhì)，與NK細(xì)胞構(gòu)成機(jī)體抗病毒、抗腫瘤免疫的重要防線(xiàn)。本研究中，OP組外周血T淋巴細(xì)胞、Ts及Th均低于對(duì)照組，表明OP能改變患者T淋巴細(xì)胞亞群水平，從而影響免疫系統(tǒng)，使得細(xì)胞免疫及體液免疫出現(xiàn)異常，這與劉欣榮等[8]的研究結(jié)果一致。OP組Th/Ts比值、CD16+CD56+及B淋巴細(xì)胞均高于對(duì)照組，也表明T淋巴細(xì)胞亞群的變化，導(dǎo)致人體免疫系統(tǒng)紊亂，方虹等[9]的研究結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)。絕經(jīng)后女性免疫系統(tǒng)與成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞相互影響，T淋巴細(xì)胞亞群的改變導(dǎo)致免疫系統(tǒng)紊亂，進(jìn)而引起自身免疫性疾病，出現(xiàn)關(guān)節(jié)、骨骼等功能受損。

T細(xì)胞能刺激或抑制成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞，與其亞群、細(xì)胞因子等因素有相似作用，還可產(chǎn)生調(diào)節(jié)因子影響骨組織與細(xì)胞之間的代謝，活化后的T細(xì)胞產(chǎn)生破骨細(xì)胞必要的效應(yīng)因子，通過(guò)酶切效應(yīng)因子分泌可溶性因子，對(duì)骨轉(zhuǎn)移及絕經(jīng)后OP患者也起著非常重要的作用，人體B淋巴細(xì)胞分化過(guò)程為前B細(xì)胞、不成熟B細(xì)胞、成熟B細(xì)胞、活化B細(xì)胞和漿細(xì)胞。其中前兩期增殖分化過(guò)程在骨髓中進(jìn)行，后階段的增殖分化過(guò)程主要在免疫器官中進(jìn)行，人體淋巴細(xì)胞的增殖分化與其骨髓造血微環(huán)境處于同一個(gè)環(huán)境中，可共享微環(huán)境中多種細(xì)胞因子、調(diào)節(jié)分子等[10-12]。通過(guò)細(xì)胞因子調(diào)節(jié)造血細(xì)胞的增殖分化，使得免疫系統(tǒng)與骨骼系統(tǒng)保持動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)免疫系統(tǒng)處于異常狀態(tài)，骨骼系統(tǒng)任何功能變化都會(huì)導(dǎo)致骨細(xì)胞出現(xiàn)嚴(yán)重危害，從而使得免疫功能紊亂。

綜上所述，絕經(jīng)后OP能使T淋巴細(xì)胞、Ts、Th指標(biāo)降低，Th/Ts，CD16+CD56+及B淋巴細(xì)胞水平升高，導(dǎo)致患者體液免疫及免疫應(yīng)答出現(xiàn)相應(yīng)的改變，使絕經(jīng)期女性發(fā)生免疫系統(tǒng)紊亂。

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（收稿日期：2020-03-27） （本文編輯：桑茹南）