白燕遠(yuǎn)，李金月，李洪梨，李耀燕，閆國(guó)躍，張 曼，李 彤

(廣西中醫(yī)藥大學(xué) 瑤醫(yī)藥學(xué)院，廣西 南寧 530001)

瑤藥材廣東石豆蘭為蘭科植物廣東石豆蘭(BulbophyllumkwangtungenseSchltr.)的干燥假鱗莖或全草。廣東石豆蘭又名單葉巖珠、巖棗，分布于浙江、江西、福建、湖北、湖南、廣東、廣西、四川等地，通常生于海拔約800m的山坡林下巖石上[1]?？扇萑胨帯Ｗ罱鼜V西瑤藥標(biāo)準(zhǔn)第二卷的編寫前準(zhǔn)備工作正在進(jìn)行中，廣東石上蝦是瑤藥標(biāo)準(zhǔn)第二卷的收錄品種之一，筆者圍繞標(biāo)準(zhǔn)編制的內(nèi)容，對(duì)廣東石豆蘭進(jìn)行相關(guān)研究。從生藥學(xué)角度對(duì)廣東石豆蘭進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究材料

本研究共收集樣品8批，詳細(xì)信息見表1，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)韋松基教授和廣西中醫(yī)藥研究院黃云峰副研究員鑒定為蘭科植物廣東石豆蘭BulbophyllumkwangtungenseSchltr.。完成樣品收集后，將8批樣品進(jìn)行粉碎處理，并統(tǒng)一過40目篩，備用。

表1 廣東石豆蘭樣品信息

1.2 研究方法

本研究采用文獻(xiàn)查閱和實(shí)驗(yàn)研究相結(jié)合的方法。

1.2.1 藥理作用 廣東石豆蘭水提物的止咳作用(濃氨水噴霧引咳法)研究。取50只小鼠，隨機(jī)分為空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，陽(yáng)性藥止咳片(1.2 g·kg-1)組，石上蝦水提物高、中、低劑量(7.5、5.0、2.5 g生藥·kg-1，相當(dāng)于人日用劑量的30倍、20倍、10倍)組，每組10只。各給藥組小鼠按20 mL·kg-1體重灌胃給予相應(yīng)藥物，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組灌胃給予等體積蒸餾水，連續(xù)7天，每天1次。第7天末次給藥1 h后，將小鼠置于2L玻璃鐘罩內(nèi)，超聲霧化噴入30%氨水10 s引咳，記錄小鼠咳嗽潛伏期(從噴入濃氨水到產(chǎn)生咳嗽的時(shí)間為咳嗽潛伏期)及3 min內(nèi)咳嗽(小鼠出現(xiàn)腹肌收縮、縮胸，張大嘴為咳嗽)次數(shù)。

1.2.2 毒理學(xué)實(shí)驗(yàn) 選取18～22 g小鼠60只，分為3組，每組20只，雌雄各半。禁食不禁水12 h，每天灌胃給藥3次，給藥間隔4 h，給藥體積均為40.0 mL/kg。其中空白對(duì)照組給予等體積蒸餾水，石上蝦水提物組給予最大耐受濃度藥液(1.84 g生藥/mL)。給藥后即刻及其后14天內(nèi)，觀察記錄小鼠出現(xiàn)的中毒癥狀及死亡情況。觀察期結(jié)束時(shí)，處死全部存活小鼠進(jìn)行肉眼尸檢，以觀察內(nèi)臟的病變。

1.2.3 鑒別 性狀鑒別：肉眼觀察廣東石豆蘭并描述相關(guān)性狀。顯微鑒別：制作廣東石豆蘭假鱗莖、葉和莖的橫切面切片以及粉末片，在顯微鏡下觀察并拍圖，然后描述相關(guān)特征。

薄層色譜：取本品粉末1 g，加甲醇溶液10 mL，超聲處理60 min，過濾，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試液。取對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2015版四部通則 0502)試驗(yàn)，分別吸取廣東石豆蘭、對(duì)照藥材各1～5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(6∶4)為展開劑，上行展開，展至8 cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。同時(shí)進(jìn)行耐用性實(shí)驗(yàn)考察：采用點(diǎn)狀點(diǎn)樣，①對(duì)不同預(yù)制板(青島海洋化工廠，批號(hào)：20181221，10 cm×15 cm，批號(hào)：20191209，10 cm×20 cm；青島碩遠(yuǎn)硅膠科技有限公司，批號(hào)：20191011，10 cm×10 cm)的展開效果進(jìn)行考察；②對(duì)不同展開溫度：12 ℃、25 ℃進(jìn)行考察；③對(duì)不同相對(duì)濕度(RH)：46%、88%進(jìn)行考察。

1.2.4 測(cè)定 水分測(cè)定：按照水分測(cè)定法(《中國(guó)藥典》2015版四部通則 0832第二法)對(duì)本品8批樣品進(jìn)行水分測(cè)定?；曳譁y(cè)定：按照灰分測(cè)定法(《中國(guó)藥典》2015版四部通則2302總灰分測(cè)定法和酸不溶性灰分測(cè)定法)對(duì)本品8批樣品進(jìn)行總灰分和酸不溶性灰分測(cè)定。浸出物測(cè)定：分別用水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、無(wú)水乙醇為溶劑(以GDSDL～1為供試品)，照浸出物測(cè)定法(《中國(guó)藥典》2015版四部通則2201)進(jìn)行預(yù)試測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)熱水提取效果最佳，最終確定以水為溶劑，按照水溶性浸出物測(cè)定法(《中國(guó)藥典》2015版四部通則 2201)項(xiàng)下的熱浸法，對(duì)本品8批樣品進(jìn)行浸出物測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1 化學(xué)成分

研究表明，廣東石豆蘭全草含芪類化合物、多苯酚類、三萜類、甾類及糖苷類等化合物[2]。

2.2 藥理作用

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與空白對(duì)照組比較，止咳片和廣東石豆蘭水提物高劑量(7.5 g藥材·kg-1)均能減少濃氨水導(dǎo)致小鼠咳嗽潛伏期和咳嗽次數(shù)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)；廣東石豆蘭水提物中，低劑量對(duì)濃氨水導(dǎo)致小鼠咳嗽潛伏期和咳嗽次數(shù)影響不大(P>0.05)。結(jié)果見表2。

表2 廣東石豆蘭水提物止咳作用

2.3 毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)

急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，一天給予3次廣東石豆蘭水提物后，連續(xù)觀察14天，小鼠狀態(tài)良好，無(wú)死亡情況發(fā)生。解剖小鼠，肉眼觀察小鼠的腦、心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，未發(fā)現(xiàn)明顯異常。計(jì)算空白對(duì)照組小鼠體重增長(zhǎng)33.5%，計(jì)算廣東石豆蘭水提物組小鼠體重增長(zhǎng)率為36.69%；廣東石豆蘭水提物的最大耐受量為220.80 g生藥·kg-1，相當(dāng)于人用量(0.25 g生藥·kg-1)的883倍，說(shuō)明小鼠在220.80 g生藥·kg-1劑量下灌胃給藥，未出現(xiàn)急性毒性反應(yīng)。

2.4 鑒別

2.4.1 性狀鑒別 根莖纖細(xì)，直徑1～1.5 mm，每隔1.4～2.5 cm生一假鱗莖，卵狀矩圓形，類圓錐形，長(zhǎng)0.8～1.5 cm，直徑4～8 mm，表面具細(xì)總棱紋，近根莖的一側(cè)具一較寬的凹槽，基部不收縮成柄狀，頂端生葉1枚，矩圓形，長(zhǎng)1.6～2.7 cm，寬7～11 mm，頂端微凹，基部近無(wú)柄。氣微，味甘、淡[3]。見圖1。

圖1 廣東石豆蘭藥材

2.4.2 顯微鑒別 假鱗莖橫切面：表皮細(xì)胞1層，外有較厚蠟質(zhì)層，形狀較小，不規(guī)則。基本薄壁組織細(xì)胞含草酸鈣簇晶，較小，直徑8～13 μm，棱角鈍；未見草酸鈣針晶；外圍的維管束外側(cè)有帽狀纖維束；中部維管束較大，其內(nèi)外側(cè)均有纖維束[3]。見圖2。

葉橫切面：上、下表皮均有較厚的蠟質(zhì)層，上、下表皮細(xì)胞各1列。表皮內(nèi)均具有1～2層薄壁細(xì)胞，葉肉未分化，細(xì)胞形狀相似，類圓形，細(xì)胞排列緊密，胞內(nèi)多見草酸鈣簇晶。外韌維管束間斷成排列于葉肉中，外層具石細(xì)胞群。偶見下陷氣孔[3]。見圖3。

1.表皮；2.皮層；3.初生組織；4.草酸鈣簇晶；5.纖維束；6.維管束

1.下表皮蠟質(zhì)層；2.下陷氣孔；3.下表皮；4.維管束；5.石細(xì)胞群；6.皮層薄壁細(xì)胞；7.葉肉；8.上表皮

莖橫切面：表皮細(xì)胞外有較厚的角質(zhì)層，表皮細(xì)胞1層，形狀較小，不規(guī)則。皮層較寬，由多層不規(guī)則薄壁細(xì)胞組成，中間為多個(gè)維管束均勻分散分布形成的維管柱[3]。見圖4。

1.表皮；2.皮層；3.初生組織；4.維管束

2.4.3 薄層色譜 供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見圖5。耐用性實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明本法的耐用性良好。

1.GDSDL-1；2.GDSDL-2；3.GDSDL-3；4.GDSDL-4；5.GDSDL-5；6.GDSDL-6；7.GDSDL-7；8.GDSDL-8(對(duì)照藥材)；A.紫色斑點(diǎn)；B.紅色斑點(diǎn)；C.紅黃色斑點(diǎn)；D.紅色斑點(diǎn)

2.5 測(cè)定

2.5.1 水分測(cè)定 據(jù)最高值、最低值及平均值，將本品水分限度擬定為不得過9.5%。結(jié)果見表3。

表3 廣東石豆蘭樣品水分測(cè)定結(jié)果 (%)

2.5.2 灰分測(cè)定 總灰分測(cè)定結(jié)果見表4，據(jù)最高值、最低值及平均值，將本品總灰分限度擬定為不得過6.0%。酸不溶性灰分測(cè)定結(jié)果見表5，據(jù)最高值、最低值及平均值，將本品酸不溶性灰分限度擬定為不得過1.3%。

表4 廣東石豆蘭樣品總灰分測(cè)定結(jié)果 (%)

表5 廣東石豆蘭樣品酸不溶性灰分測(cè)定結(jié)果 (%)

2.5.3 浸出物測(cè)定 結(jié)果見表6，據(jù)最高值、最低值及平均值，將本品浸出物限度擬定為不得少于20%。

表6 廣東石豆蘭樣品浸出物測(cè)定結(jié)果 (%)

3 結(jié)論

本研究分析了廣東石豆蘭的生藥學(xué)研究資料，包括化學(xué)成分、藥理作用、毒理學(xué)、性狀鑒別、顯微鑒別、薄層色譜鑒別、水分測(cè)定、灰分測(cè)定及浸出物測(cè)定，可為該藥材的進(jìn)一步研究提供參考。