林 鈴

茶樹菇液體菌種應(yīng)用及配套栽培技術(shù)研究

林 鈴

（古田縣食用菌研發(fā)中心，福建 寧德 352200）

探索液體菌種在茶樹菇栽培上的應(yīng)用技術(shù)，篩選出適用液體菌種的栽培基質(zhì)配方：棉籽殼87%，麩皮10%，石灰3%，含水量60%。比較應(yīng)用液體菌種與固體菌種栽培效果：應(yīng)用液體菌種菌包含水量高、pH低，原基形成較遲而整齊，初潮產(chǎn)量與固體菌種差異不明顯；應(yīng)用液體菌種菌包萌發(fā)點(diǎn)多、生產(chǎn)周期大為縮短，生產(chǎn)占地面積小，用工減少、成本降低，污染率低，菌包成熟度較一致，出菇較整齊，容易實(shí)現(xiàn)工廠化生產(chǎn)。

茶樹菇；液體菌種；固體菌種；培養(yǎng)基

茶樹菇（）屬傘菌目、糞傘科、田蘑屬，又名茶菇、油茶菇[1]。其質(zhì)地脆嫩，味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，含有8種人體必需氨基酸[2]，豐富的B族維生素以及鉀、鈉、鈣、鎂、鐵、鋅等礦質(zhì)元素，深受百姓喜愛[3]。具有抗衰老，降血脂[4]，抗凝血[5]，防癌、抗癌[6]等功效，能夠增強(qiáng)人體的運(yùn)動(dòng)及抗疲勞能力[7]，是一種藥食兼用的食用菌。

茶樹菇栽培歷史悠久，栽培范圍廣，農(nóng)戶常采用固體菌種接種，生產(chǎn)成本高、周期長(zhǎng)，污染率高[8]。目前國(guó)內(nèi)外金針菇[9]、杏鮑菇[10]、海鮮菇[11]等品種工廠化栽培大部分采用液體菌種，應(yīng)用液體菌種具有成本低，菌絲生長(zhǎng)快，縮短生產(chǎn)周期，菌種純度高、菌齡一致、萌發(fā)快等特點(diǎn)[12]，但其在茶樹菇栽培方面的研究報(bào)道較少。

本研究篩選適用于茶樹菇液體菌種的栽培基質(zhì)配方，對(duì)比應(yīng)用液體菌種和固體菌種在發(fā)菌和出菇過(guò)程的差異，以期簡(jiǎn)化茶樹菇栽培工藝、縮短栽培時(shí)間、提升產(chǎn)品商品性狀，提高茶樹菇產(chǎn)業(yè)價(jià)值，從而形成一套可行的液體菌種栽培技術(shù)，降低菇農(nóng)的生產(chǎn)成本，提高收益。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

茶樹菇5號(hào)，由古田縣佳鑫食用菌專業(yè)合作社提供。

1.2 主要儀器設(shè)備

130701臥式壓力矩形蒸汽滅菌器（衡陽(yáng)市金一帆制藥設(shè)備實(shí)業(yè)有限公司），LDZX-75KBS立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠），40 L液體發(fā)酵罐（鎮(zhèn)江市科遠(yuǎn)機(jī)械工程有限公司），SW-CJ-2FD潔凈工作臺(tái)（蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司），PH-100A背光筆式酸度計(jì)（上海力辰邦西儀器科技有限公司），HCB1002電子天平（艾德姆衡器武漢有限公司），PMB202水分測(cè)定儀（蘇州乾蕓儀器科技有限公司）。

1.3 栽培工藝流程

液體菌種栽培工藝流程：試管種→搖瓶種→培養(yǎng)罐種→出菇包→栽培管理→出菇。

固體菌種栽培工藝流程：試管種→原種→栽培種→出菇包→栽培管理→出菇。

1.4 培養(yǎng)基及菌種培養(yǎng)方法

試管種：用種前轉(zhuǎn)管培養(yǎng)，提純復(fù)壯。接種至PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂15～20 g，水1 000 mL，pH自然），25 ℃恒溫培養(yǎng)箱無(wú)光照培養(yǎng)。

搖瓶種：1 000 mL三角瓶，裝600 mL培養(yǎng)液，培養(yǎng)液配方為鮮馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、磷酸二氫鉀0.3 g、硫酸鎂0.15 g、水1 000 mL，121 ℃滅菌30 min，冷卻到25 ℃，每瓶接入5小塊母種（一支母種的量）。置于旋轉(zhuǎn)式搖床，無(wú)光照、25 ℃條件下培養(yǎng)5～7天。

培養(yǎng)罐種：培養(yǎng)液配方為土豆淀粉8 g、玉米淀粉1 g、葡萄糖20 g、磷酸二氫鉀1 g、硫酸鎂0.5 g、水1 000 mL，pH為6～7，121 ℃滅菌30 min，冷卻到25 ℃，通氣量1∶0.8，接種量2%～3%，40Ｌ的發(fā)酵罐接入１瓶搖瓶種，培養(yǎng)6天左右菌種成熟。

液體菌種質(zhì)量要求：培養(yǎng)液澄清透明不渾濁，無(wú)雜菌、無(wú)異味；菌絲球（或菌絲片段）均勻懸浮于液體中不分層，直徑不大于2 mm。

栽培種制備：培養(yǎng)料配方為棉籽殼86 %、麩皮10 %、生石灰3 %、石膏1 %，各原料混合攪拌，含水量60 %，每袋裝料300 g，108 ℃滅菌5 h，冷卻至70 ℃，壓力降為零后卸鍋置于接種房，冷卻至25 ℃以下接種，期間臭氧+紫外殺菌2 h。

栽培基質(zhì)試驗(yàn)配方見表1，4個(gè)配方基質(zhì)含水量均為60%，單袋重800～900 g。

問題(8)即為文獻(xiàn)[12]中提出的半正定規(guī)劃問題,文獻(xiàn)[12]已經(jīng)理論證明了該問題中最優(yōu)解Y的秩最高為2,而近似WLS問題的最優(yōu)解的秩應(yīng)為1。顯然,由于松弛的影響,半正定規(guī)劃的解并不一定是近似WLS問題的最優(yōu)解。若要得到秩為1的解,一種自然的想法是通過(guò)加入其他有效約束來(lái)收緊該問題。觀察約束‖x-s0‖=r0(即y(2k+1)=‖y(1:k)-s0‖),其經(jīng)過(guò)松弛可變?yōu)椤瑇-s0‖≤r0,它涉及到優(yōu)化變量y之間的內(nèi)在聯(lián)系。一個(gè)自然的問題是,若在現(xiàn)有半正定規(guī)劃問題中加入此約束,能否起到收緊約束集的作用?下面的命題回答了這個(gè)問題。

表1 栽培基質(zhì)試驗(yàn)配方

1.5 適于液體菌種的栽培基質(zhì)配方篩選

根據(jù)配方制作栽培料包，最終測(cè)得裝料重為873.00±3.70 g/袋，菌包高15.54±0.78 cm，直徑10.38±0.35 cm，培養(yǎng)料含水量為58.96%±1.19%，pH（料/液比為1/5）為8.21±0.06。

采用劃線法測(cè)量不同栽培配方的菌絲生長(zhǎng)速度，測(cè)定初潮產(chǎn)量，篩選出適合茶樹菇栽培的最優(yōu)配方。

1.6 應(yīng)用液體菌種與固體菌種的試驗(yàn)

（1）發(fā)菌過(guò)程菌包含水量和pH變化比較。菌絲長(zhǎng)滿料面后，隨機(jī)分別取固體菌種和液體菌種接種的菌包料面栽培料20 g攪拌均勻，取其中5 g用含水量測(cè)定儀測(cè)量含水量；取其中10 g按1∶5比例加入蒸餾水，用pH測(cè)定儀測(cè)量pH。每間隔7天測(cè)量一次。

（2）發(fā)菌過(guò)程菌絲生長(zhǎng)情況比較。固體菌種和液體菌種接種的菌包各取70袋，觀察測(cè)量記錄發(fā)菌過(guò)程中菌絲長(zhǎng)滿菌包的時(shí)間、菌絲狀態(tài)、菌絲生長(zhǎng)速度、菌包污染率等，進(jìn)行對(duì)比分析。

（3）菌包出菇情況比較。對(duì)菌包進(jìn)行開袋出菇，記錄原基形成、子實(shí)體發(fā)育情況，測(cè)定初潮菇產(chǎn)量等，并進(jìn)行對(duì)比分析。

1.7 數(shù)據(jù)處理

采用WPS Office 2019 11.1.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，運(yùn)用SPSS Statistics V17.0軟件分析差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同栽培基質(zhì)配方的菌絲生長(zhǎng)速度和初潮菇產(chǎn)量

如圖1所示，采用液體菌種接種，不同栽培基質(zhì)配方菌絲生長(zhǎng)速度差異不顯著，最高為0.46 cm/d。初潮菇產(chǎn)量，以配方3最高，為109.78 g/袋，配方1、4添加有適量的玉米芯或木屑，與配方3差異不明顯。因此，如考慮節(jié)約成本，采用配方3時(shí)可適量添加玉米芯或木屑。

2.2 不同類型菌種菌包的發(fā)菌表現(xiàn)

圖1 不同基質(zhì)配方的茶樹菇菌絲長(zhǎng)速和初潮產(chǎn)量

圖2 應(yīng)用不同類型菌種菌包上表層菌料的含水量變化

（2）菌包上表層菌料pH變化。如圖3所示，應(yīng)用固體菌種的菌包比應(yīng)用液體菌種的菌包pH略高，原因可能是含水量低提高了pH。應(yīng)用液體菌種的菌包，上表層菌料的pH從接種后的8.24緩慢增加至第56天的8.89，與應(yīng)用固體菌種菌包的變化一致。

圖3 應(yīng)用不同類型菌種菌包上表層菌料pH變化

（3）菌包菌絲生長(zhǎng)情況。試驗(yàn)結(jié)果顯示，應(yīng)用液體菌種的菌包菌絲長(zhǎng)滿料面時(shí)間為10±1天，比應(yīng)用固體菌種的（13±1天）早近3天。應(yīng)用液體菌種的菌包20天時(shí)部分走滿，比應(yīng)用固體菌種的早5天；接種30天后，應(yīng)用液體菌種的菌包有83.3%長(zhǎng)滿菌絲，而應(yīng)用固體菌種的只有72.3%長(zhǎng)滿菌絲。

菌包應(yīng)用固體菌種與液體菌種，菌絲均潔白濃密，沒有明顯差異。應(yīng)用液體菌種菌絲生長(zhǎng)速度為0.47±0.03 cm/d，與應(yīng)用固體菌種（0.45±0.02 cm/d）的差異不顯著。菌包污染率，應(yīng)用液體菌種為2%，明顯低于應(yīng)用固體菌種的7%。

2.3 應(yīng)用不同類型菌種的出菇表現(xiàn)

原基形成方面，應(yīng)用液體菌種的菌包，原基形成較遲但整齊；應(yīng)用固體菌種的，原基形成早、較整齊。子實(shí)體生長(zhǎng)方面，應(yīng)用液體菌種的菌包，子實(shí)體菇蓋較小、菇柄較細(xì)長(zhǎng)；應(yīng)用固體菌種的菌包，菇蓋較大、菇柄長(zhǎng)，均為叢生。初潮產(chǎn)量，應(yīng)用液體菌種的菌包為109.77 ±16.75 g/袋，與應(yīng)用固體菌種（107.30±16.64 g/袋）的差異不顯著。

3 小結(jié)與討論

本研究探索液體菌種在茶樹菇栽培中的應(yīng)用技術(shù)，根據(jù)菌絲生長(zhǎng)速度和初潮產(chǎn)量對(duì)比，篩選出適用于液體菌種的栽培基質(zhì)配方，即棉籽殼87%，麩皮10%，石灰3%，含水量60%。發(fā)現(xiàn)應(yīng)用液體菌種較應(yīng)用固體菌種菌包含水量高、pH低、菌絲滿袋時(shí)間快、菌包污染率低。原基形成較遲但整齊，子實(shí)體生長(zhǎng)菇蓋較小，菇柄較細(xì)長(zhǎng)，初潮產(chǎn)量與應(yīng)用固體菌種差異不顯著。

本研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用液體菌種主要有以下優(yōu)勢(shì)：①生產(chǎn)周期縮短，從試管到搖瓶再到發(fā)酵罐生產(chǎn)出液體菌種23天就可完成，而生產(chǎn)固體菌種需要72 天；②生產(chǎn)占地面積小、用工少，液體菌種一罐40 L可接4 000袋菌包，占地面積只需1 m2，而對(duì)應(yīng)固體栽培種需100袋，堆放面積至少2 m2；③生產(chǎn)成本低，用固體菌種接種，平均每袋成本5分，而用液體菌種接種平均每袋成本2分，且液體菌種接種快，用工成本低；④發(fā)菌時(shí)間短，30～45天菌絲就可布滿菌包，較固體菌種走滿栽培袋天數(shù)45～60天提前15天以上；⑤污染率低，利用接種槍等便捷操作設(shè)施，暴露時(shí)間短，多點(diǎn)萌發(fā)快，接種后6 h即可看到菌種萌發(fā)變白，24～48 h后就可吃料生長(zhǎng)，使雜菌沒有侵染機(jī)會(huì)。

然而，液體菌種也存在設(shè)備投資大，技術(shù)要求高，貯藏運(yùn)輸困難，抵抗不良環(huán)境能力弱等[13]缺點(diǎn)，如果操作不當(dāng)會(huì)造成成批污染。其適合食用菌規(guī)?；?、工廠化生產(chǎn)[14]。

本研究還存在一些問題需要克服，如接種針較短，使用時(shí)菌種會(huì)噴灑在袋口兩側(cè)；菌絲球因栽培基質(zhì)的過(guò)濾作用難以流入菌包下層，多點(diǎn)萌發(fā)優(yōu)勢(shì)受影響，導(dǎo)致菌種發(fā)菌整齊度不夠，有些菌袋30天走滿，有些則要40多天，存在時(shí)間差，影響管理同步化。下一步將研究制作插入式接種針，以期實(shí)現(xiàn)多點(diǎn)噴射，多點(diǎn)萌發(fā)；研究菌包接種孔徑大小，以提高菌種發(fā)菌整齊度，同時(shí)避免滋生病蟲害。

[1] 邱敦蓮, 劉本洪, 肖在勤, 等. 茶樹菇原生質(zhì)體的分離和再生以及單核菌株的篩選[J]. 西南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2008, 30(12): 116-120.

[2] 劉耀新. 襄汾縣茶樹菇栽培技術(shù)[J]. 中國(guó)農(nóng)技推廣, 2012(8): 32-33.

[3] 陳小保, 韋帶蓮, 譚育林. 南方茶樹菇高產(chǎn)栽培的關(guān)鍵技術(shù)[J]. 食藥用菌, 2014(2): 104-105.

[4] 李亞嬌, 孫國(guó)琴, 郭九峰, 等. 食用菌營(yíng)養(yǎng)及藥用價(jià)值研究進(jìn)展[J]. 食藥用菌, 2017, 25(2): 103-109.

[5] 李冠龍, 劉曉蘭, 鄭喜群. 茶樹菇子實(shí)體新纖溶酶的純化及其溶栓抗凝性質(zhì)研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2020(11): 105-111.

[6] 陳子涵, 劉金娟. 六種食用菌體外抗氧化及抗細(xì)胞增殖活性研究[J]. 生物技術(shù)通報(bào), 2019, 35(11): 104-108．

[7] 鄭緒恒. 茶樹菇提取物對(duì)高強(qiáng)度劇烈運(yùn)動(dòng)的抗疲勞作用[J]. 中國(guó)食用菌, 2020(4): 37-39.

[8] Yonedak, Shiozawa A, Kitabara A, eta1．Novel antimutagenic proteins in the edible mushroom Agrocybe cflindracea [J]. Genes and Environment, 2012, 34(1): 9-17．

[9] 張文武, 劉艷, 邵小軍, 等. 金針菇液體與固體菌種制作及栽培對(duì)比試驗(yàn)[J]. 中國(guó)食用菌, 2012(5): 65.

[10] 鄒丹蓉. 杏鮑菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)[J]. 食用菌, 2016, 38(2): 62.

[11] 鄭少玲. 海鮮菇液體菌種生產(chǎn)與質(zhì)量控制[J]. 食藥用菌, 2020(2): 130-132.

[12] 黃毅. 食用菌工廠化栽培實(shí)踐[M]. 福州: 福建科學(xué)技術(shù)出版社, 2014.

[13] 錢葉會(huì). 食用菌液體菌種栽培技術(shù)的探討[J]. 山西農(nóng)經(jīng), 2015(7): 69-70.

[14] 周峰, 李巧珍, 楊仁智, 等. 香菇液體菌種與固體菌種的生產(chǎn)成本和使用效果分析[J]. 食藥用菌, 2017(3): 199-202.

林鈴（1988—），男，在讀碩士，主要從事食用菌研究。E-mail：470977906@qq.com。

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2095-0934（2020）05-340-04