李小慶

摘 ?要：為了找到山東聊城地區(qū)817肉雛雞沙門氏菌陽性的來源，以及沙門氏菌開始轉(zhuǎn)陽的關(guān)鍵時間節(jié)點，采用沙門氏菌分離培養(yǎng)、生化鑒定和血清學(xué)鑒定的方法，連續(xù)跟蹤采樣檢測三次，對聊城地區(qū)817肉雛雞沙門氏菌進行溯源調(diào)查。結(jié)果顯示：第一次，在孵化場出雛器進風(fēng)口和地面中，分離出腸炎沙門氏菌;第二次，在孵化場的絨毛和消毒后紙盒中分離出腸炎沙門氏菌。研究提示：孵化場是沙門氏菌污染的高危環(huán)節(jié)，應(yīng)加大對孵化場衛(wèi)生消毒的監(jiān)督力度，確保雛雞質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：腸炎沙門氏菌;817肉雛雞;分離培養(yǎng);孵化場;出雛器

中圖分類號：S858.311.31+3 ? 文獻標(biāo)識碼：B ? 文章編號：1673-1085（2020）8-0045-04

817肉雞是快大型白羽肉雞父母代父系公雞作父本、高產(chǎn)褐殼蛋雞商品代作母本的雜交雞，是中華傳統(tǒng)名吃德州扒雞的來源，主要分布于魯西地區(qū)。近些年來，817肉雞從山東逐漸擴展到河北、河南、江蘇等地。據(jù)中國畜牧業(yè)協(xié)會統(tǒng)計，2017年全國雞肉總產(chǎn)量1469萬噸，其中817肉雞的產(chǎn)肉量為106萬噸，占雞肉總產(chǎn)量的7.21%，已發(fā)展成為我國肉雞生產(chǎn)的三大主導(dǎo)品種類型（白羽肉雞、黃羽肉雞、817肉雞）之一[1]，發(fā)展空間巨大。

隨著行業(yè)的發(fā)展，817肉雞也面臨配套制種模式不規(guī)范、種源性疾病凈化等諸多問題的困擾[2]。其中，沙門氏菌病是817肉雞育雛期間發(fā)病率高、危害性大的一種常見垂直傳播疾病，包括白痢、腸炎沙門氏菌病等。

2019年末，據(jù)山東聊城地區(qū)集團客戶反映，其下游客戶在配套雜交制種培育的817肉雛雞連續(xù)檢出沙門氏菌。本研究從種雞場、孵化場、運蛋車輛和化驗室多個環(huán)節(jié)作為切入點，找到了817肉雛雞沙門氏菌陽性的來源，為817肉雞沙門氏菌的防控指明了方向。

1 ?材料與方法

1.1 ?試驗對象 ?聊城某種雞場、某運蛋車輛、某孵化場等。

1.2 ?試驗頻次 ?連續(xù)采樣檢測，跟蹤3個月（2月、3月、4月）。

1.3 ?試驗方法 ?沙門氏菌分離培養(yǎng)、生化鑒定、血清學(xué)鑒定、血清平板凝集試驗等。

1.4 ?試劑與儀器 ?緩沖蛋白胨水（BPW），貨號CM201，購自北京陸橋;三糖鐵瓊脂（TSI），貨號CM205，購自北京陸橋;四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(chǔ)（TTB），貨號CM203，購自北京陸橋;營養(yǎng)瓊脂，貨號CM107，購自北京陸橋;沙門氏菌干制生化鑒定試劑盒，貨號DBI-05，購自北京陸橋;沙門氏菌顯色培養(yǎng)基，法國科瑪嘉CHROMagar;沙門氏菌屬診斷血清，購自寧波天潤生物藥業(yè)有限公司;平板凝集試驗抗原，購自北京中海生物;恒溫箱，購自上海樹立儀器;超凈工作臺，購自蘇州蘇潔等。

1.5 ?試驗方案設(shè)計

1.5.1 ?種雞場采樣

1.5.1.1 ?場區(qū)環(huán)境 ?樣品包括雞舍的風(fēng)機、籠具、地面、糞便、水線水、水源水、料塔料等，以及蛋庫的地面、蛋盤、蛋筐、中央鏈條等，設(shè)置20%的陰性對照樣品。地面穿著鞋套采樣，糞便用棉拭子采樣，水樣、料塔料用無菌均質(zhì)袋采樣，其他用紗布采樣。具體采樣方法，詳見種雞場微生物采樣SOP。

1.5.1.2 ?雞群血清 ?每月每個雞舍，例行性地送檢30份血清，進行血清平板凝集試驗。

1.5.1.3 ?雞蛋樣品 ?每個雞舍取30枚雞蛋，10個雞蛋的蛋殼合并為1個蛋殼樣品，10個雞蛋的蛋清蛋黃（1 mL蛋清+1 mL蛋黃）合并為1個內(nèi)容物樣品，每個雞舍共計3個蛋殼樣品和3個內(nèi)容物樣品。

1.5.2 ?運蛋車輛采樣 ?對種雞場固定的運蛋車輛進行無菌紗布采樣，采樣部位包括駕駛室、車廂內(nèi)、車底盤等。

1.5.3 ?孵化場采樣

1.5.3.1 ?入孵前環(huán)境 ?采樣部位包括入孵的孵化器內(nèi)環(huán)境，如內(nèi)壁、地面、進風(fēng)口、蛋車等，以及前工序樣品。

1.5.3.2 ?落盤前環(huán)境 ?同入孵前環(huán)境采樣。

1.5.3.3 ?孵化19d環(huán)境 ?采樣部位包括出雛器內(nèi)環(huán)境，如內(nèi)壁、地面、進風(fēng)口、蛋車等，以及斷喙機、打針機等后工序樣品。

1.5.3.4 ?出雛當(dāng)天環(huán)境 ?同孵化19d環(huán)境采樣。

1.5.3.5 ?雛雞樣品 ?包括健雛、弱雛、終止胚、胎糞等，采樣方法見SOP。

1.5.3.6 ?孵化場環(huán)境樣品 ?使用紗布采樣，設(shè)置20%的陰性對照。

1.5.4 ?化驗室采樣 ?樣品包括采樣箱、恒溫箱、超凈臺、地面、桌面、人員手部等。

1.5.5 ?檢測方法 ?流程見圖1。

2 ?結(jié)果與分析

連續(xù)三次采樣檢測：第一次，在孵化場出雛器的進風(fēng)口和地面中分離出腸炎沙門氏菌（SE）;第二次，在孵化場的絨毛和消毒后紙盒中分離出SE;第三次，在種雞場、孵化場、車輛和化驗室的樣品中均未檢出沙門氏菌。詳細(xì)結(jié)果見表1和表2。

3 ?討論

1988年8月17日，山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所首創(chuàng)了利用快大型白羽肉雞父母代父系公雞作父本、高產(chǎn)褐殼蛋雞商品代作母本的雜交制種模式，培育出專門為扒雞而生的小型優(yōu)質(zhì)肉雞，使扒雞生產(chǎn)實現(xiàn)了現(xiàn)代化、標(biāo)準(zhǔn)化，稱為“817肉雞”。除了用于加工德州扒雞外，817肉雞還開發(fā)出西裝雞、調(diào)理雞、燒雞、烤雞等豐富的熟食加工產(chǎn)品，主產(chǎn)地區(qū)也從山東逐漸擴展到河北、河南、江蘇等地。

然而，817肉雞面臨著制種不規(guī)范、飼料營養(yǎng)等配套技術(shù)不完善、垂直傳播疾病等問題困擾。其中，沙門氏菌是817肉雛雞生產(chǎn)中發(fā)病率高、危害性大的一種常見病，較突出的主要是白痢、腸炎、傷寒等血清型沙門氏菌。

2019年末，據(jù)山東聊城某集團客戶反映，其下游客戶在配套雜交選育的817肉雛雞中連續(xù)多次檢出沙門氏菌，造成較大的經(jīng)濟損失和食品安全問題。為了滿足客戶急切需求，開展了本次沙門氏菌溯源調(diào)查。結(jié)果顯示，種雞場、運蛋車輛、化驗室樣品中均未檢出沙門氏菌，只在孵化場環(huán)境檢出腸炎沙門氏菌，具體在出雛器的進風(fēng)口和地面以及消毒后紙盒和絨毛。這表明，種雞場、運蛋車輛的沙門氏菌控制取得了一定的成效，而孵化場環(huán)境中存在沙門氏菌的污染，原因可能是沖洗消毒不徹底或其他部位交叉?zhèn)魅?。原來的檢測數(shù)據(jù)顯示，在雛雞中多次檢出沙門氏菌，筆者認(rèn)為，這除了孵化場污染的因素外，種雞自身也可能存在感染，只是感染量很低，或者檢測方法的靈敏度差。本次雛雞中未檢出沙門氏菌而從孵化場環(huán)境檢出，雛雞未從污染的環(huán)境中感染沙門氏菌，這可能與感染量、檢測方法及其他因素有關(guān)。

沙門氏菌污染的破蛋是孵化場污染最主要的風(fēng)險，因此種雞場的地上蛋、臟蛋、洗過的蛋都不應(yīng)上架;絨毛飛散是孵化期間交叉感染控制的難點，要防止絨毛通過空氣、人或物的流動從陽性禽群向陰性禽群的轉(zhuǎn)移[3]。姬久玲等[4]建議，孵化場內(nèi)禁止人和物的逆向流動，塑料蛋托采用浸泡消毒，孵化工具和免疫工具等做到專廳專用，入孵前嚴(yán)格控制種蛋表面微生物，入孵1胚齡、18胚齡落盤和出雛率達(dá)50%時，采用福爾馬林熏蒸消毒，以避免孵化過程的污染。嚴(yán)格的生物安全管理、減少孵化器（密度）的數(shù)量以及監(jiān)控水質(zhì)等，有助于實現(xiàn)孵化場無沙門氏菌[5]的目標(biāo)。另外，下水道和排風(fēng)扇也應(yīng)作為孵化場沙門氏菌監(jiān)測的重要對象，并保證通風(fēng)的風(fēng)向合理[6]。

要想實現(xiàn)無沙門氏菌的狀態(tài)，不僅孵化場要嚴(yán)格執(zhí)行全面徹底的衛(wèi)生消毒程序，還要依靠種雞場的一系列生物安全措施，前者是為了杜絕上一批次的污染，后者則是要求提供清潔的可入孵種蛋，兩者相輔相成，缺一不可[7]。有研究指出[8]，飼料（原料）、微生態(tài)制劑、酶制劑等存在嚴(yán)重的沙門氏菌污染，應(yīng)制定嚴(yán)格的采購標(biāo)準(zhǔn)，飼料廠各部位的沙門氏菌污染也很嚴(yán)重，建議減少粉塵，保證衛(wèi)生無菌，并定期監(jiān)測。

因此，接下來會就孵化場出雛器等各環(huán)節(jié)進行跟蹤，并制定相應(yīng)的防控方案;同時，持續(xù)推進、嚴(yán)格落實種雞場的生物安全各項制度與措施，最終達(dá)到凈化沙門氏菌的目標(biāo)。

4 ?結(jié)論

聊城地區(qū)817肉雛雞沙門氏菌的溯源調(diào)查結(jié)果顯示，種雞場、運蛋車輛均未檢出沙門氏菌，而從孵化場的出雛器出風(fēng)口、地面及消毒后紙盒、絨毛中分離出腸炎沙門氏菌。這揭示了，孵化場是雛雞沙門氏菌防控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，今后應(yīng)該把更多的精力放在孵化場的生物安全上，最終達(dá)到凈化沙門氏菌的目標(biāo)。

參考文獻：

[1] ?曹頂國，雷秋霞，韓海霞，等. 817肉雞的發(fā)展歷程和發(fā)展趨勢[A].中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2018年學(xué)術(shù)年會禽病學(xué)分會第十九次學(xué)術(shù)研討會論文集[C].北京：中國畜牧獸醫(yī)協(xié)會，2018：29.

[2] ?雷秋霞，逯巖，曹頂國. 817肉雞在我國肉雞生產(chǎn)中的地位和作用[J]. 家禽科學(xué)，2019（7）：3-5.

[3] ?王芳，譯. 孵化場沙門氏菌的控制[J]. 孵禽技術(shù)，2001，18（8）：30.

[4] ?姬久玲，盧運體.孵化場衛(wèi)生消毒管理要點[J]. 家禽科學(xué)，2008，6：24.

[5] ?鄭書軒（譯）.孵化場實現(xiàn)無沙門氏菌污染的重要步驟[J].國外畜牧學(xué)-豬與禽，2017，37（1）：7-10.

[6] ?郝春光.孵化場的衛(wèi)生與檢測[J]. 中國禽業(yè)導(dǎo)刊，2016，33（8）：65-66.

[7] ?高娃，孫許遠(yuǎn)，譯. 潘雪男，校. 孵化場內(nèi)的有效衛(wèi)生措施[J]. 國外畜牧學(xué)-豬與禽，2011，31（1）：57-59.

[8] ?郭昱含.家禽沙門氏菌傳播途徑及防控措施[J]. 國外畜牧學(xué)-豬與禽，2019，39（8）：95-98.

Abstract：In order to find out the source of Salmonella in 817 chick broilers in Liaocheng area of Shandong Province， and critical time point for Salmonella to turn positive， continuous sampling and detection were done for three times， by the methods of isolation， culture， biochemical and serological identification of Salmonella. The results have been shown that Salmonella enteritidis was isolated from the air inlet and ground of hatcher in the hatchery for the first time， and Salmonella enteritidis was isolated from the chick down and sterilized cartons in the hatchery， secondly. This study have suggested that hatchery is a high risk link of Salmonella contamination. For this reason， the supervision of disinfection of hatchery should be strengthened to ensure the quality of chicks.

Key words： Salmonella enteritidis; 817 chick broilers; isolation and culture; hatchery; hatcher