姚麗 李恭鵬 張恒麗 程珊 劉文文 李朋

血液分析儀具有準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好、檢測速度快等優(yōu)點，是現(xiàn)階段國內(nèi)各級醫(yī)院臨床實驗室血常規(guī)檢測的常用儀器，而由血液分析儀和自動制片染色機組成的全自動血液分析流水線也在臨床檢驗工作中逐漸普及。在血常規(guī)檢驗中，血液分析儀有一定局限性，如不能反映細(xì)胞內(nèi)部的微細(xì)變化、對細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)不具備識別功能等，因此只能作為篩選試驗［1］。目前尚無儀器能夠代替顯微鏡血液形態(tài)學(xué)檢查。由于篩選目的不同，2005年國際血液學(xué)專家組推薦的41 條全自動血細(xì)胞分析儀復(fù)檢規(guī)則對不同儀器和不同實驗室并無針對性和特異性，實際執(zhí)行時發(fā)現(xiàn)復(fù)檢率高，國內(nèi)多個實驗室均有報告［2-3］。為制定符合實驗室自身特點的復(fù)檢規(guī)則，許多學(xué)者都對此問題進行了深入的研究［4-7］。基層醫(yī)院由于樣本量大、鏡檢人員相對缺乏等原因，外周血涂片檢查的重要性易被忽視，工作中存在血常規(guī)檢驗“零復(fù)檢”的問題，導(dǎo)致漏診、誤診的出現(xiàn)，尤其是白血病的漏檢對患者造成的損失巨大。如何充分利用血液分析儀提供的結(jié)果和報警信息以及先進的流水線設(shè)備，結(jié)合基層醫(yī)院服務(wù)人群的特點和實驗室實際情況，在不過度增加檢驗工作強度的情況下，盡量在要求的樣本周轉(zhuǎn)時間（turn-around time，TAT）內(nèi)為臨床提供準(zhǔn)確可靠的檢驗報告，是檢驗科面臨的重要問題［8］。

1 材料與方法

1.1 樣本來源 收集2017年3月本院門診、住院患者及體檢人員的3 775 份乙二胺四乙酸（EDTA）-K2抗凝全血標(biāo)本用于本室復(fù)檢規(guī)則的制定；另選同期1 080 份標(biāo)本用于本室復(fù)檢規(guī)則的驗證。收集2017年4 — 9月本院門診、住院患者及體檢人員的樣本，使用本室制定的復(fù)檢規(guī)則進行檢測。

1.2 倫理學(xué) 本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)（審批號：20200622），所有對患者的檢測均獲得過患者或家屬的知情同意。

1.3 儀器與試劑 邁瑞CAL 8000 血液分析流水線包括BC-6800、BC-6900 2 臺血細(xì)胞分析儀和1 臺SC-1200 全自動制片染色機，質(zhì)量控制（質(zhì)控）品、校準(zhǔn)品、試劑均為深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司提供；每日開機后進行室內(nèi)質(zhì)控，儀器均在控。Olympus 雙筒顯微鏡用于血涂片顯微鏡檢查。

1.4 檢測方法

1.4.1 邁瑞CAL 8000 血液分析流水線的工作流程 BC-6800、BC-6900 血液分析儀進行標(biāo)本檢測時，結(jié)果由患者信息管理系統(tǒng)顯示、儲存和判斷，儀器根據(jù)復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)對相關(guān)標(biāo)本通過SC-120 制片染色儀進行制片和染色。BC-6800、BC-6900 血細(xì)胞分析儀由廠家進行校準(zhǔn)，每日開機后用2個濃度全血質(zhì)控品進行嚴(yán)格的室內(nèi)質(zhì)控，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。

1.4.2 上機檢測 用EDTA-K2抗凝真空管采集患者靜脈血標(biāo)本，2h 內(nèi)上機測定，同時每份標(biāo)本由SC-120 制片染色儀推片染色，由本實驗室2 名有經(jīng)驗的中級及以上技術(shù)職稱人員進行顯微鏡鏡檢。

1.4.3 觀察內(nèi)容及陽性標(biāo)準(zhǔn)［9］依據(jù)全國血液學(xué)復(fù)檢專家小組釋義的國際涂片鏡檢陽性規(guī)則進行鏡檢［10］，觀察內(nèi)容及陽性標(biāo)準(zhǔn)包括以下內(nèi)容。

1.4.3.1 白細(xì)胞計數(shù)（white blood cell count，WBC）和血小板計數(shù)（platelet count，PLT） 通過涂片觀察評估WBC、紅細(xì)胞、PLT 與儀器分析結(jié)果的相關(guān)性。1.4.3.2 原始、幼稚細(xì)胞 此項為涂片觀察的重要內(nèi)容，原始、幼稚細(xì)胞比例≥1%。

1.4.3.3 白細(xì)胞分類計數(shù)和形態(tài) 早幼和中幼粒細(xì)胞比例≥1%，晚幼粒細(xì)胞比例＞2%,中毒顆粒或空泡變性的中性粒細(xì)胞比例＞10%，有Dohle 小體的粒細(xì)胞比例＞10%，異型淋巴細(xì)胞比例＞5%。

1.4.3.4 紅細(xì)胞大小和形態(tài) 紅細(xì)胞明顯大小不一（同一視野直徑相差1 倍以上），中心淡染區(qū)擴大（淡染區(qū)大于紅細(xì)胞直徑的1/2）的紅細(xì)胞比例＞30%，畸形紅細(xì)胞比例＞10%,可見有核紅細(xì)胞。

1.4.3.5 血小板大小和形態(tài) 巨大血小板比例＞15%，出現(xiàn)血小板聚集。

1.4.3.6 其他異常 可見瘧原蟲、漿細(xì)胞等。

1.4.4 血涂片復(fù)檢規(guī)則的制定及采取的措施 參考國際血液學(xué)專家組制定的自動血細(xì)胞計數(shù)和白細(xì)胞分類計數(shù)的41 條復(fù)檢規(guī)則，根據(jù)主要針對問題及本院實際情況制定復(fù)檢規(guī)則。見表1。

1.4.5 復(fù)檢規(guī)則的驗證 以鏡檢結(jié)果為“金標(biāo)準(zhǔn)”，對1 080份標(biāo)本運用本室制定的復(fù)檢規(guī)則進行分析，計算復(fù)檢率、假陰性率。假陰性定義為未觸及復(fù)檢規(guī)則但鏡檢結(jié)果為陽性。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)檢規(guī)則有效性的實驗結(jié)果驗證 對1 080 份標(biāo)本按照本室制定的復(fù)檢規(guī)則進行復(fù)檢，結(jié)果顯示復(fù)檢率為10.4%（112/1 080），假陰性率為3.9%（42/1 080），低于國際血液專家組確定的可接受閾值（5%），未發(fā)現(xiàn)白血病漏檢。

表1 邁瑞CAL 8000 血液流水線復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)

2.2 復(fù)檢結(jié)果分析 對2017年4—9月本院門診、住院患者的血液標(biāo)本采用本室復(fù)檢規(guī)則進行復(fù)檢，經(jīng)CAL 8000 血液分析流水線篩選出具有臨床意義的異常結(jié)果共389例，其中紅細(xì)胞大小、形態(tài)異常最多（128例，占32.90%），其次為中性粒細(xì)胞形態(tài)異常（68例，占17.48%）和可見早、中、晚幼粒細(xì)胞（52例，占13.37%），見表2。共檢出血液病14例〔主要為急性粒細(xì)胞白血病、急性早幼粒細(xì)胞白血病、急性粒-單核細(xì)胞白血病、急性單核細(xì)胞白血病、慢性粒細(xì)胞白血病（chronic myelogenous leukemia，CML）、骨髓增生異常綜合征（myelodysplastic syndromes，MDS）〕，追蹤到的病例均經(jīng)骨髓穿刺細(xì)胞學(xué)檢查確診。

表2 389例復(fù)檢標(biāo)本染色鏡檢結(jié)果

3 討論

顯微鏡檢查不僅能補充儀器形態(tài)學(xué)鑒別能力的不足，而且可直觀評估和驗證血細(xì)胞分析儀結(jié)果的可靠性，是判斷血細(xì)胞形態(tài)和病理變化的“金標(biāo)準(zhǔn)”。本研究結(jié)果顯示，本實驗室制定的血液復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)可在不過大增加工作量的情況下，盡量避免白血病的漏檢，在實際工作中較易完成。2017年4 — 9月，本室通過血涂片復(fù)檢及時發(fā)現(xiàn)急性白血病6例，CML 1例，CML 轉(zhuǎn)化為急性白血病1例，MDS 5例，MDS 轉(zhuǎn)化為急性白血病1例，追蹤到的病例均已確診，患者得到及時治療；通過紅細(xì)胞呈緡錢狀改變（外周血未發(fā)現(xiàn)漿細(xì)胞）懷疑多發(fā)性骨髓瘤1例，患者在轉(zhuǎn)診途中病危，到達上級醫(yī)院后經(jīng)搶救無效死亡；糾正血小板聚集導(dǎo)致的血小板假性減少24例，避免了誤診的發(fā)生。

綜上所述，邁瑞CAL 8000 血液流水線可通過信息管理系統(tǒng)設(shè)置復(fù)檢規(guī)則，對于符合復(fù)檢規(guī)則的標(biāo)本，由SC-120 自動推片染色機進行推片染色，且僅需8 min 可完全獨立實現(xiàn)推片的標(biāo)準(zhǔn)化和自動化，提高工作效率。通過顯微鏡涂片復(fù)檢不僅可以篩查白血病，還能檢出血小板聚集引起的血小板假性減少，避免誤診；對于各種貧血可提示臨床進行相關(guān)檢查，查明貧血原因，及時對癥治療；顯微鏡復(fù)檢還可區(qū)分病毒性感染和細(xì)菌性感染的病情程度。CAL 8000 血液流水線與血涂片復(fù)檢聯(lián)合應(yīng)用可有效彌補兩種檢驗方法的不足，提高工作效率和檢驗質(zhì)量，為臨床提供準(zhǔn)確的檢驗報告。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突