范廣來，徐妍，馬希貴，鮑麗娟，劉成全

（淮安市婦幼保健院 1.輸血科，2.中醫(yī)兒科，江蘇 淮安 223002）

對哮喘病情或者治療結(jié)局的有效評估手段能在指導(dǎo)哮喘診療及判斷臨床預(yù)后方面發(fā)揮作用[1]，具有重要的臨床意義。血清學(xué)量化指標(biāo)的分析能在哮喘的診療過程中發(fā)揮參考價(jià)值。干擾素-γ（Interferon-γ, IFN-γ）的表達(dá)上升，能抑制嗜酸性粒細(xì)胞的活化，降低粒細(xì)胞的釋放速度，進(jìn)而減輕呼吸道黏膜過敏性變態(tài)反應(yīng)的程度，降低病情進(jìn)展的速度[2]；白細(xì)胞介素-4（Interleukin-4, IL-4）的表達(dá)上升，能夠加重局部炎癥反應(yīng)的程度，加快炎癥反應(yīng)的播散速度，促進(jìn)下游炎癥信號因子的釋放，進(jìn)而參與到呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)生過程中[3]；白細(xì)胞介素-10（Interleukin-10, IL-10）的表達(dá)上升，能夠調(diào)控T 淋巴細(xì)胞免疫，降低T 淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答水平，進(jìn)而保護(hù)呼吸系統(tǒng)[4]。為揭示IFN-γ、IL-4、IL-10 的表達(dá)與哮喘的關(guān)系，從而為臨床哮喘患者的診療提供參考，本研究選取淮安市婦幼保健院確診的支氣管哮喘急性發(fā)作期患兒作為研究對象，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2015年1月—2018年8月本院確診的支氣管哮喘急性發(fā)作期患兒120例作為哮喘組，另選取同期體檢健康兒童60例作為對照組。哮喘組：男性66例，女性54例；年齡1 ～12 歲，平均（6.3±3.0）歲；病史1 ～5年，平均（2.9±0.8）年。對照組：男性31例，女性29例；年齡1 ～12 歲，平均（6.5±2.9）歲。兩組兒童的年齡、性別比較，差異均無有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試兒的家長簽署知情同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①支氣管哮喘患兒的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②肺部聽診雙肺野可聞及散在或彌漫型存在的以呼氣相為主的哮鳴音，呼氣相延長；③支氣管激發(fā)試驗(yàn)或運(yùn)動(dòng)激發(fā)試驗(yàn)陽性。排除標(biāo)準(zhǔn)：①血液系統(tǒng)疾病；②嚴(yán)重的營養(yǎng)不良、貧血的患兒；③惡性腫瘤；④支氣管發(fā)育畸形；⑤嚴(yán)重肝腎功能障礙；⑥支氣管異物。

1.2 治療方法

對哮喘組患兒給予常規(guī)抗感染、補(bǔ)液、止咳治療，沙丁胺醇（國藥準(zhǔn)字720H53054，南京揚(yáng)子江藥業(yè)），霧化吸入，0.5 ml，2 次/d，霧化15 ～20 min/次，布地奈德（國藥準(zhǔn)字H20030411，南京奧賽康藥業(yè)），0.5 g，霧化15 min/次，2 次/d，連續(xù)治療7 d。

1.3 觀察指標(biāo)及檢查方法

檢測兩組肺功能指標(biāo)。用力肺活量（forced vital capacity, FVC）、第1 秒用力呼氣量（forced expiratory volume in one second, FEV1）、75%呼氣中期流量（75% expiratory flow, MEF75%）、50%呼氣中期流量（50% mid-expiratory flow, MEF50%）、25%呼氣中期流量（25% mid-expiratory flow, MEF25%）、最大呼氣峰值流速（peak expiratory flow rate, PEF），采用德國Jaeger 公司Master Screen 肺功能儀進(jìn)行肺功能的檢測。

檢測兩組的血清IFN-γ、IL-4、IL-10 水平。采集患者入院后24 h 內(nèi)或者治療后6 ～8 h 內(nèi)的肘部靜脈血4 ml，采集對照組兒童肘部靜脈血4 ml，1 500 r/min 離心15 min，收集上清液，在每個(gè)聚苯乙烯板中加入上述液體0.1 ml，4℃過夜孵育，加入磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌3 次，3 min/次，在每個(gè)聚苯乙烯板孔中加入IFN-γ、IL-4、IL-10 抗體（1 ∶800，購自南京伯斯金生物公司），37℃孵育30 min，加入PBS 洗滌3 次，3 min/次，每孔中加入TMB 溶液底物0.1 ml，37℃、20 min，加入2 mol/L 硫酸0.05 ml 終止反應(yīng)，采用DG5033A 酶標(biāo)儀（南京華東電子科技公司）進(jìn)行光密度（OD）值檢測。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 16.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson 法，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清IFN-γ、IL-4、IL-10 水平比較

兩組血清IL-4 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05），哮喘組高于對照組；兩組血清IFN-γ、IL-10水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），哮喘組低于對照組。見表1。

2.2 兩組兒童的肺功能指標(biāo)比較

兩組FVC、FEV1、MEF75%、MEF50%、MEF25%、PEF 比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），哮喘組低于對照組。見表2。

表1 兩組血清IFN-γ、IL-4、IL-10 水平比較 （ng/L，±s）

表1 兩組血清IFN-γ、IL-4、IL-10 水平比較 （ng/L，±s）

組別 n IFN-γ IL-4 IL-10哮喘組 120 58.86±12.25 51.89±16.28 9.63±3.88對照組 60 106.82±21.54 13.62±4.88 19.26±6.20 t 值 -19.028 17.791 -12.754 P 值 0.000 0.000 0.000

2.3 哮喘組患兒治療前后的血清IFN-γ、IL-4、IL-10 水平變化

哮喘組治療前后血清IFN-γ、IL-10 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），治療后較治療前升高；哮喘組治療前后血清IL-4 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），治療后較治療前降低。見表3。

表2 兩組肺功能指標(biāo)比較 （%，±s）

表2 兩組肺功能指標(biāo)比較 （%，±s）

組別 n FVC FEV1 MEF75% MEF50% MEF25% PEF哮喘組 120 74.2±7.6 66.8±6.0 68.6±5.7 55.8±6.0 48.9±6.8 71.6±9.2對照組 60 91.6±6.2 90.5±5.8 110.0±9.3 96.1±8.0 89.1±8.0 98.9±10.5 t 值 -15.356 -25.258 -36.886 -37.877 -35.215 -17.892 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

2.4 哮喘組患兒治療前后的肺功能指標(biāo)變化

哮喘組患兒治療后，F(xiàn)VC、FEV1、MEF75%、MEF50%、MEF25%、PEF 測定值與治療前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），較治療前均升高。見表4。

2.5 哮喘組患兒治療前血清IFN-γ、IL-4、IL-10 水平與肺功能指標(biāo)的相關(guān)性

急性發(fā)作期哮喘患兒的血清IFN-γ、IL-10 水平與FVC、FEV1、PEF 均呈正相關(guān)（P＜0.05），IL-4 水平與FVC、FEV1、PEF 呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。見表5。

表3 哮喘組患兒治療前后的血清IFN-γ、IL-4、 IL-10 水平變化（n =120，ng/L，±s）

表3 哮喘組患兒治療前后的血清IFN-γ、IL-4、 IL-10 水平變化（n =120，ng/L，±s）

時(shí)間 IFN-γ IL-4 IL-10治療前 58.86±12.25 51.89±16.28 9.63±3.88治療后 97.50±18.33 18.26±5.77 16.20±4.91 t 值 -19.199 21.329 -11.501 P 值 0.000 0.000 0.000

表4 哮喘組患兒治療前后的肺功能指標(biāo)變化 （n =120，%，±s）

表4 哮喘組患兒治療前后的肺功能指標(biāo)變化 （n =120，%，±s）

時(shí)間 FVC FEV1 MEF75% MEF50% MEF25% PEF治療前 74.2±7.6 66.8±6.0 68.6±5.7 55.8±6.0 48.9±6.8 71.6±9.2治療后 85.1±6.0 84.8±7.4 97.4±9.8 89.2±7.8 81.8±10.3 88.0±10.3 t 值 -12.331 -20.697 -27.828 -37.180 -29.201 -13.008 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

表5 肺功能指標(biāo)與IFN-r、IL-4、IL-10 的相關(guān)性

3 討論

流行病學(xué)研究顯示，哮喘的發(fā)病率可超過485/ 10 000[6]，在合并有呼吸道高反應(yīng)性的人群中，哮喘的發(fā)病率可進(jìn)一步上升[7]。臨床上哮喘的發(fā)生，能夠?qū)е禄颊咧職埪屎筒∷缆实纳仙?，增加患者近期臨床結(jié)局惡化的風(fēng)險(xiǎn)[8]?，F(xiàn)階段缺乏對哮喘病情評估的血清學(xué)指標(biāo)，雖然超敏C 反應(yīng)蛋白能夠在哮喘的病情評估過程中發(fā)揮作用。但部分研究者已經(jīng)證實(shí)，超敏C 反應(yīng)蛋白評估哮喘病情的一致性率不足45%，其評估的敏感性較低[9]。

IFN-γ 是干擾素家族成員，能夠通過調(diào)控肥大細(xì)胞或者嗜酸性粒細(xì)胞的活性，穩(wěn)定炎癥細(xì)胞的募集程度，進(jìn)而參與到呼吸道病情的進(jìn)展過程中。相關(guān)研究還認(rèn)為，IFN-γ 能夠通過抑制下游炎癥信號通路的激活，降低腫瘤壞死因子-α 的釋放程度，進(jìn)而保護(hù)呼吸道黏膜[10]；IL-4 是炎癥相關(guān)因子，能夠激活B 細(xì)胞，提高其對免疫因子的合成速度，加劇自身免疫復(fù)合物在肺部的沉積。IL-4 還能夠促進(jìn)IgE 介導(dǎo)的免疫反應(yīng)應(yīng)答，加重呼吸道的高反應(yīng)性，促進(jìn)哮喘的病情進(jìn)展[11]；IL-10 作為淋巴細(xì)胞合成抑制因子，能抑制自然殺傷細(xì)胞或者T淋巴細(xì)胞的活化，減輕呼吸道平滑肌的痙攣[12]。有研究者已經(jīng)探討IL-4 或者IL-10 在哮喘患者中的表達(dá)情況[13]，但缺乏對IFN-γ、IL-4、IL-10 的表達(dá)與肺功能或者治療轉(zhuǎn)歸的關(guān)系研究。

本研究發(fā)現(xiàn)，在哮喘患兒血清IL-4 水平上升，而IFN-γ、IL-10 水平下降，提示IL-4、IFN-γ、IL-10水平異常均可能影響哮喘的病情進(jìn)展過程。分析IL-4、IFN-γ、IL-10 水平與哮喘病情進(jìn)展的原因，考慮與下列因素有關(guān)[14-15]：①IL-4 水平上升，能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞釋放集落刺激因子，促進(jìn)其對呼吸道黏膜和平滑肌的損傷；②IFN-γ 的表達(dá)下降，能夠影響到嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子的表達(dá)，上調(diào)趨化因子的富集程度，而IL-10 的表達(dá)下降，能夠?qū)е耇 淋巴細(xì)胞應(yīng)答水平的上升，促進(jìn)其對呼吸道高氣道反應(yīng)性的改變。潘宇紅等[16]研究也發(fā)現(xiàn)，哮喘患者血清IL-4 水平可上升45%以上，在有其他組織臟器功能損害的患者中，IL-4 水平上升更為明顯。治療后的哮喘患兒血清IL-4 水平下降，而IFN-γ、IL-10 水平上升，提示相關(guān)指標(biāo)在治療轉(zhuǎn)歸中具有規(guī)律性變化趨勢，臨床可以通過檢測IL-4、IFN-γ、IL-10，進(jìn)而評估哮喘患兒的治療轉(zhuǎn)歸情況。哮喘患兒肺功能指標(biāo)均下降。哮喘組患兒治療后，F(xiàn)VC、FEV1、MEF75%、MEF50%、MEF25%、PEF測定值均較治療前提高，提示哮喘患兒肺功能的改善。相關(guān)性分析研究可見，IL-4 水平與肺功能指標(biāo)呈負(fù)相關(guān)，而IFN-γ、IL-10 水平與肺功能指標(biāo)呈正相關(guān)，進(jìn)一步提示IL-4、IFN-γ、IL-10 水平與哮喘患兒的病情關(guān)系，這主要由于IL-4、IFN-γ、IL-10 的異常改變，能夠?qū)е卵装Y反應(yīng)、平滑肌增殖及呼吸道重塑，進(jìn)而影響肺功能。

綜上所述，哮喘患兒血清IL-4水平上升，而IFN-γ、 IL-10 水平下降，IL-4、IFN-γ、IL-10 水平與哮喘患兒的肺功能或者治療轉(zhuǎn)歸具有一定的關(guān)系。