肺癌是世界上死亡率最高的癌癥，是全球公共衛(wèi)生的主要威脅[1]。過去三十年，中國肺癌的發(fā)病率和死亡率上升迅速[2]。大多肺癌確診時已是晚期，通常采用放化療等癌癥控制方法，但預(yù)后較差，近年來靶向治療的分子抑制劑也在進(jìn)行臨床試驗[3]。肺癌的分子抑制靶點(diǎn)，是肺癌分子診斷治療的研究重點(diǎn)和熱點(diǎn)。

長鏈非編碼RNA（long non-coding RNAs，lncRNAs）在肺癌發(fā)生、癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后中具有重要的作用[4]，micro RNA（miRNA）的異常表達(dá)與肺癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后及耐藥性密切相關(guān)[5]。lncRNA MAGI2-AS3（MAGI2 antisense RNA 3）在乳腺癌和膀胱癌組織中表達(dá)下調(diào)，與腫瘤的增殖、遷移和侵襲有關(guān)[6-7]。研究表明，MAGI2-AS3在非小細(xì)胞肺癌腫瘤發(fā)生過程中表達(dá)水平降低[8]，但是對細(xì)胞生物行為的作用機(jī)制尚不清楚。miR-31-5p在結(jié)直腸癌、肝細(xì)胞癌、肺癌、膀胱癌和胃癌等癌組織中的表達(dá)異常，miR-31可能參與肺癌的發(fā)生、發(fā)展并與肺癌腫塊的大小相關(guān)[9]。miR-31在非小細(xì)胞肺癌患者血清中表達(dá)上調(diào)，與肺癌臨床診斷和預(yù)后有關(guān)[10]。本研究的生物信息學(xué)預(yù)測發(fā)現(xiàn)，MAGI2-AS3和miR-31-5p含有互補(bǔ)結(jié)合序列。但兩者在腫瘤中的關(guān)系尚不清楚，而兩者作用機(jī)制和在肺癌中的關(guān)系也不清楚。本研究以人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549為研究對象，研究MAGI2-AS3對肺癌的影響，以及miR-31-5p在此機(jī)制中的作用。

材料與方法

一、材料

人肺癌細(xì)胞株A549和人正常肺細(xì)胞株HBE（美國ATCC公司）；F12K培養(yǎng)基、牛血清白蛋白（bovine serun albumin，BSA）、胰蛋白酶Trypsin、二甲基亞礬（dimethyl sulfoxide，DMSO）和四氮唑藍(lán)（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）（美國Sigma-Aldrich公司）；胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）（美國Gibco公司）；Transwell板（美國Corning公司）；雙熒光素酶報告系統(tǒng)（Dual-Luciferase Reporter Assay System）（美國Promega公司）；Lipofectamine 2000 轉(zhuǎn)染試劑、RNA 提取試劑Trizol、實時熒光定量PCR（qRT-PCR）試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒（RTPCR）（美國Invitrogen公司）；雙染色流式法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒、流式細(xì)胞儀（美國BD公司）；顯微鏡、酶標(biāo)儀及PCR儀（美國Bio-Rad公司）。

二、方法

1.細(xì)胞培養(yǎng)：將A549細(xì)胞培養(yǎng)于含10﹪FBS、1﹪青-鏈霉素的F12K培養(yǎng)基中；培養(yǎng)條件：37℃ 5﹪ CO2培養(yǎng)箱，濕度95﹪。將細(xì)胞生長至對數(shù)生長期，消化傳代。

2.細(xì)胞轉(zhuǎn)染和分組：將傳代后對數(shù)生長期的A549細(xì)胞稀釋為1～2×l06個細(xì)胞/mL，以2×l05個細(xì)胞/孔的密度接種于6孔板中，培養(yǎng)細(xì)胞至融合為一層，進(jìn)行轉(zhuǎn)染。首先，用無血清培養(yǎng)液分別稀釋脂質(zhì)體Lipofectamine 2000、待轉(zhuǎn)染載體，取等體積脂質(zhì)體和各組載體混合，室溫孵育20 min，加入到培養(yǎng)好的細(xì)胞孔板中，繼續(xù)培養(yǎng)6 h，棄培養(yǎng)液，換成完全培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染48 h，收集細(xì)胞。根據(jù)轉(zhuǎn)染載體不同分為pcDNA3.1組（轉(zhuǎn)染pcDNA3.1）、pcDNA3.1-MAGI2-AS3組（轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-MAGI2-AS3）、anti-miR-NC組（轉(zhuǎn)染anti-miR-NC）、anti-miR-31-5p組（轉(zhuǎn)染anti-miR-31-5p）、pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-NC組（共轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-MAGI2-AS3和miR-NC）、pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-31-5p組（共轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-MAGI2-AS3和miR-31-5p mimics）。按照下述實驗方法檢測A549細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。

3.qRT-PCR檢測lncRNA MAGI2-AS3和miR-31-5p的表達(dá)：收集各組細(xì)胞，Trizol試劑提取細(xì)胞總RNA，根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書合成cDNA，5×gDNA Eraser Buffer 2 μL，gDNA Eraser 2 μL，RNA 1 g，補(bǔ)水至10 μL；然后在42℃孵育2 min；再加入5×Prime Script Buffer 24 μL，Prime Script RT Enzyme MixⅠ1 μL，RT Prime mix 1 μL，補(bǔ)水至20 μL；37℃ 15 min、85℃ 5 s、4℃保存?zhèn)溆?。取cDNA按照qRT-PCR的說明書進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)體系：2 μL反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、10 μL SYBR Green Mix、Dye Ⅱ 0.5 μL，上下游引物各0.5 μL，補(bǔ)水至20 μL；反應(yīng)程序為：94℃ 4 min；94℃ 30 s、58℃ 30 s、72℃ 30 s，40個循環(huán)；72℃ 5 min。引物序列和擴(kuò)增長度見表1。分別以GAPDH和U6為內(nèi)參，運(yùn)用Bio-Rad PCR系統(tǒng)分析MAGI2-AS3和miR-31-5p相對表達(dá)水平。

表1 引物序列信息

4.MTT實驗檢測細(xì)胞增殖：收集細(xì)胞，胰蛋白酶消化，用培養(yǎng)液稀釋細(xì)胞，以2×103個/孔接種于96孔板中，繼續(xù)培養(yǎng)，當(dāng)培養(yǎng)至24、48、72 h 時進(jìn)行MTT實驗，每孔加入 20 μL（5 mg/mL）MTT，培養(yǎng)4 h，棄上清，加入150 μL DMSO，室溫振蕩5 min，酶標(biāo)儀測定490 nm 吸光度（OD）值。實驗重復(fù)3次。

5.Transwell 實驗檢測細(xì)胞遷移和侵襲：（1）遷移實驗：收集對數(shù)生長期的細(xì)胞，加入含10 g/L BSA的無血清F12K培養(yǎng)基，稀釋細(xì)胞為2×105個/mL。Transwell下層培養(yǎng)孔加入500 μL10﹪FBS培養(yǎng)基作為遷移趨化物，上層小室中加入100 μL細(xì)胞，將上層小室放入下層培養(yǎng)孔培養(yǎng)48 h，取出，棉簽拭去基質(zhì)膠和上層小室的細(xì)胞，4﹪多聚甲醛固定細(xì)胞，0.1﹪結(jié)晶紫染色，顯微鏡隨機(jī)選取3個視野進(jìn)行拍照和計數(shù)。實驗重復(fù)3次。（2）侵襲實驗：以4℃無血清F12K培養(yǎng)基1:3比例稀釋Matrigel，加入上層Transwell 小室，烘干，以下步驟同遷移實驗，培養(yǎng)48 h，固定細(xì)胞，染色，計數(shù)。

6.雙熒光素酶報告實驗：收集轉(zhuǎn)染后A549細(xì)胞接種于24孔板中（1×104個細(xì)胞/孔），繼續(xù)培養(yǎng)，觀察若細(xì)胞融合為一層，進(jìn)行轉(zhuǎn)染，分別構(gòu)建MAGI2-AS3的野生型（WT-MAGI2-AS3）和突變型（MUT-MAGI2-AS3）雙熒光素酶報告載體，分別共轉(zhuǎn)染miR-NC 或miR-31-5p，轉(zhuǎn)染后48 h，收集細(xì)胞，RIPA 裂解液室溫裂解20 min，離心收集上清，加入熒光素酶底物，發(fā)光儀檢測活性。以海腎熒光素酶活性為內(nèi)參照，計算相對熒火蟲熒光素酶活性。為證實MAGI2-AS3是通過調(diào)控miR-31-5p進(jìn)而在肺癌中發(fā)揮作用，將si-NC、si-MAGI2-AS3、pcDNA3.1、pcDNA3.1-MAGI2-AS3分別轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，依次記為si-NC組、si-MAGI2-AS3組、pcDNA3.1組、pcDNA3.1-MAGI2-AS3組。轉(zhuǎn)染48 h后，按照qRT-PCR步驟檢測miR-31-5p表達(dá)水平。si-MAGI2-AS3序列為5'-CCTTCACACTTCCTGCTAT-3'，si-NC序列為5'-UUCUCCGAACGUGUCACGU-3'。實驗重復(fù)3次。

7.流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞凋亡率：收集各組A549細(xì)胞，稀釋，以1×104個/孔接種于6孔板，繼續(xù)培養(yǎng)72 h，Trypsin 消化，收集細(xì)胞，按照凋亡試劑盒說明書進(jìn)行操作，加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL 碘化丙啶（PI）混勻，室溫避光20 min，流式細(xì)胞儀檢測分析細(xì)胞凋亡率。實驗重復(fù)3次。

8.流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞周期：收集各組A549細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌3次，離心沉淀細(xì)胞，棄上清；然后重懸細(xì)胞，加入預(yù)冷的80﹪乙醇，4℃固定過夜；用PBS洗滌細(xì)胞3次，加入核糖核酸酶A（RNase A），37℃孵育30 min，加入碘化啶（PI）染色液，4℃染色15 min，上機(jī)檢測激發(fā)波長488 nm處紅色熒光，用流式細(xì)胞儀和DNA細(xì)胞周期分析軟件對細(xì)胞周期進(jìn)行分析。

三、統(tǒng)計學(xué)分析方法

采用 SPSS21.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，MAGI2-AS3、miR-31-5p表達(dá)、細(xì)胞增殖、周期、凋亡、遷移、侵襲、熒光素酶活性數(shù)據(jù)均采用±s表示。兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗進(jìn)行分析；多組間比較采用單因素方差分析，組內(nèi)多重比較采用SNK-q檢驗。以P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、lncRNA MAGI2-AS3和miR-31-5p在肺癌細(xì)胞A549和正常肺細(xì)胞HBE中的表達(dá)

qRT-PCR 結(jié)果表明，與HBE組相比，A549組的MAGI2-AS3表達(dá)量降低，miR-31-5p表達(dá)量升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜ 0.05，表2）。

表2 MAGI2-AS3和miR-31-5p在細(xì)胞A549和HBE中的表達(dá)（±s，n= 3）

表2 MAGI2-AS3和miR-31-5p在細(xì)胞A549和HBE中的表達(dá)（±s，n= 3）

注：n為實驗重復(fù)次數(shù)

分組 MAGI2-AS3 miR-31-5p HBE組 1.29±0.06 0.25±0.02 A549組 0.48±0.03 1.01±0.05 t值 20.914 24.444 P值 ＜ 0.001 ＜ 0.001

二、過表達(dá)MAGI2-AS3抑制A549細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡

qRT-PCR結(jié)果表明，與pcDNA3.1組相比，pcDNA3.1-MAGI2-AS3組的MAGI2-AS3的表達(dá)量上升（P＜ 0.05，表3）。MTT、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，與pcDNA3.1組相比，pcDNA3.1-MAGI2-AS3組的細(xì)胞活性（OD 490 nm）在48、72 h均下降，細(xì)胞凋亡率上升，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05，表3、圖1）。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，與pcDNA3.1組相比，pcDNA3.1-MAGI2-AS3組G0-G1期細(xì)胞所占比例升高，S期細(xì)胞所占比例降低（P＜ 0.05，表4）。

三、過表達(dá)MAGI2-AS3抑制肺癌細(xì)胞A549 遷移和侵襲

Transwell結(jié)果顯示，與pcDNA3.1組相比，pcDNA3.1-MAGI2-AS3組的A549細(xì)胞遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)均下降（P＜ 0.05，表5、圖2）。

四、抑制miR-31-5p對肺癌細(xì)胞A549增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響

qRT-PCR 結(jié)果表明，與anti-miR-NC組相比，anti-miR-31-5p組的miR-31-5p的表達(dá)量下降（P＜0.05，表6）。MTT、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell 結(jié)果顯示，與anti-miR-NC組相比，anti-miR-31-5p組48、72 h時A549細(xì)胞活性（OD 490 nm）、遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)均下降，細(xì)胞凋亡率上升，G0-G1期細(xì)胞所占比例升高，S期細(xì)胞所占比例降低（P＜ 0.05，表6～7，圖3～4）。

表3 過表達(dá)MAGI2-AS3對細(xì)胞 A549增殖凋亡的影響（±s，n= 3）

表3 過表達(dá)MAGI2-AS3對細(xì)胞 A549增殖凋亡的影響（±s，n= 3）

注：n為實驗重復(fù)次數(shù)

分組 MAGI2-AS3 OD值凋亡率（﹪）24 h 48 h 72 h pcDNA3.1 0.42±0.03 0.46±0.03 0.77±0.06 1.03±0.08 7.23±0.51 pcDNA3.1-MAGI2-AS3 0.85±0.07 0.41±0.03 0.48±0.04 0.68±0.05 19.95±1.25 t值 9.779 2.041 6.966 6.426 16.319 P值 ＜ 0.001 0.111 0.002 0.003 ＜ 0.001

圖1 流式細(xì)胞儀檢測過表達(dá)MAGI2-AS3對細(xì)胞 A549 凋亡的影響

圖2 光學(xué)顯微鏡下觀察過表達(dá)MAGI2-AS3對細(xì)胞A549 遷移、侵襲細(xì)胞數(shù)的影響（結(jié)晶紫染色，×200）。 pcDNA3.1-MAGI2-AS3組（2b圖）細(xì)胞遷移數(shù)目較pcDNA3.1組（2a圖）減少；pcDNA3.1-MAGI2-AS3組（2d圖）細(xì)胞侵襲數(shù)目錄較pcDNA3.1組（2c圖）減少

表4 過表達(dá)MAGI2-AS3對細(xì)胞 A549細(xì)胞周期的影響（﹪，±s，n= 3）

表4 過表達(dá)MAGI2-AS3對細(xì)胞 A549細(xì)胞周期的影響（﹪，±s，n= 3）

注：n為實驗重復(fù)次數(shù)

分組 G0-G1 S G2-M pcDNA3.1 33.56±1.23 32.95±1.06 33.49±1.61 pcDNA3.1-MAGI2-AS3 43.58±2.15 23.01±1.00 33.41±1.60 t值 7.007 11.814 0.061 P值 0.002 ＜ 0.001 0.954

表5 過表達(dá)MAGI2-AS3對細(xì)胞A549 遷移、侵襲的影響（個，±s，n= 3）

表5 過表達(dá)MAGI2-AS3對細(xì)胞A549 遷移、侵襲的影響（個，±s，n= 3）

注：n為實驗重復(fù)次數(shù)

分組 遷移細(xì)胞數(shù) 侵襲細(xì)胞數(shù)pcDNA3.1 124.33±3.09 53.00±3.27 pcDNA3.1-MAGI2-AS3 81.33±2.87 32.00±2.83 t值 17.660 8.411 P值 ＜ 0.001 0.001

五、lncRNA MAGI2-AS3靶向調(diào)控miR-31-5p的表達(dá)

Targetscan 軟件預(yù)測結(jié)果顯示，MAGI2-AS3序列中含有與miR-31-5p互補(bǔ)的核苷酸序列（圖5）。雙熒光素酶報告系統(tǒng)結(jié)果如表8所示，與miR-NC組相比，miR-31-5p組野生型WT-MAGI2-AS3的熒光素酶相對活性下降（P＜ 0.05）；而突變型MUTMAGI2-AS3的熒光素酶相對活性沒有明顯變化。qRT-PCR 結(jié)果表明，與pcDNA3.1組（0.94±0.08）相比，pcDNA3.1-MAGI2-AS3組的miR-31-5p表達(dá)量（0.34±0.03）下降（t= 12.163，P＜ 0.001）；與si-NC組（0.96±0.08）相比，si-MAGI2-AS3組的miR-31-5p表達(dá)量（1.56±0.12）上升（t= 7.206，P=0.002）。

表6 抑制miR-31-5p對細(xì)胞A549增殖、凋亡的影響（±s，n= 3）

表6 抑制miR-31-5p對細(xì)胞A549增殖、凋亡的影響（±s，n= 3）

注：n為實驗重復(fù)次數(shù)

分組 miR-31-5p OD值凋亡率（﹪）24 h 48 h 72 h anti-miR-NC組 1.02±0.06 0.47±0.03 0.78±0.06 1.05±0.08 7.29±0.51 anti-miR-31-5p組 0.48±0.03 0.42±0.03 0.53±0.04 0.76±0.06 18.21±1.24 t值 13.943 2.041 6.005 5.023 14.107 P值 ＜ 0.001 0.111 0.004 0.007 ＜ 0.001

表7 抑制miR-31-5p對細(xì)胞A549 遷移、侵襲及細(xì)胞周期的影響（±s，n= 3）

表7 抑制miR-31-5p對細(xì)胞A549 遷移、侵襲及細(xì)胞周期的影響（±s，n= 3）

注：n為實驗重復(fù)次數(shù)

分組 G0-G1（﹪）S（﹪）G2-M（﹪）遷移細(xì)胞數(shù)（個）侵襲細(xì)胞數(shù)（個）anti-miR-NC組 33.53±1.27 32.91±1.08 33.56±1.68 108.33±2.87 42.33±2.05 anti-miR-31-5p組 41.56±2.19 24.43±1.13 34.01±1.23 76.00±3.74 30.00±1.63 t值 5.494 9.397 0.374 11.878 8.154 P值 0.005 0.001 0.727 ＜ 0.001 0.001

圖3 流式細(xì)胞儀檢測抑制miR-31-5p對細(xì)胞A549 凋亡的影響

圖4 光學(xué)顯微鏡下觀察抑制miR-31-5p對A549細(xì)胞遷移和侵襲的影響（結(jié)晶紫染色，×200）。anti-miR-31-5p組（4b圖）細(xì)胞遷移數(shù)目較anti-miR-NC組（4a圖）減少；anti-miR-31-5p組（4d圖）細(xì)胞侵襲數(shù)目較anti-miR-NC組（4c圖）減少

六、過表達(dá)miR-31-5p可逆轉(zhuǎn)上調(diào)MAGI2-AS3對細(xì)胞A549增殖、遷移、侵襲的抑制作用和凋亡促進(jìn)作用

MTT、Transwell、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果（表9，圖6～7）顯示，與pcDNA3.1組相比，pcDNA3.1-MAGI2-AS3組48、72 h的A549細(xì)胞活性（OD 490 nm）、遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)均下降，細(xì)胞凋亡率上升（P均＜ 0.05）；與pcDNA3.1-MAGI2-AS3組、pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-NC組相比，pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-31-5p組48、72 h的A549細(xì)胞活性（OD 490 nm）在48、72 h均上升，遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)均上升，細(xì)胞凋亡率下降（P均＜ 0.05）。說明過表達(dá)miR-31-5p可逆轉(zhuǎn)上調(diào)MAGI2-AS3對A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的抑制作用和凋亡促進(jìn)作用。

表8 雙熒光素酶報告實驗（±s，n= 3）

表8 雙熒光素酶報告實驗（±s，n= 3）

注：n為實驗重復(fù)次數(shù)

分組 WT-MAGI2-AS3 MUT-MAGI2-AS3 miR-NC組 1.01±0.06 1.01±0.05 miR-31-5p組 0.23±0.02 1.00±0.05 t值 21.361 0.245 P值 ＜0.001 0.819

圖5 MAGI2-AS3 靶向miR-31-5p

圖6 流式細(xì)胞儀檢測過表達(dá)miR-31-5p 能逆轉(zhuǎn)MAGI2-AS3對細(xì)胞A549的凋亡影響

圖7 光學(xué)顯微鏡下觀察過表達(dá)miR-31-5p能逆轉(zhuǎn)MAGI2-AS3對細(xì)胞A549遷移、侵襲的影響（結(jié)晶紫染色，×200）

表9 過表達(dá)miR-31-5p 能逆轉(zhuǎn)lncRNA MAGI2-AS3對細(xì)胞A549的凋亡、增殖及遷移、侵襲的影響（±s，n= 3）

表9 過表達(dá)miR-31-5p 能逆轉(zhuǎn)lncRNA MAGI2-AS3對細(xì)胞A549的凋亡、增殖及遷移、侵襲的影響（±s，n= 3）

注：與pcDNA3.1組比較，aP＜ 0.05；與pcDNA3.1-MAGI2-AS3組比較，bP＜ 0.05；與pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-NC組比較，cP＜ 0.05；n為實驗重復(fù)次數(shù)

分組 miR-31-5p OD值凋亡率（﹪）遷移細(xì)胞數(shù) 侵襲細(xì)胞數(shù)24 h 48 h 72 h pcDNA3.1組 1.02±0.08 0.47±0.04 0.76±0.07 1.04±0.09 7.23±0.51 125.00±2.16 81.67±2.49 pcDNA3.1-MAGI2-AS3組 0.34±0.02a 0.42±0.04 0.49±0.04a 0.69±0.05a 20.59±1.11a 53.33±2.87a 32.33±2.35a pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-NC組 0.35±0.02a 0.43±0.04 0.50±0.04a 0.71±0.05a 21.11±1.14a 52.67±2.62a 31.67±4.03a pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-31-5p組 0.78±0.06abc 0.44±0.04 0.68±0.06abc 0.95±0.07abc 10.59±1.01abc 91.00±1.63abc 62.67±2.49abc F值 558.665 2.625 55.256 60.850 155.664 642.749 207.998 P值 ＜ 0.001 0.067 ＜ 0.001 ＜ 0.001 ＜ 0.001 ＜ 0.001 ＜ 0.001

討 論

肺癌是全世界最大的癌癥殺手，吸煙是肺癌的主要原因[11]。2015年我國的肺癌新發(fā)病例約55萬例，死亡約49.5萬例[12]?，F(xiàn)階段，研究肺癌的分子抑制機(jī)制，是肺癌精準(zhǔn)治療的關(guān)鍵。

現(xiàn)有研究表明，lncRNA與miRNA可通過相互調(diào)控作用促進(jìn)或抑制腫瘤的形成、進(jìn)展[13]。多個lncRNA和miRNA對肺癌的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、預(yù)后及診斷等起重要作用[14-15]。Yin 等[16]研究發(fā)現(xiàn)，MAGI2-AS3在肝癌組織中的表達(dá)下調(diào)，并且與一些臨床特征（腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤壞死因子分期）和較差的總生存率密切相關(guān)，MAGI2-AS3 通過靶向miR-374b-5p/SMG1 信號通路抑制肝癌細(xì)胞增殖和遷移。Du 等[17]研究發(fā)現(xiàn)，MAGI2-AS3在乳腺癌組織中的表達(dá)下調(diào)，過表達(dá)MAGI2-AS3可通過靶向miR-374a/PTEN 通路抑制乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲。Luo 等[18]研究表明，非小細(xì)胞肺癌患者血漿和血小板中MAGI2-AS3的水平明顯低于健康對照組，MAGI2-AS3水平與腫瘤轉(zhuǎn)移（TNM）分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有相關(guān)性。Hao 等[19]最新研究發(fā)現(xiàn)，MAGI2-AS3在NSCLC中表達(dá)下調(diào)，過表達(dá)MAGI2-AS3 通過miRNA-23a-3p/PTEN 軸抑制NSCLC的增殖和侵襲能力。本研究發(fā)現(xiàn)，MAGI2-AS3在肺癌細(xì)胞A549中表達(dá)量降低，過表達(dá)MAGI2-AS3可以抑制A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，與上述結(jié)果一致，且過表達(dá)MAGI2-AS3 還可阻滯細(xì)胞周期，說明MAGI2-AS3在肺癌的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[19]。

miR-31-5p在多種腫瘤組織中表達(dá)異常，與腫瘤增殖、進(jìn)展和預(yù)后有關(guān)。Yi-Hsuan 等[20]發(fā)現(xiàn)，miR-31-5p在口腔鱗狀細(xì)胞癌（OSCC）組織中表達(dá)上調(diào)，其通過靶向ACOX1 改變脂質(zhì)代謝，從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)信號改變增強(qiáng)細(xì)胞的運(yùn)動，調(diào)控癌細(xì)胞遷移和侵襲。Fu 等[21]研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-31-5p 過表達(dá)降低了細(xì)胞周期蛋白A2（Cyclin A2）的水平，并抑制人精原干細(xì)胞的增殖。Zhao 等[22]miR-31-5p 過表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞的生長，遷移和侵襲，且降低了細(xì)胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的表達(dá)。Yan 等[23]發(fā)現(xiàn)在肺腺癌組織中，miR-31-5p表達(dá)量上升，高表達(dá)水平的患者具有較長的生存期。Zhu 等[24]研究表明，miR-31-5p在肺癌H1299和A549細(xì)胞系中表達(dá)量上調(diào)，過表達(dá)miR-31-5p可通過靶向FIH 增強(qiáng)Warburg 效應(yīng)，上調(diào)有氧糖酵解基因維持能量平衡，增強(qiáng)糖酵解和ATP的產(chǎn)生，促進(jìn)細(xì)胞增殖。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-31-5p在肺癌細(xì)胞A549中表達(dá)量上調(diào)，與Yan 等[23]和Zhu 等[24]結(jié)果一致；抑制miR-31-5p可抑制A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，阻滯細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，證實了miR-31-5p在肺癌中具有重要作用。

通過對兩者序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析，本研究發(fā)現(xiàn)，MAGI2-AS3序列中含有與miR-31-5p互補(bǔ)的核苷酸序列，預(yù)示MAGI2-AS3與miR-31-5p之間可能存在結(jié)合位點(diǎn)或者調(diào)控關(guān)系。通過進(jìn)一步雙熒光素酶報告系統(tǒng)實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MAGI2-AS3靶向負(fù)調(diào)控miR-31-5p的表達(dá)。本研究證實了，在肺癌A549細(xì)胞中MAGI2-AS3和miR-31-5p之間的調(diào)控關(guān)系。

本研究首次闡述了，在肺癌A549細(xì)胞中，上調(diào)MAGI2-AS3可靶向抑制miR-31-5p的表達(dá)，進(jìn)而抑制A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。MAGI2-AS3是肺癌的潛在分子靶點(diǎn)，為肺癌的分子靶向治療提供了新的方向。本研究僅在肺癌細(xì)胞A549中探討了MAGI2-AS3的生物學(xué)功能，至于其具體的功能和機(jī)制仍需在多種肺癌細(xì)胞系中驗證。