文│宋恒元（遼寧省遼寧絨山羊原種場有限公司）

張寶生 于哲（凌源禾豐牧業(yè)有限責(zé)任公司）

非洲豬瘟疫情發(fā)生后，國家高度重視地方豬遺傳資源保護(hù)工作，先后出臺(tái)了《國務(wù)院辦公廳關(guān)于加強(qiáng)農(nóng)業(yè)種質(zhì)資源保護(hù)與利用的意見》，印發(fā)了《農(nóng)業(yè)農(nóng)村部辦公廳關(guān)于加強(qiáng)地方豬遺傳資源保護(hù)工作的通知》，制定了《國家級(jí)地方豬遺傳材料采集保存工作實(shí)施方案》，要求加大地方品種收集力度，應(yīng)保盡保，確保地方豬遺傳資源不喪失。

荷包豬是遼西山區(qū)一帶自然形成的原始優(yōu)良地方品種，具有性成熟早、繁殖力高、抗逆性強(qiáng)、耐粗飼的優(yōu)良特性，是我國寶貴的地方良種資源，已被列入《國家畜禽品種資源保護(hù)名錄》。筆者團(tuán)隊(duì)承擔(dān)了荷包豬的遺傳資源保護(hù)工作，在接到任務(wù)后按照相關(guān)要求，積極開展推進(jìn)遺傳材料采集制作工作，項(xiàng)目得到相關(guān)單位的多方支持與協(xié)助，在冷凍精液的遠(yuǎn)距離跨區(qū)協(xié)作上進(jìn)行了一些有益探索，并取得初步進(jìn)展。

一、領(lǐng)導(dǎo)重視，部門支持

遼寧省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)基地建設(shè)工程中心（以下簡稱“省農(nóng)業(yè)工程中心”）是項(xiàng)目承擔(dān)企業(yè)的上級(jí)領(lǐng)導(dǎo)單位，省農(nóng)業(yè)工程中心黨組對(duì)該項(xiàng)工作非常重視。項(xiàng)目意向下達(dá)后，省農(nóng)業(yè)工程中心和遼寧省畜牧部門領(lǐng)導(dǎo)第一時(shí)間分別與遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心及所屬單位遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心溝通協(xié)調(diào)，最后達(dá)成一致意見，將荷包豬遺傳材料采集制作所要進(jìn)行的病原檢測，列入遼寧省秋季豬疫病監(jiān)測項(xiàng)目，既解決了荷包豬遺傳材料采集制作疫病檢測問題，又解決了項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)不足的問題，使項(xiàng)目得以按計(jì)劃正常運(yùn)行。項(xiàng)目資金到位后，召開了省農(nóng)業(yè)工程中心黨組會(huì)，就項(xiàng)目的實(shí)施方案、進(jìn)度和資金使用進(jìn)行專門研究，形成會(huì)議紀(jì)要，并把項(xiàng)目作為2020年度的重點(diǎn)工作來抓。

二、任務(wù)分工，多方協(xié)作

項(xiàng)目承擔(dān)單位按照省農(nóng)業(yè)工程中心要求，積極與相關(guān)協(xié)作單位就疫病監(jiān)測、遺傳材料制作、供體物品籌措等具體細(xì)節(jié)問題進(jìn)行協(xié)商，做好遺傳材料采集制作的前期準(zhǔn)備工作。項(xiàng)目承擔(dān)單位負(fù)責(zé)方案制定、疫病監(jiān)測協(xié)調(diào)、人員培訓(xùn)、耗材采購、采集制作單位聯(lián)系詢價(jià)、簽訂技術(shù)服務(wù)合同、精液運(yùn)送、遺傳材料入庫和數(shù)據(jù)收集與上報(bào)等工作。

凌源禾豐牧業(yè)有限責(zé)任公司荷包豬保種場負(fù)責(zé)種公豬飼養(yǎng)管理與調(diào)教、采精訓(xùn)練、采精與精液稀釋、疫病監(jiān)測采樣送檢、耳組織和糞便采集、供體豬系譜、測定數(shù)據(jù)和照片等工作。北京田園奧瑞生物科技有限公司負(fù)責(zé)荷包豬冷凍精液生產(chǎn)制作和保存工作。錦州醫(yī)科大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院負(fù)責(zé)荷包豬體細(xì)胞采集培養(yǎng)制作工作。真正做到專業(yè)事交給專業(yè)人做，發(fā)揮各個(gè)方面的人員優(yōu)勢，爭取高質(zhì)量完成上級(jí)領(lǐng)導(dǎo)機(jī)關(guān)交付的工作。

三、做好技術(shù)培訓(xùn)，嚴(yán)格經(jīng)費(fèi)管理

在正式開展遺傳材料采集制作工作前，承擔(dān)單位對(duì)參與項(xiàng)目的所有實(shí)際操作人員進(jìn)行技術(shù)培訓(xùn)，保證人員熟練掌握操作規(guī)程和技術(shù)規(guī)范要求，同時(shí)開展預(yù)試驗(yàn)，保證項(xiàng)目實(shí)施效果。省農(nóng)業(yè)工程中心計(jì)劃財(cái)務(wù)部負(fù)責(zé)資金使用把關(guān)，嚴(yán)格按照預(yù)算支出，專款專用。

四、做好種豬疫病防控，穩(wěn)妥推進(jìn)項(xiàng)目實(shí)施

2019年12月，遼寧省西部地區(qū)出現(xiàn)非洲豬瘟疑似病例，省市政府行政主管部門要求生豬養(yǎng)殖場采取嚴(yán)格的防控措施，保障豬場安全。凌源禾豐牧業(yè)有限責(zé)任公司荷包豬保種場位于該區(qū)域內(nèi)，為了確保荷包豬保種場防疫安全，該場采取了嚴(yán)格的封鎖隔離措施，所有外部人員、器材設(shè)備絕不允許進(jìn)入場區(qū)，打破了原計(jì)劃于2019年12月開始的制作冷凍精液和體細(xì)胞工作，從而影響了項(xiàng)目正常實(shí)施進(jìn)度。2020年1月下旬，鑒于當(dāng)?shù)胤侵挢i瘟疫情形勢，為了解決問題，經(jīng)過與保種場領(lǐng)導(dǎo)溝通，采取“一分為二、分群保種”管理模式，將核心群公母豬按照血統(tǒng)一分為二，將復(fù)制群種豬飼養(yǎng)于相距10千米外的獨(dú)立豬場，待春節(jié)后利用復(fù)制群的種豬開展遺傳材料采集制作工作，最大限度規(guī)避由于工作而帶來的疫情風(fēng)險(xiǎn)。

五、做好新冠肺炎疫情防控，加快復(fù)工復(fù)產(chǎn)步伐

原計(jì)劃春節(jié)后北京田園奧瑞生物科技有限公司到保種場現(xiàn)場制作荷包豬冷凍精液，由于新冠肺炎疫情的影響這項(xiàng)工作不能正常進(jìn)行，這種情況一直持續(xù)到2020年3月末。進(jìn)入4月，盡管新冠肺炎疫情防控形勢有所好轉(zhuǎn)，人員流動(dòng)逐漸放開，但是北京地區(qū)疫情防控形勢依然嚴(yán)峻，尤其是跨省人員流動(dòng)管控非常嚴(yán)格，給工作帶來較大障礙。為及早完成冷凍精液制作工作，經(jīng)上級(jí)主管部門—新冠肺炎疫情防控領(lǐng)導(dǎo)小組研究同意，筆者團(tuán)隊(duì)采取特事特辦的工作思路，與冷凍精液生產(chǎn)企業(yè)協(xié)商，采取鮮精遠(yuǎn)距離運(yùn)送，冷凍精液實(shí)驗(yàn)室固定生產(chǎn)的辦法，既滿足了新冠肺炎疫情防控要求，同時(shí)也加快了復(fù)工復(fù)產(chǎn)的步伐。體細(xì)胞、耳組織、新鮮糞便采集制作也陸續(xù)開展，為了搶進(jìn)度，筆者團(tuán)隊(duì)采取了遺傳材料采集制作與病原檢測同步進(jìn)行，待檢測報(bào)告出來后決定留存?zhèn)€體遺傳材料的方法。

六、注重細(xì)節(jié)，保障安全

凌源禾豐牧業(yè)有限責(zé)任公司荷包豬保種場按照冷凍精液生產(chǎn)企業(yè)的技術(shù)要求、注意事項(xiàng)和提供的冷凍精液試劑進(jìn)行采精、稀釋、分裝，由專車連夜行駛4小時(shí)送至350千米外的冷凍精液實(shí)驗(yàn)室，使得從采精到凍精制作不超過20小時(shí)，保證凍前活力≥85%，當(dāng)天順利完成冷凍精液制作。精液經(jīng)液氮環(huán)境保存3天后解凍檢測，活力達(dá)到52.3%～81.1%，效果喜人。為了做好各方人員對(duì)新冠肺炎疫情的防控，采精、運(yùn)輸、制作三方人員互不接觸，并全程戴口罩，設(shè)備嚴(yán)格消毒。運(yùn)輸車輛配備兩名司機(jī)，接到鮮精后輪流開車，同時(shí)接受新冠肺炎疫情防控監(jiān)測點(diǎn)的體溫檢查，中途不在飯?zhí)糜貌?，避免交叉感染。有了此次成功?jīng)驗(yàn)，下一步預(yù)計(jì)每隔7～10天采精一次，約需7次可以生產(chǎn)近8000支0.5毫升規(guī)格細(xì)管的冷凍精液，滿足保種要求。

七、豬冷凍精液生產(chǎn)過程簡析

盡管受到非洲豬瘟疫情以及新冠肺炎疫情雙重壓力影響，但筆者團(tuán)隊(duì)保種工作一直沒有停下腳步，精液順利送到完成交接后，由北京田園奧瑞生物科技有限公司豬冷凍精液生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)室（唐山玉田站）實(shí)施后續(xù)的豬冷凍精液生產(chǎn)工作。

1.精液質(zhì)量檢測與分析。對(duì)送到的精液質(zhì)量使用精子質(zhì)量分析系統(tǒng)盡快做出分析判斷，并做好相關(guān)記錄工作，如檢測精液活力、精子密度、采精量等，決定精液是否合格，能否繼續(xù)下一步的流程以備后續(xù)查詢比對(duì)。

2.精液降溫。采用17℃恒溫箱運(yùn)輸，用溫度計(jì)監(jiān)測精液溫度，為離心工作做準(zhǔn)備。

3.精液離心。使用豬凍精專用離心機(jī)在17℃的環(huán)境下對(duì)豬精液進(jìn)行離心工作，去掉上清液留下需要的富含精子部分。

4.加入冷凍保護(hù)試劑。加入配制好的冷凍試劑I液，使精子重新懸浮，給精子提供營養(yǎng)物質(zhì)以及為冷凍保護(hù)做好基礎(chǔ)工作。

5.精液低溫平衡。把加入冷凍試劑I液的精液放入平衡儀中，按照設(shè)定好的降溫時(shí)間和速率降到4℃。

6.精液灌裝。平衡好的精液在低溫操作柜中完成冷凍試劑II液的添加，并使用細(xì)管灌裝封口一體機(jī)完成精液的灌裝，將灌裝好的精液細(xì)管碼放到冷凍儀細(xì)管托架上。

7.程序冷凍。載有精液細(xì)管的托架放入準(zhǔn)備好的程序冷凍儀中，用電腦程序軟件控制降溫溫度、降溫速度和降溫時(shí)間，細(xì)管精液按照指定溫度曲線完成降溫。

8.凍精保存。制作好的冷凍精液經(jīng)檢測合格后放入液氮罐長久保存，定時(shí)添加液氮，保證冷凍精液安全。

地方豬保種大多采用本交方式，采精困難。凌源禾豐牧業(yè)有限責(zé)任公司荷包豬保種場技術(shù)人員克服困難，采用發(fā)情母豬完成地方豬精液采集工作。由于不是規(guī)律采精，精液質(zhì)量偏差較大，地方豬品種可用公豬選擇余地較小，筆者團(tuán)隊(duì)在精液活力低、密度低的情況下積極做好了地方豬保種工作。