文│韓海燕 蔡擴(kuò)軍（新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市動(dòng)物疾病控制與診斷中心）

王承（新疆維吾爾自治區(qū)獸藥飼料監(jiān)察所）

大腸桿菌O157∶H7血清型是腸出血性大腸桿菌的代表菌株，為革蘭氏染色陰性菌，具有較強(qiáng)的耐酸性，可產(chǎn)生大量的Vero毒素，是主要的致病因子，能引起人的出血性腹瀉和腸炎，患者大多數(shù)急性起病，嚴(yán)重的感染者一周后可發(fā)生溶血性尿毒綜合征，并可出現(xiàn)竇性心動(dòng)過(guò)緩、驚厥和血小板減少性紫癜等并發(fā)癥，可導(dǎo)致死亡。該病多發(fā)生于夏秋兩季，主要以散發(fā)性為主。大腸桿菌O157∶H7的攜帶者可能是海鷗、羊、豬、馬、鹿、鴿子、牛、雞等動(dòng)物，畜禽肉食品供應(yīng)鏈中牛肉是主要的傳播載體。

為了解大腸桿菌O157∶H7在新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊地區(qū)畜禽肉供應(yīng)鏈中的存在風(fēng)險(xiǎn)，本研究用熒光PCR方法對(duì)畜禽肉供應(yīng)鏈的肉品以及環(huán)境拭子中的大腸桿菌O157∶H7進(jìn)行監(jiān)測(cè)，以期為保障本地區(qū)畜禽肉食品安全提供技術(shù)支撐。

一、材料與方法

1.主要試劑。大腸桿菌O157∶H7熒光PCR檢測(cè)試劑盒；細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒；改良EC肉湯。

2.主要儀器。熒光PCR儀（ABI 7500型）；全自動(dòng)核酸提取儀；II級(jí)生物安全柜；恒溫培養(yǎng)箱；高壓滅菌器。

◎圖1 熒光PCR檢測(cè)結(jié)果

3.取樣環(huán)節(jié)及數(shù)量。畜禽肉供應(yīng)鏈的五大環(huán)節(jié)一共取樣量588份，各個(gè)環(huán)節(jié)取樣數(shù)量見(jiàn)表1。

二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

1.增菌。將肉類樣品（100克）放入一次性培養(yǎng)皿，用彎剪和鑷子取樣品的中間和四周，剪碎，取25克樣品加入到含有225毫升EC肉湯增菌液的均質(zhì)袋中，于（36±1）℃培養(yǎng)18～24小時(shí)。

表1 各個(gè)環(huán)節(jié)取樣數(shù)量表 份

取環(huán)境拭子或糞便樣品時(shí)，提前將6毫升EC肉湯在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)分裝至離心管。在采樣地點(diǎn)，將離心管蓋子快速打開(kāi)，將涂抹好的環(huán)境拭子或糞便快速放入，蓋上蓋子，運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室后在（36±1）℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24小時(shí)。

2.熒光PCR檢驗(yàn)。取1～5毫升菌液，按照細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)提取細(xì)菌基因組DNA作為模板，根據(jù)大腸桿菌O157∶H7熒光PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)DNA模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定。

三、檢驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)熒光PCR檢測(cè)，588份樣品中均未檢出大腸桿菌O157：H7。說(shuō)明在此次檢測(cè)過(guò)程中所取樣品未發(fā)現(xiàn)受大腸桿菌O157：H7污染。

四、結(jié)論

所取的588份樣品均未檢出大腸桿菌O157：H7，說(shuō)明目前該地區(qū)在養(yǎng)殖、屠宰、運(yùn)輸、貯存、銷售等環(huán)節(jié)上大腸桿菌O157：H7污染的風(fēng)險(xiǎn)較低。但是有其他省市分離鑒定出大腸桿菌O157：H7相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，鑒于大腸桿菌O157：H7的對(duì)食品安全造成的危害性較大，需要密切關(guān)注。在實(shí)地研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，屠宰環(huán)節(jié)是畜禽肉供應(yīng)鏈中食源性病原微生物污染風(fēng)險(xiǎn)最高的環(huán)節(jié)，如果操作不規(guī)范很容易造成細(xì)菌的交叉污染，相關(guān)部門和企業(yè)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)畜禽肉供應(yīng)鏈涉及人員的宣傳培訓(xùn)。同時(shí)，建議有關(guān)部門建立畜禽交易市場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、超市的清洗消毒規(guī)范，尤其對(duì)畜禽肉類直接接觸的環(huán)境和物品進(jìn)行規(guī)范的清洗和消毒，減少食源性病原微生物傳播的概率。