鄒昱蕾 張韶湘 楊皓然 余曉玲

昆明市中醫(yī)醫(yī)院制劑科，云南 昆明 650011

清炎合劑是在我院老中醫(yī)行醫(yī)多年的驗(yàn)方基礎(chǔ)上研制的醫(yī)院制劑，由金銀花、連翹、防風(fēng)、荊芥、白芷、蔓荊子、黃芩、天花粉、生地黃、赤芍、當(dāng)歸、香附、桑白皮、桔梗、高良姜、陳皮、炒建曲、甘草等18味藥組成，以金銀花、連翹清熱、解毒為君藥；荊芥、防風(fēng)、白芷、蔓荊子、黃芩祛風(fēng)清熱，天花粉、生地黃增強(qiáng)清熱之功共為臣藥；當(dāng)歸、赤芍、香附活血散瘀，桑白皮、桔梗合甘草瀉熱利咽。苦寒清熱藥中反佐高良姜以免藥物格拒，且配香附行氣溫中以制苦寒太過，陳皮、炒建曲理氣行滯和胃，均為佐藥；甘草調(diào)和諸藥為使，全方共奏清熱解毒、活血祛風(fēng)之功效，主治風(fēng)熱毒邪上擾，脈絡(luò)阻滯所致喉痹、乳娥、鼻塞、目赤腫痛，用于咽炎等五官科慢性炎癥。臨床使用多年，療效較好。為加強(qiáng)對(duì)制劑質(zhì)量控制，綜合分析處方中各藥味的性質(zhì)，從該方君藥中選取連翹、臣藥中選取黃芩、佐藥中選取赤芍，對(duì)其主要有效成分進(jìn)行薄層色譜法研究，制定該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為臨床安全用藥提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。

1 藥品與試藥

清炎合劑(批號(hào)：20180916、20181228、20190328昆明市中醫(yī)醫(yī)院)；連翹苷對(duì)照品(批號(hào)110821-201816)、黃芩苷對(duì)照品(批號(hào)110715-201821)、芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)110736-201943)，均來源于中國(guó)食品藥品檢定研究院；1%香草醛硫酸溶液、 2%三氯化鐵乙醇溶液、乙酸乙酯、丁酮、甲酸、乙醚、正丁醇、正己烷、1%氫氧化鈉、濃氨液、三氯甲烷、甲醇、氯仿、水；試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 連翹的鑒別 取清炎合劑50 mL，水浴濃縮至約25 mL，放冷，乙醚振搖提取2次，每次25 mL，棄去乙醚提取液，水層用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次25 mL ，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水30 mL洗滌1次，棄去水洗液，取正丁醇提取液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，加于中性氧化鋁柱(100～200目，2.5 g，內(nèi)徑1～1.5 cm，干法裝柱)上，用甲醇30 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液[1]。另取處方中除去連翹的其他藥味, 按處方比例同法制成缺連翹的陰性對(duì)照樣品。取陰性對(duì)照樣品50 mL, 同供試品溶液的制法, 制成陰性對(duì)照溶液。取連翹苷對(duì)照品，加甲醇制成2 mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典通則0502)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5～10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(7∶1)為展開劑展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)[2]。陰性對(duì)照在相應(yīng)位置無斑點(diǎn), 表明陰性對(duì)照無干擾。如圖1所示。

2.2 黃芩的鑒別 取清炎合劑30 mL，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?0 mL使溶解，靜置，取上清液作為供試品溶液。

另取處方中除去黃芩的其他藥味, 按處方比例同法制成缺黃芩的陰性對(duì)照樣品。取陰性對(duì)照樣品30 mL, 同供試品溶液的制法, 制成陰性對(duì)照溶液。

取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對(duì)照品溶液。

照薄層色譜法(中國(guó)藥典通則0502)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各5～10 μL、對(duì)照品溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一4%醋酸鈉溶液制備0.4%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液。在供試品的薄層色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)[3-4]。陰性對(duì)照在相應(yīng)位置無斑點(diǎn), 表明陰性對(duì)照無干擾。如圖2所示。

2.3 赤芍的鑒別 取2.1項(xiàng)下的供試品溶液作為供試品溶液。另取處方中除去赤芍的其他藥味, 按處方比例同法制成缺赤芍的陰性對(duì)照樣品。取陰性對(duì)照樣品50 mL, 同供試品溶液的制法, 制成陰性對(duì)照溶液。取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成2 mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典通則0502)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各3～5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)[5]。陰性對(duì)照在相應(yīng)位置無斑點(diǎn), 表明陰性對(duì)照無干擾。如圖3所示。

圖1 連翹TLC色譜 圖2 黃芩TLC色譜 圖3 赤芍TLC色譜

3 討論

清炎合劑經(jīng)臨床驗(yàn)證療效確切、效果顯著。有研究表明，清炎合劑除直接具有抑菌作用外還有增強(qiáng)機(jī)體免疫力而達(dá)到抑菌的作用[6]。連翹清熱解毒，為方中君藥，具有抗菌、抗病毒等多種藥理活性[8]，其中木脂素類有效活性成分連翹苷含量較高；黃芩祛風(fēng)清熱，為清炎合劑中的臣藥之一,其黃芩苷含量較高, 有大量文獻(xiàn)闡述黃芩中黃芩苷為主要藥效成分, 且被證實(shí)存在廣泛的藥理活性, 具有解熱抗炎、抗微生物等多種藥理作用[9-10]；赤芍活血散瘀，主要含有芍藥苷, 羥基芍藥苷等豐富的苷類化合物, 故選定其主要活性成分芍藥苷作為定性指標(biāo)。綜上，采用薄層色譜法對(duì)制劑中連翹、黃芩、及赤芍進(jìn)行定性鑒別, 對(duì)于清炎合劑的質(zhì)量控制具有重要意義。

清炎合劑處方藥味較多，在檢測(cè)中相互之間有干擾，研究中發(fā)現(xiàn)，黃芩的鑒別如采用《中國(guó)藥典》方法[1]，樣品以乙酸乙酯-甲醇(3∶1)提取，無法得到清晰斑點(diǎn)，原因可能為乙酸乙酯-甲醇(3∶1)溶劑系統(tǒng)極性較弱，增加了脂溶性成分的溶出和分離難度；本研究采用甲醇為溶劑進(jìn)行提取，因甲醇極性較大，對(duì)弱極性成分提取效率較低，干擾較少，故可得到清晰斑點(diǎn)。連翹及赤芍的鑒別，供試品色譜中在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯一個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)，而按處方比例同法制成的陰性對(duì)照樣品，無相應(yīng)斑點(diǎn)，即陰性無干擾，說明此鑒別有一定的專屬性。

本研究對(duì)制劑中連翹、黃芩、赤芍進(jìn)行TLC 定性鑒別，建立的質(zhì)量控制分析方法,并經(jīng)過對(duì)多批產(chǎn)品的驗(yàn)證,結(jié)果表明，該質(zhì)量控制所采用的方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于清炎合劑質(zhì)量控制中的定性鑒別方法。