王汝山

【摘 要】 目的：建立HPLC法測定補腎養(yǎng)骨口服液中淫羊藿苷含量的方法。方法：采用Agilent ZORBAX SB-C18 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;以乙腈-水（26∶ 74）為流動相;柱溫：25 ℃;檢測波長：270 nm;流速：1.0 mL/min。結(jié)果：淫羊藿苷對照品在0.0165～0.0825 mg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.9997;平均加樣回收率為99.57%（RSD=2.99%）。結(jié)論：所建立的方法準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性良好，可用于補腎養(yǎng)骨口服液的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 補腎養(yǎng)骨口服液;淫羊藿苷;高效液相色譜法

【中圖分類號】R284.2 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ? ?【文章編號】1007-8517（2020）13-0036-03

Abstract：Objective To establish a HPLC method for the determination of icariin in Bushen Yanggu oral liquid. Methods using Agilent Zorbax sb-c18 column （250mm×4.6mm， 5μm）; acetonitrile water （26∶ 74） as mobile phase; column temperature： 25 ℃; detection wavelength： 270nm; flow rate： 1.0mL/min. Results the linear relationship between icariin and peak area was good in the concentration range of 0.0165～0.0825mg/mL， r= 0.9997; the average recovery rate was 99.57%（RSD=2.99%）. Conclusion the established method is accurate， reliable and reproducible， and can be used for the quality control of Bushen Yanggu oral liquid.

Keywords：Bushen Yanggu Oral Liquid;Icariin; HPLC

補腎養(yǎng)骨口服液為本院的院內(nèi)制劑，由淫羊藿、續(xù)斷、牛大力等四味中藥飲片制成，具有補腎壯陽、強筋健骨功效，用于老年性骨質(zhì)疏松癥以及腎虛體倦、四肢麻木、腰膝酸痛、性欲減退等癥。本制劑原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)偏低，僅有薄層鑒別、pH值、相對密度和微生物限度檢驗項目，缺少能評價制劑質(zhì)量好壞的關(guān)鍵指標(biāo)。為了確保制劑臨床療效，本實驗對補腎養(yǎng)骨口服液的君藥淫羊藿開展含量測定，以淫羊藿苷作為質(zhì)量指標(biāo)成分[1]，建立了淫羊藿苷的高效液相色譜測定方法，結(jié)果表明該方法能準(zhǔn)確檢測補腎養(yǎng)骨口服液中淫羊藿苷含量，達(dá)到可用于本制劑質(zhì)量控制的目的。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀;AB 135-S電子天平（梅特勒-托利多）;AB204-N型天平（梅特勒-托利多）;超純水機(jī)（北京歷元電子儀器）;SB25-12DTD數(shù)控超聲清洗器。

1.2 材料 補腎養(yǎng)骨口服液（醫(yī)院自制，包裝規(guī)格：10 mL×10支/盒，批號：20190801、20190802、20190901、20190902、20191001、20191002）;淫羊藿苷對照品（含量以94.2%計，批號：110737-201516，中國食品藥品檢定研究所）;乙腈和甲醇均為色譜純;水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相：乙腈-水（26∶74）;流速：1.0 mL/min;檢測波長：270 nm;柱溫：25 ℃;進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對照品16.5 mg，置100 mL量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL含淫羊藿苷0.165 mg的對照品貯備溶液。精密量取對照品貯備溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇制成每1 mL含淫羊藿苷0.0495 mg的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取本品6mL，置50mL量瓶中，加50%甲醇振搖5min，放冷，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 取缺淫羊藿的陰性制劑6mL，按“2.2.2”項下方法制備，即得。

2.3 專屬性試驗 按照“2.1”項下色譜條件，分別測定對照品溶液、供試品溶液與缺淫羊藿的陰性樣品溶液，記錄色譜圖，結(jié)果在供試品色譜圖中，在與淫羊藿苷對照品溶液色譜圖相應(yīng)保留時間處有相應(yīng)的淫羊藿苷峰出現(xiàn)，而陰性對照無干擾，表明具有良好專屬性，色譜圖如圖1所示。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品貯備溶液1、2、3、4、5 mL，置10 mL量瓶中，用50%甲醇稀釋制成含淫羊藿苷質(zhì)量濃度分別為0.0165、0.0330、0.0495、0.0660、0.0825 mg/mL的系列對照品溶液，按照“2.1”項下色譜條件，分別進(jìn)樣10 μL，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)（X）進(jìn)行線性回歸，得到線性方程為Y=21905X-0.9030，r=0.9997，表明淫羊藿苷在0.0165 ～0.0825 mg/mL范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣量為10 μL，分別測定并計算，結(jié)果淫羊藿苷峰面積的RSD值為1.25%（n=6），表明本法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別于第0、1、2、4、8h取樣，進(jìn)樣量為10 μL，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，計算出淫羊藿苷峰面積的RSD值為1.45%（n=5），表明在8h內(nèi)供試品溶液具有良好的穩(wěn)定性。

2.7 重復(fù)性試驗 分別取6份同一批號樣品，按“2.2.2”項下制備方法制備6份供試品溶液，分別測定，樣品含量測定的RSD值為0.02%（n=6）。

2.8 加樣回收率試驗 精密量取已知含量為0.445 mg/mL的本品溶液3 mL，共6份，分別精密加入淫羊藿苷對照品貯備溶液7 mL（0.165 mg/mL），搖勻，按供試品溶液制備方法制成供試品溶液，按照“2.1”項下色譜條件分別測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.9 樣品含量測定 取不同批號的本品6批，按“2.2.2”項下制備方法制成供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μl，測定淫羊藿苷含量，6批樣品的平均含量為0.44 mg/mL，見表2?？紤]到生產(chǎn)中原料飲片的產(chǎn)地、采收與加工以及制劑生產(chǎn)工藝條件存在偏差等因素的影響，實際生產(chǎn)不同批次的制劑含量測定結(jié)果存在波動，故取含量均值的80%作為含量測定標(biāo)準(zhǔn)的下限，規(guī)定本品每1 mL含淫羊藿以淫羊藿苷計，不得少于0.35 mg，作為本制劑HPLC法含量測定的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。

3 討論

本實驗

參考文獻(xiàn)[2～4]考察了3種比例的乙腈-水（體積比分別為26∶ 74、27∶ 73、30∶ 70）和2種比例的甲醇-水（體積比分別為63∶ 37、65∶ 35）作為流動相的分離效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用乙腈-水（26∶ 74）時，樣品中的淫羊藿苷能較好與其它組分達(dá)到基線分離，此時色譜峰出峰時間適宜，峰型尖銳對稱。

由于補腎養(yǎng)骨口服液中的淫羊藿苷在貯存過程會存在水解，經(jīng)過對本制劑1年穩(wěn)定性考察結(jié)果發(fā)現(xiàn)，含量測定結(jié)果均符合內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，表明所建立的HPLC法可用于補腎養(yǎng)骨口服液質(zhì)量控制，亦可為補腎養(yǎng)骨口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]高思英.健腎靈顆粒劑中淫羊藿苷的含量測定[J].安徽醫(yī)藥，2004，13（11）：36-37.

[2]熊輝，宋根偉，周本宏，等.HPLC測定二仙增精合劑中的淫羊藿苷的含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報.2011，27（2）：160-161.

[3]張柳，何靜文.仙茸壯陽口服液中的淫羊藿苷的含量測定[J].中國藥業(yè)，2004，13（11）：36-37.

[4]宋利輝，陶正恒，徐琳，等.采用高效液相法測定仙茸蛤蚧口服液淫羊藿苷的含量[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2010，6（5）：27-29.

（收稿日期：2020-03-11 編輯：程鵬飛）