李曉晨，魏 巍，張建逵，李 麗，牛 蕾

（遼寧中醫(yī)藥大學 藥學院，遼寧 大連 116600）

板藍根為十字花科植物菘藍Isatis indigotica Fort.的干燥根，性苦，寒，氣微，歸心、胃經。具有清熱解毒，涼血利咽之功效[1]。傳統(tǒng)認為：板藍根藥材以“粉性大（足）者為佳”[2]。粉性強即為淀粉含量高，但研究表明，其活性成分為（R，S）-告依春、靛藍和靛玉紅[3]等。本實驗研究板藍根淀粉含量與其活性成分含量之間的相關性，為板藍根栽培藥材提供質量控制依據(jù)，并檢驗“粉性大者為佳”的適用性。

1 實驗材料

1.1 儀器與材料

UV-3010紫外可見雙光束掃描分光光度計（日本日立集團）；BP 211D型電子分析天平（德國賽多利斯公司）；1100型高效液相色譜儀（G1314A型VWD檢測器，G1311A型四元泵，AT-130型柱溫箱）（大連中匯達科學儀器有限公司）。

1.2 試劑與試藥

甲醇（色譜純）；甲醇、無水乙醇、高氯酸、乙酸乙酯等均為分析純；蒽酮（上海源葉生物科技有限公司）；濃H2SO4（國藥集團化學試劑有限公司）；可溶性淀粉（Solarbio科技有限公司）；（R，S）-告依春對照品、靛藍對照品、靛玉紅對照品均購于上海源葉生物科技有限公司，批號分別為：KA0816CA14、K18M7C1和Z25N8B48799。純度均≥98%。

1.3 樣品

從不同收集地藥店購進10批不同產地的板藍根飲片，均經遼寧中醫(yī)藥大學藥學院張建逵副教授鑒定，為十字花科植物菘藍Isatis indigotica Fort.的干燥根，具體來源見表1。

表1 飲片樣品來源表Tab.1 Source of prepared slices

2 實驗方法[5]

2.1 板藍根淀粉含量測定

2.1.1 試液的配制 2%蒽酮試劑：精密稱取1g蒽酮于50mL乙酸乙酯中溶解，置4℃暗處貯藏；80%乙醇；9.2mol·L-1HClO4[6]。

2.1.2 供試品溶液的制備 精密稱量0.03g樣品粉末于15mL離心管中，加入80%乙醇溶液8mL，80℃水浴提取 3 次（30、10、10min），棄去上清液，殘留物加入 6mL 的 9.2mol·L-1HClO4，快速振蕩搖勻，反應5min，靜置，沉淀后上清液移置100mL容量瓶中，重復3次，蒸餾水定容，搖勻，即得。

2.1.3 樣品測定 精密量取1mL供試品溶液于15mL離心管中，蒸餾水補足至2mL，并加入2%蒽酮試劑0.5mL，緩慢加入5mL 98%的濃H2SO4，快速搖勻，于沸水中顯色1min，快速取出置于冰水浴中冷卻5min，取出后室溫放置5min，另取2mL蒸餾水為空白對照，同法處理，于630nm處測定吸光度值。

2.1.4 標準曲線的繪制 精密稱取0.05g淀粉于小燒杯中，加入 18mL 9.2mol·L-1HClO4，溶解后轉移到100mL容量瓶中，加蒸餾水置刻度。分別量取該溶液0、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5mL，照 2.1.3 項下方法測定吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程為Y=9366.7X+0.0021，r=0.9997。結果表明，淀粉含量在0～0.375mg·mL-1內具良好的線性關系。

2.1.5 方法學考察

（1）經方法學考察，重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、重復性均符合試驗要求。

（2）加樣回收率實驗 精密稱取S2樣品粉末5份，每份 10mg（淀粉含量為 35.18%），按“2.1.2”項下方法制備成供試品溶液，精密吸取1mL供試品溶液于15mL離心管中，并加入0.4mL淀粉標準品溶液，蒸餾水補足至2mL，將所得淀粉標準品溶液及供試品溶液混合后顯色并測定其吸光度，結果見表2。

表2 加樣回收率測定結果Tab.2 Results of additive recovery

測得板藍根淀粉的平均回收率為101.12%，RSD值為2.80%。

2.2 （R,S）-告依春、靛藍、靛玉紅含量測定

2.2.1 色譜條件采用Waters symmetry-C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，以 A- 甲醇，B- 水為流動相，梯度洗脫程序為:0～15min，90%～85%B；15～20min，85%～78%B；20～30min，78%～20%B；30min～40min，20%B；流速:1mL·min-1；檢測波長采用切換波長，0～20min，254nm；20～40min，285nm；柱溫，30℃；進樣量，10μL。在此色譜條件下（R，S）-告依春，靛藍，靛玉紅分離度均大于1.5，其拖尾因子在0.95～1.05，分離度良好，在該色譜條件下，對照品溶液和供試品溶液色譜圖見圖1。

圖1 對照品溶液（A）和供試品溶液（B）的色譜圖Fig.1 Reference substance solution（A）and（B）the chromatogram of test sample solution

2.2.2 對照品溶液的制備 ?。≧，S）-告依春、靛藍、靛玉紅對照品適量，精密稱定，同置于10mL的棕色容量瓶，用甲醇定容至刻度，搖勻，超聲0.5h，0.45μm微孔濾膜濾過，制成每1mL含（R，S）-告依春，靛藍，靛玉紅各 0.90，0.85，0.40mg 的混合溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱定各樣品2g，加200mL 75%的乙醇，回流提取2h，過濾，濃縮并用甲醇定容至10mL容量瓶中，作為供試品溶液備用。

2.2.4 線性關系考察 精密吸?。≧，S）-告依春、靛藍、靛玉紅的混合對照液 2，4，6，8，10，12μL，進樣分析。將各對照品的質量作為橫坐標，峰面積作為縱坐標，按“2.2.4”項下方法進行測定繪制標準曲線，回歸方程，見表3。

表3 3種成分線性關系Tab.3 Linear relationship of the three components

3 實驗結果

對上表中淀粉含量及（R，S）-告依春含量進行相關性分析，淀粉含量與（R，S）-告依春含量的回歸方程為:Y=0.0013X-0.0076，r=0.1122（P＞0.05 為差異沒有統(tǒng)計學意義），淀粉含量與靛藍含量的回歸方程為:Y=-0.9511X+38.742，r=0.3422（P＞0.05 為差異沒有統(tǒng)計學意義），淀粉含量與靛玉紅含量得到回歸方程為:Y=8×10-5X-0.0014，r=0.3547（P＞0.05 為差異沒有統(tǒng)計學意義）。因此，板藍根淀粉含量與其主要藥用成分之間并無明顯相關性。

表4 板藍根淀粉及（R，S）-告依春、靛藍、靛玉紅含量測定結果Tab.4 Determine the contents of（R，S）-epigoitrine，indigo and indirubin

4 討論與結論

按照2015版《中國藥典》的規(guī)定[1]，板藍根中（R，S）-告依春含量不得少于0.02%，照此標準，上述10批藥材中僅有4批合格，合格率僅為40%，因此，相關部門對該藥材的質量應加強監(jiān)管。

相關性分析結果表明，板藍根淀粉含量與主要活性成分無相關性?！胺坌源螅ㄗ悖┱邽榧选边@一經驗并不適用。筆者認為，古代板藍根藥材來源多為野生品，而目前藥用的板藍根幾乎全部為栽培品，通過施肥促進初生代謝產物淀粉含量的增加，而未必能促進活性成分含量的提高，因此，才會出現(xiàn)“粉性大（足）者為佳”這一經驗不適用的情況。

本實驗結果提示，栽培中藥過程中要注意到生長環(huán)境對藥材質量的影響?；钚猿煞侄酁榇紊x產物，環(huán)境的脅迫作用可能是促進其形成的主要原因。因此應該對栽培的板藍根予以適當?shù)沫h(huán)境脅迫，來提高活性成分含量。并抑制淀粉生成量或增大其消耗量，來提高活性成分含量。該藥材的栽培技術還需要更加深入的研究。

本實驗探討了板藍根藥材淀粉含量與其活性成分含量之間的相關性，本研究可為板藍根藥材的質量評價以及板藍根栽培品的質量控制提供參考。