李偉，張小英，葉嘉宜，陳熔，李一峰，陳運(yùn)嬌，曹庸

(華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品學(xué)院，廣東省功能食品活性物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省天然活性物工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州， 510642)

機(jī)體在衰老的過(guò)程中產(chǎn)生自由基，過(guò)度的自由基會(huì)影響體內(nèi)氧化平衡，造成DNA損傷等，影響細(xì)胞的正常功能[1]?，F(xiàn)代研究指出自由基與多種疾病有關(guān)，如心血管疾病、炎癥、衰老等[2]。生物體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)通常能有效清除體內(nèi)過(guò)剩的自由基，主要包括抗氧化物酶和非酶促系統(tǒng)。其中，酶促系統(tǒng)包括超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)及過(guò)氧化氫酶(catalase, CAT)等，非酶系統(tǒng)包括還原型谷胱甘肽等物質(zhì)[3]。近年來(lái)，大量報(bào)道指出植物提取物能有效清除體內(nèi)外自由基、提高抗氧化酶酶活等作用，其中多酚類物質(zhì)被認(rèn)為是植物中重要的抗氧化物質(zhì)，具有巨大的研究及應(yīng)用前景。

余甘子，屬于大戟科葉下珠屬植物，是一種傳統(tǒng)可食用水果；現(xiàn)廣泛分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)，我國(guó)境內(nèi)主要分布于廣東、廣西、云南、四川等地[4-5]。藥理研究指出余甘子中富含多酚類、多糖類、有機(jī)酸及維生素等活性物質(zhì)，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤及抗衰老等多種生理活性[6-7]。常用作治療多種疾病如咳嗽、喉嚨炎癥及消化不良[8]。目前，大多數(shù)報(bào)道關(guān)注余甘子單一溶劑提取物或單一成分的功效，而余甘子不同溶劑提取物抗氧化性能研究較少。本研究旨在評(píng)價(jià)余甘子不同溶劑提取物抗氧化活性及對(duì)H2O2誘導(dǎo)氧化損傷巨噬細(xì)胞的保護(hù)作用，為余甘子功能食品開(kāi)發(fā)提供研究依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

余甘子，無(wú)限極(中國(guó))有限公司；RAW264.7巨噬細(xì)胞，中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)昆明細(xì)胞庫(kù)。

DMEM高糖培養(yǎng)基，美國(guó)Hyclone公司；胎牛血清、噻唑藍(lán)(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)、雙抗(青霉素/鏈霉素)美國(guó)Gibico公司；超氧化物歧化酶、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)，南京建成生物工程研究所；其余試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

MK-3酶標(biāo)儀，Thermo Labsystems公司；CKX41倒置顯微鏡，日本Olympus公司；AL104電子天平，梅特勒-托利多；FD1型冷凍干燥機(jī)，北京博醫(yī)康技術(shù)公司；LC-15C高效液相色譜儀，日本島津公司；SH-D真空泵，河南予華有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 余甘子不同溶劑提取物的制備

稱取余甘子適量，以水、70%乙醇(體積分?jǐn)?shù))、正丁醇及乙酸乙酯分別進(jìn)行提取實(shí)驗(yàn)。第1次提取料液比1∶10(g∶mL)，提取時(shí)間2 h；第2次提取料液比1∶5(g∶mL)，提取時(shí)間1 h。合并2次提取液，50 ℃真空濃縮后再冷凍干燥，制備余甘子不同溶劑提取物。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算提取率，計(jì)算如公式(1)所示：

(1)

式中：m1為余甘子原料質(zhì)量；m0為提取物干粉質(zhì)量。

1.3.2 余甘子不同溶劑提取物體外抗氧化活性評(píng)價(jià)

1.3.2.1 還原能力

參考陳秋娟等[9]方法，以鐵氰化鉀法測(cè)定余甘子不同溶劑提取物還原能力。取不同濃度樣品溶液(0.16～2.56 mg/mL，1 mL)，加入0.2 mol/L 磷酸鈉溶液(2.5 mL)和1%鐵氰化鉀(2.5 mL)，50 ℃恒溫水浴鍋中暗處反應(yīng)20 min，最后加入10%三氯乙酸(2.5 mL)?；旌弦涸? 000 r/min下離心10 min，將上清液(2.5 mL)、雙蒸水(2.5 mL)及0.1%三氯化鐵(0.5 mL)振蕩混勻，靜置10 min，700 nm下測(cè)定吸光值，吸光值越大表明還原能力越強(qiáng)。以蒸餾水代替樣品做空白對(duì)照，抗壞血酸作為陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)樣品3平行。

1.3.2.2 清除超氧陰離子自由基能力

(2)

1.3.2.3 總抗氧化能力

參考HSU等[11]方法，采用鉬酸銨法測(cè)定余甘子不同溶劑提取物總抗氧化能力。鉬酸銨反應(yīng)體系：0.988 g鉬酸銨、0.919 g Na3PO4及6.516 g H2SO4溶于200 mL溶液中，待用。取不同質(zhì)量濃度樣品溶液(0.16～2.56 mg/mL，0.1 mL)，加入1 mL鉬酸銨反應(yīng)體系，95 ℃水浴90 min，695 nm處測(cè)定吸光值，吸光值越大表明還原能力越強(qiáng)。以抗壞血酸作為陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)樣品3平行。

1.3.2.4 清除羥自由基能力

參考楊冰鑫等[12]和GIESE等[10]方法反應(yīng)體系包括0.5 mL 1.5 mmoL/L FeSO4、0.35 mL 6 mmoL/L H2O2、0.15 mL 20 mmoL/L水楊酸鈉及0.5 mL不同濃度桉葉多酚(0.16～2.56 mg/mL)，37 ℃孵育1 h后562 nm測(cè)定吸光值A(chǔ)1；以不加樣品，用去離子水代替樣品在562 nm處測(cè)得的吸光值為A0；以去離子水代替6 mmoL/L的H2O2在562 nm 處測(cè)得的吸光值為A2。以抗壞血酸作為陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)樣品3平行。羥自由基清除率的計(jì)算如公式(3)所示：

(3)

1.3.3 余甘子不同溶劑提取物對(duì)H2O2誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用

1.3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)

本次試驗(yàn)采用細(xì)胞株為小鼠腹腔單核巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞系，細(xì)胞培養(yǎng)基為DMEM完全培養(yǎng)基(10%胎牛血清，1%雙抗)，培養(yǎng)條件為37 ℃的恒溫培養(yǎng)箱(5% CO2)。細(xì)胞每1～2 d換液，所有的操作都在無(wú)菌條件下進(jìn)行。

1.3.3.2 余甘子不同溶劑提取物細(xì)胞毒性試驗(yàn)

將RAW 264.7細(xì)胞按5.0×104個(gè)/mL接種于96孔板，每孔200 μL，置于37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)24 h。棄去上清液，加入不同濃度樣品溶液處理細(xì)胞；對(duì)照組細(xì)胞加入完全培養(yǎng)基。培養(yǎng)24 h后，棄去上清液并以PBS清洗細(xì)胞2次，每孔加入100 μL 5 mg/mL MTT，培養(yǎng)箱中孵育4 h。棄去上清液后再加入150 μL 二甲基亞砜，振蕩溶解10 min。450 nm下測(cè)定吸光值，細(xì)胞活性計(jì)算如公式(4)所示：

(4)

1.3.3.3 H2O2誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞氧化損傷模型

參照1.3.3.2方法，將加入不同濃度樣品溶液換成不同濃度H2O2溶液，計(jì)算細(xì)胞活性。

1.3.3.4 細(xì)胞T-SOD、LDH、GSH、MDA測(cè)定

將RAW 264.7細(xì)胞按2.0×105個(gè)/mL接種于6孔板，每孔2 mL，置于37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)24 h。棄去上清液，試驗(yàn)組加入不同濃度樣品培養(yǎng)液；陽(yáng)性對(duì)照組加入抗壞血酸培養(yǎng)液；空白組和模型組加入完全培養(yǎng)基。孵育24 h，棄去上清液后加入H2O2溶液造模4 h。棄去上清液后，以PBS清洗細(xì)胞2次。將細(xì)胞勻漿后，參照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定細(xì)胞總超氧化物岐化酶(T-superoxide dismutase，T-SOD)活力和谷胱甘肽含量、丙二醛含量。

1.3.4 高效液相色譜法分析余甘子提取物重要成分

將余甘子提取物溶解后，制備成1 mg/mL儲(chǔ)備液，過(guò)0.22 μm濾膜。色譜柱為DIKMA C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫37 ℃；流動(dòng)相選擇0.2%甲酸水溶液-甲醇體系；采用梯度洗脫，洗脫條件為：0～6 min，0～7%甲醇；6～16 min，7%～30%甲醇；16～41 min；30%～80%甲醇；41～50 min；80%～90%甲醇；進(jìn)樣量10 μL；檢測(cè)器波長(zhǎng)270 nm；流速為1 mL/min。

1.4 數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)采用SPSS 18.0進(jìn)行單因素方差分析并用LSD法進(jìn)行多重比較，數(shù)據(jù)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，顯著水平設(shè)置為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 余甘子不同溶劑提取物提取率及總多酚、總黃酮含量

由表1可得，余甘子不同溶劑提取物提取率及總多酚、總黃酮含量差異較大。余甘子70%乙醇提取物和水提取物含量顯著高于正丁醇和乙酸乙酯提取物提取率(P<0.05)。相似研究也表明余甘子水提取物和乙醇提取物含量顯著高于乙酸乙酯和石油醚提取物[13]，這可能與余甘子中極性物質(zhì)(多糖、蛋白質(zhì)類)有關(guān)，導(dǎo)致其在不同溶劑中的溶解性不同。此外，余甘子總多酚、總黃酮含量變化規(guī)律與提取率類似。余甘子水和70%乙醇提取物總多酚、總黃酮含量均顯著高于正丁醇和乙酸乙酯提取物(P<0.05)。根據(jù)相似相溶原理，不同極性抗氧化成分在不同溶劑中溶解度是不同的，初步推斷余甘子中總多酚和總黃酮以極性酚或黃酮類為主[14]。趙玉紅等[15]同樣發(fā)現(xiàn)刺薔薇葉不同溶劑提取物總多酚含量高低順序?yàn)?0%乙醇>水>正丁醇。本次試驗(yàn)結(jié)果表明70%乙醇提取物提取率、總多酚及總黃酮含量均高于其他溶劑提取物(P<0.05)，這也說(shuō)明70%乙醇能有效提取余甘子中多酚和黃酮類物質(zhì)。

表1 余甘子不同溶劑提取物得率及總多酚和總黃酮含量

2.2 余甘子不同溶劑提取物體外抗氧化活性評(píng)價(jià)

2.2.1 還原能力

實(shí)驗(yàn)以鐵氰化鉀法測(cè)定余甘子不同溶劑提取物還原能力，有報(bào)道指出抗氧化能力越強(qiáng)，其還原能力越高，吸光值越大。由圖1可知，余甘子不同溶劑提取物還原能力與樣品濃度呈量效關(guān)系，但同等樣品濃度下低于抗壞血酸。總體來(lái)看，70%乙醇提取物還原能力略高于水提取物(P>0.05)，而正丁醇和乙酸乙酯提取物還原能力顯著低于水和70%乙醇提取物(P<0.05)。這也說(shuō)明水或者70%乙醇提取物中含有更多抗氧化活性物質(zhì)，能有效還原鐵氰化鉀，表現(xiàn)出更強(qiáng)的還原能力[16]。相似研究[17]指出蘋果皮不同溶劑提取物還原能力大小為60%乙醇提取物>蒸餾水提取物>乙酸乙酯提取物?？傊?，余甘子不同溶劑提取物均表現(xiàn)出有效的還原能力，其中70%乙醇提取物還原能力最強(qiáng)。

圖1 余甘子不同溶劑提取物還原能力

2.2.2 清除超氧陰離子自由基能力

圖2 余甘子不同溶劑提取物對(duì)的清除作用

2.2.3 總抗氧化能力

實(shí)驗(yàn)通過(guò)鉬酸酸法測(cè)定余甘子不同溶劑提取物總抗氧化能力，它能將Mo(Ⅳ)還原成Mo(Ⅴ)，酸性條件下形成綠色的磷酸鹽；695 nm下測(cè)得吸光值越大，說(shuō)明總抗氧化能力越高[19]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明不同濃度抗壞血酸組總抗氧化能力均高于等濃度下余甘子不同溶劑提取物組(P<0.05)。但余甘子不同溶劑提取物仍表現(xiàn)出一定總抗氧化能力，并呈現(xiàn)濃度依賴性增大(圖3)。當(dāng)樣品濃度為2.56 mg/mL，70%乙醇提取物總抗氧化能力顯著高于水組、正丁醇組及乙酸乙酯組(P<0.05)?？傊?，4種提取物總抗氧化能力大小排序?yàn)椋?0%乙醇>水>乙酸乙酯>正丁醇。

圖3 余甘子不同溶劑提取物總抗氧化能力

2.2.4 羥自由基清除率

羥自由基(·OH)是生物體內(nèi)活性很高的自由基之一，它能與絕大部分生物大分子發(fā)生反應(yīng)，造成機(jī)體氧化損傷[20]。實(shí)驗(yàn)以水楊酸法測(cè)定余甘子不同溶劑提取物抗氧化活性，隨著樣品濃度增大，·OH清除能力越來(lái)越高(圖4)。4種提取物對(duì)·OH清除率大小排序?yàn)?0%乙醇>水>乙酸乙酯>正丁醇。有報(bào)道對(duì)余甘子乙醇提取物進(jìn)行工藝優(yōu)化和抗氧化活性評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)余甘子45%乙醇提取物對(duì)·OH的清除率優(yōu)于茶多酚。本次試驗(yàn)中，等濃度下70%乙醇提取物表現(xiàn)出最高的·OH清除率，最高清除率為(82.66±4.86)%，這也說(shuō)明余甘子中起到重要抗氧化效果的物質(zhì)可能存在于70%乙醇提取物部分。

圖4 余甘子不同溶劑提取物對(duì)·OH的清除作用

2.3 余甘子不同溶劑提取物對(duì)H2O2誘導(dǎo)氧化損傷的保護(hù)作用

2.3.1 余甘子不同溶劑提取MTT實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)研究不同濃度余甘子不同溶劑提取物(25～800 μg/mL)對(duì)RAW264.7細(xì)胞活性的影響。由圖5可得，在25～100 μg/mL，余甘子不同溶劑提取物細(xì)胞活性均高于90%，對(duì)RAW264.7細(xì)胞無(wú)明顯細(xì)胞毒性。因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)選用25、50及100 μg/mL不同溶劑提取物進(jìn)行研究。

圖5 余甘子不同溶劑提取物對(duì)RAW264.7細(xì)胞活性的影響

2.3.2 H2O2濃度篩選

H2O2是一種強(qiáng)氧化劑，因其操作簡(jiǎn)單、容易控制，常用于體外誘導(dǎo)細(xì)胞氧化損傷[21]。由圖6可得，與對(duì)照組相比，不同濃度H2O2對(duì)RAW264.7細(xì)胞均有一定程度損傷(P<0.05)。當(dāng)H2O2濃度為0.5 mmoL/L，RAW264.7細(xì)胞活性為(50.46±3.88)%；當(dāng)H2O2濃度高于或低于0.5 mmoL/L時(shí)，細(xì)胞過(guò)低或者過(guò)高活性均不能有效建立H2O2誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞氧化損傷模型。因此，實(shí)驗(yàn)選用0.5 mmoL/L H2O2開(kāi)展后續(xù)細(xì)胞氧化損傷實(shí)驗(yàn)。

圖6 H2O2對(duì)RAW264.7細(xì)胞活性的影響

2.3.3 余甘子不同溶劑提取物對(duì)RAW 264.7細(xì)胞中T-SOD活性的影響

T-SOD對(duì)維持機(jī)體氧化平衡起著重要的調(diào)節(jié)作用，它能有效催化超氧陰離子為H2O2和O2，是體內(nèi)重要的抗氧化酶之一[22]。由圖7可得，模型組T-SOD活性[(36.7±6.75) U/mg prot]顯著低于對(duì)照組[(93.00±7.24) U/mg prot](P<0.01)，說(shuō)明H2O2誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞造成強(qiáng)烈的氧化損傷，且余甘子不同溶劑提取物對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用呈現(xiàn)一定的劑量-濃度依賴效應(yīng)和差異性。相比于模型組，水提取物和70%乙醇提取物中高濃度劑量組均能顯著提高細(xì)胞內(nèi)T-SOD活性(P<0.01)，有效延緩H2O2誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的氧化損傷。其中高濃度70%乙醇提取物組T-SOD活性與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)。相似研究[23]發(fā)現(xiàn)中高劑量組(80 μg/mL、100 μg/mL)馬齒莧黃酮能有效提高H2O2誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞中T-SOD活性，低濃度劑量組無(wú)顯著影響(P>0.05)。這提示天然來(lái)源抗氧化物質(zhì)需要達(dá)到一定濃度才能起到更好地延緩氧化損傷作用。此外，乙酸乙酯提取物組在100 μg/mL時(shí)T-SOD活性顯著提高39.37%(P<0.05)，而正丁醇各濃度組對(duì)細(xì)胞T-SOD活性無(wú)顯著影響(P>0.05)。可見(jiàn)余甘子水和70%乙醇提取物能有效提高氧化損傷細(xì)胞中T-SOD活性，正丁醇和乙酸乙酯提取物效果較差。

圖7 余甘子不同溶劑提取物對(duì)H2O2誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞中T-SOD活性的影響

2.3.4 余甘子不同溶劑提取物對(duì)RAW 264.7細(xì)胞中LDH活性的影響

LDH廣泛存在于體內(nèi)，當(dāng)細(xì)胞受損時(shí)LDH會(huì)大量釋放，細(xì)胞內(nèi)LDH分泌水平顯著降低，它能有效反映細(xì)胞受到的氧化損傷程度[24]。由圖8可得，模型組LDH活性[(416.62±37.58) U/mg prot]極顯著低于對(duì)照組61.71%[(159.50±32.96) U/mg prot](P<0.01)，這說(shuō)明細(xì)胞受到氧化損傷后LDH發(fā)生了部分外泄。余甘子不同溶劑提取物處理細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)70%乙醇提取物組低、中、高濃度均能有效提高提高細(xì)胞LDH活性(P<0.05)，而水、正丁醇及乙酸乙酯在中、高劑量組下起到相同保護(hù)作用。此外，余甘子不同溶劑提取物對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用呈現(xiàn)濃度依賴性，能有效預(yù)防或者延緩H2O2導(dǎo)致的細(xì)胞膜受損或者破裂，防止細(xì)胞內(nèi)LDH外漏。

圖8 余甘子不同溶劑提取物對(duì)H2O2誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞中LDH活性的影響

2.3.5 余甘子不同溶劑提取物對(duì)RAW 264.7細(xì)胞中GSH含量的影響

圖9 余甘子不同溶劑提取物對(duì)H2O2誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞中GSH含量的影響

2.3.6 余甘子不同溶劑提取物對(duì)RAW 264.7細(xì)胞中MDA含量的影響

MDA是膜脂氧化重要的產(chǎn)物之一，其含量能夠反映機(jī)體受自由基攻擊水平程度，間接表明細(xì)胞膜系統(tǒng)受損程度[27]。由圖10可得，細(xì)胞受到H2O2損傷后，模型組MDA含量為(64.65±13.38) nmol/mg prot，極顯著高于對(duì)照組[(8.12±2.00) nmol/mg prot](P<0.01)。MDA是機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)氧化的最終產(chǎn)物，代表脂質(zhì)過(guò)氧化的水平[28]。經(jīng)余甘子不同溶劑提取物處理后，細(xì)胞MDA含量呈劑量依賴性降低。與模型組相比，水提取物和70%乙醇提取物能極顯著降低細(xì)胞中MDA含量(P<0.01)；其中，100 μg/mL 乙醇提取物組MDA含量顯著降低71.01%。此外，正丁醇和乙酸乙酯提取物高劑量組MDA含量比模型組分別降低24.79%和28.63%。李沖等[29]指出巫山神茶能降低損傷細(xì)胞中MDA含量，保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)及功能，起到抗氧化作用。本次試驗(yàn)也能說(shuō)明余甘子不同溶劑提取物能降低自由基引起的脂質(zhì)過(guò)氧化程度。綜上，余甘子不同溶劑提取物一定程度上都能延緩H2O2氧化損傷，降低細(xì)胞內(nèi)MDA含量，維持細(xì)胞氧化平衡。其中，70%乙醇提取物不同濃度組降低氧化損傷細(xì)胞中MDA含量最顯著。

圖10 余甘子不同溶劑提取物對(duì)H2O2誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞中MDA含量的影響

2.3.7 余甘子乙醇提取物成分分析

通過(guò)上述化學(xué)和細(xì)胞抗氧化評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)余甘子70%乙醇提取物具有更加顯著體外抗氧化活性，并對(duì)H2O2誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞起到最佳劑量依賴性的保護(hù)作用。通過(guò)高效液相色譜對(duì)比和文獻(xiàn)對(duì)比分析，對(duì)余甘子70%乙醇提取物進(jìn)行成分分析。以標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為參照，檢測(cè)出4種主要多酚類化合物(圖11)：沒(méi)食子酸(11.241 min)、柯里拉京(24.757 min)、鞣花酸(33.952 min)和槲皮素(37.885 min)，含量分別為(18.07±0.21)、(9.90±0.26)、(12.21±1.53)、(1.80±0.04) mg/g。其中沒(méi)食子酸是2015版《中國(guó)藥典》中規(guī)定的余甘子藥材標(biāo)準(zhǔn)評(píng)判物質(zhì)，規(guī)定其含量不低于1.2%。本試驗(yàn)中檢測(cè)出沒(méi)食子酸含量為1.80%左右，說(shuō)明余甘子質(zhì)量已達(dá)藥典標(biāo)準(zhǔn)。另柯里拉京、鞣花酸及槲皮素均是余甘子中重要活性物質(zhì)，文獻(xiàn)指出它們具有優(yōu)異的抗氧化、抗炎、抗腫瘤等生理活性[30-31]。這也間接說(shuō)明70%乙醇提取物富含的這些功能活性成分可能與其優(yōu)異的抗氧化作用有一定關(guān)聯(lián)性，但仍需要進(jìn)一步研究證實(shí)。

圖11 余甘子70%乙醇提取物高效液相色譜圖

3 結(jié)論

綜上所述，本文通過(guò)化學(xué)方法和H2O2誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞模型，初步評(píng)價(jià)余甘子不同溶劑提取物體外抗氧化活性。結(jié)果表明，余甘子不同溶劑提取物能有效清除超氧陰離子自由基和羥自由基，具有良好總還原能力和總抗氧化能力。同時(shí)，它能有效提高細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶活力和乳酸脫氫酶活力，降低丙二醛值及提高谷胱甘肽含量。其中，70%乙醇提取物表現(xiàn)出最佳體外抗氧化活性和對(duì)氧化損傷細(xì)胞的保護(hù)作用，這可能與其富含沒(méi)食子酸、柯里拉京、鞣花酸和槲皮素等抗氧化成分有關(guān)。本文初步探究余甘子不同溶劑提取物的體外抗氧化活性和對(duì)氧化損傷細(xì)胞的保護(hù)作用，但起抗氧化作用的物質(zhì)基礎(chǔ)仍需要進(jìn)一步證實(shí)和研究，抗氧化作用保護(hù)機(jī)制有待深入開(kāi)展?？傮w來(lái)說(shuō)，本文為余甘子開(kāi)發(fā)成功能活性明確的食品或保健食品者提供一定的研究基礎(chǔ)和依據(jù)。