朱萍 沈萍

妊娠高血壓屬于一種常見的妊娠期并發(fā)癥，主要在妊娠20周后出現(xiàn)，嚴(yán)重威脅母嬰健康，會造成孕婦和胎兒死亡[1]。產(chǎn)婦的主要臨床表現(xiàn)為高血壓、水腫，嚴(yán)重的患者會引發(fā)昏迷、抽搐等，會提高母嬰死亡率[2]。目前臨床中關(guān)于妊娠高血壓發(fā)病相關(guān)機(jī)制并不明確，妊娠高血壓做到及早診斷和治療，對患者來說至關(guān)重要。有研究指出妊娠高血壓會導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，從而造成多種器官和系統(tǒng)受到損害，主要是增加血管通透性[3]。VEGF具有促進(jìn)血管發(fā)生以及維持血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的作用，在研究妊娠高血壓嚴(yán)重程度中具有重要意義[4]。ESM-1屬于一種新型的與內(nèi)皮功能紊亂有關(guān)的標(biāo)志物，在研究心血管疾病中關(guān)注越來越廣泛[5]。ACE作為一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶，對血管緊張素Ⅱ合成有促進(jìn)作用，同時(shí)起到擴(kuò)張血管降壓，對平滑肌細(xì)胞生長起到抑制作用[6]。Vaspin是一種脂肪因子，主要是由胎盤分泌。本文旨在研究VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin在妊娠高血壓患者血清及胎盤中的表達(dá)水平，對研究妊娠高血壓的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年8月至2018年8月在我院就診的妊娠高血壓患者30例為妊娠高血壓組，年齡25～35歲，平均年齡(28.6±2.4)歲；孕周34～40周，平均孕周(36.9±4.5)周?；颊呔系?版《婦產(chǎn)科學(xué)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)，輕度妊娠高血壓8例，中度妊娠高血壓10例，重度妊娠高血壓12例。選取30例在我院體檢的正常妊娠產(chǎn)婦為正常組，年齡22～33歲，平均年齡(27.8±3.6)歲；孕周34～41周，平均孕周(37.2±4.3)周。妊娠高血壓組和正常組患者年齡、孕周等一般資料比較中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：所有研究對象符合妊娠期高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：原發(fā)性高血壓患者；糖尿病、心臟病患者；合并腫瘤、感染、自身免疫系統(tǒng)疾病患者。本文研究患者及其家屬均知情，簽署知情通知書。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集:采集分娩產(chǎn)婦的胎盤組織，產(chǎn)婦分娩后，剪取適量的胎盤組織，用0.9%氯化鈉溶液將殘留的血液清洗干凈，后用濾紙將組織上的水分吸干，在凍存管中保存。抽取研究對象分娩前清晨空腹靜脈血3 ml，放置在干凈的EP管中，經(jīng)過冷凝處理后，用離心機(jī)以2 500 r/min的速度分離，取上層血清保存至-70℃的冰箱中，冷藏待測。

1.3.2 免疫組化染色處理:將石蠟切片樣本放在二甲苯中脫蠟處理10 min，將二甲苯更換后再放置10 min，然后梯度酒精水化；加入蛋白酶修復(fù)液，在37℃的恒溫冰箱中孵化30 min，棄抗原修復(fù)液；切片移入濕盒中加入濃度為3%的H2O2，去過氧化物酶封閉液，恒溫冰箱孵育10 min，采用PBS淋液沖洗；加入適量的山羊血清，在室溫環(huán)境下封閉30 min；用濾紙將封閉液吸取，加入一抗，放入濕盒，然后再加入二抗，室溫孵育1 h，采用PBS淋液沖洗；經(jīng)過DAB顯色處理10 min，能夠在顯微鏡下觀察到棕黃色陽性反應(yīng)，則采用PBS淋液沖洗1 min；使用蘇木精復(fù)染3 min，然后用濃度為1%的鹽酸乙醇分化處理，自來水沖洗1 min后，脫水并封片處理。

1.3.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin表達(dá):將采集到的標(biāo)本，取包被液(pH值9.5 0.05 mol/L CB)適當(dāng)稀釋的抗VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin 0.1 ml，添加至聚苯乙烯反應(yīng)板孔中，加蓋后溫度4℃ 24 h，次日使用洗滌劑洗滌3次后，甩干。在各孔中加入稀釋液(pH值7.4的0.02 mol/L Tris-HCl緩沖液)稀釋的待測標(biāo)本0.1 ml，同時(shí)加入陽性和陰性的對照標(biāo)本，在43℃置60 min，將液體移除洗滌3次后，甩干。在各孔中加入VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin的酶標(biāo)抗體0.1 ml，43℃置60 min。液體移去后洗滌3次，甩干。在各個(gè)空中加入底物液(0.1 mol/L Na2HPO4(Na2HPO4·12H2O 35.8 g/L)5.14 ml,0.05 mol/L枸櫞酸(10.5 g/L)4.86 ml混勻,加入鄰苯二胺(OPD)4 mg，置棕色小瓶中,臨用時(shí)加30% H2O24.0 μl,混勻)0.1 ml，置黑20 min，在各孔中加入2 mol/L H2SO40.05 ml，終止反應(yīng)。在酶標(biāo)儀上讀取A405吸收值。分析VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin水平。

1.3.4 陽性表達(dá)結(jié)果判定:每個(gè)樣本在鏡頭下隨機(jī)選擇5個(gè)視野，VEGF蛋白陽性細(xì)胞數(shù)<20%顯示為陰性，SASH1蛋白陽性細(xì)胞數(shù)≥20%顯示為陽性。ESM-1、ACE、Vaspin在血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿以及細(xì)胞核中顯示棕黃色顆粒為陽性，陽性細(xì)胞數(shù)<5%為陰性，陽性細(xì)胞數(shù)≥5%為陽性。所有病理切片均由2位以上經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師進(jìn)行確診。

2 結(jié)果

2.1 2組血清VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin表達(dá)水平比較 妊娠高血壓組血清中VEGF、ESM-1、ACE和Vaspin表達(dá)水平高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組血清中VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin水平比較

2.2 2組胎盤組織中VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin陽性表達(dá)率比較 妊娠高血壓組胎盤組織中VEGF、ESM-1、ACE和Vaspin陽性表達(dá)率高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2，圖1。

表2 2組胎盤組織中VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin陽性表達(dá)率比較 n=30,例(%)

圖1 VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin在妊娠高血壓和正常孕婦胎盤中的陽性表達(dá)(免疫組化染色×200)；A正常孕婦VEGF表達(dá)；B妊娠高血壓VEGF表達(dá)；C正常孕婦ESM-1表達(dá)；D妊娠高血壓ESM-1表達(dá)；E正常孕婦ACE表達(dá)；F正常孕婦ACE表達(dá)；G正常孕婦Vaspin表達(dá)；H正常孕婦Vaspin表達(dá)

2.3 VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin陽性表達(dá)與妊娠高血壓嚴(yán)重程度的關(guān)系 重度妊娠高血壓患者VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin陽性表達(dá)率高于輕度妊娠高血壓患者和中度妊娠高血壓患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同嚴(yán)重程度患者VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin陽性表達(dá)率比較 例(%)

2.4 VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin陽性表達(dá)與患者高血壓家族史的關(guān)系 有高血壓家族史患者VEGF、ESM-1、ACE、Vaspin陽性表達(dá)率高于無高血壓家族史患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 有無高血壓家族史患者VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin陽性表達(dá)率比較 例(%)

2.5 VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin之間相關(guān)性比較 VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin間進(jìn)行相關(guān)性分析，VEGF與ESM-1間呈正相關(guān)(r=0.373,P=0.043)；VEGF與ACE間呈正相關(guān)(r=0.369,P=0.044)；VEGF與Vaspin之間呈正相關(guān)(r=0.479,P=0.007)；ESM-1與ACE間呈正相關(guān)(r=0.409,P=0.025)；ESM-1與Vaspin間呈正相關(guān)(r=0.481,P=0.004)；ACE與Vaspin間呈正相關(guān)(r=0.448,P=0.013)。見圖2。

圖2 VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin間相關(guān)性分析

3 討論

妊娠高血壓綜合征發(fā)病主要受胎盤缺血，血管內(nèi)皮損傷的影響，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷是引起妊娠高血壓的主要原因[7]。有研究指出，全身血管痙攣以及血管內(nèi)皮損傷會導(dǎo)致妊娠高血壓患者的病理生理發(fā)生改變[8]。

本研究結(jié)果顯示，妊娠高血壓患者血清中VEGF水平和胎盤組織中VEGF表達(dá)高于正常組，本文研究結(jié)果與Kemse等[9]研究保持一致。相關(guān)研究指出，在妊娠高血壓綜合征患者血漿中VEGF水平較高，會對血管內(nèi)皮正常生長發(fā)育產(chǎn)生影響，增加縮血管因子產(chǎn)生，減少舒血管因子數(shù)量，患者會出現(xiàn)不同程度的蛋白尿、高血壓等癥狀，并且發(fā)生病理改變[10,11]。高血壓內(nèi)皮功能紊亂主要有內(nèi)皮損傷和氧化應(yīng)激的參與，血管內(nèi)皮可以產(chǎn)生較多的生物活性物質(zhì)，在調(diào)節(jié)血管功能以及結(jié)構(gòu)形成過程中發(fā)揮著重要中作用[12]。ESM-1是一種新型的內(nèi)皮功能紊亂標(biāo)志物，參與細(xì)胞粘附、遷移和增殖過程[13]。本研究結(jié)果顯示，妊娠高血壓患者血清中ESM-1水平高于正常組。說明ESM-1可能參與妊娠高血壓的發(fā)展。與Hentschke等[14]研究結(jié)果保持一致。

妊娠高血壓疾病發(fā)生的可能作用機(jī)制與胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的缺血缺氧有關(guān)，內(nèi)皮細(xì)胞損傷會導(dǎo)致機(jī)體中NO、PG因子水平降低，同時(shí)內(nèi)皮素、血栓素A2水平升高[15]。項(xiàng)舟弘等[16]研究指出腎素-血管緊張素系統(tǒng)在妊娠高血壓疾病中具有重要意義。本研究結(jié)果顯示，妊娠高血壓組血清中ACE水平以及胎盤組織中ACE表達(dá)均高于正常組。說明ACE參與妊娠高血壓發(fā)病。有實(shí)驗(yàn)得出，Vaspin在人的胎盤組織有表達(dá)，并且咋早期妊娠中Vaspin主要在胎盤細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞以及合體滋養(yǎng)細(xì)胞表現(xiàn)，到妊娠晚期，Vaspin只在合體滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)，在早期表達(dá)水平較低，在晚期妊娠中顯示高峰[17]?；翮萚18]也在研究中指出，Vaspin基因及其蛋白在妊娠糖尿病患者胎盤組織中顯示高表達(dá)，本研究結(jié)果與其保持一致。

本研究結(jié)果顯示，VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin表達(dá)與妊娠高血壓患者嚴(yán)重程度有關(guān)，并且重度妊娠高血壓患者VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin表達(dá)表達(dá)較高。賈春文等[19]在研究中指出，妊娠高血壓疾病患者胎盤組織中ACE基因表達(dá)較高，并且重度妊娠高血壓患者ACE基因表達(dá)高于輕度和中度患者。本研究結(jié)果顯示，有高血壓家族史患者VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin表達(dá)相對較高。說明VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin表達(dá)與妊娠高血壓患者有無高血壓家族史有關(guān)。本文通過VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin之間的相關(guān)性研究得出，VEGF、ESM-1、ACE、Vaspin之間呈正相關(guān)，說明VEGF、ESM-1、ACE、Vaspin參與妊娠高血壓發(fā)病過程，隨病情發(fā)展，VEGF、ESM-1、ACE、Vaspin表達(dá)逐漸升高。

綜上所述，VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin在妊娠高血壓患者血清及胎盤中顯示高表達(dá)，與妊娠高血壓的嚴(yán)重程度和有無高血壓家族史有關(guān)，四項(xiàng)因子之間呈正相關(guān)，在妊娠高血壓發(fā)展中具有重要意義。