武守艷，劉文俊，楊麗華，董春光，韓文儒，夏艷婷，韓一超

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山西 太原 030032）

偽狂犬病又稱狂癢病、豬皰疹病毒病、奧其基氏病、阿捷申氏病，是由偽狂犬病病毒引起的犬、貓、豬、牛、羊、兔等多種動(dòng)物共患的一種急性傳染病，病的特征為發(fā)熱、奇癢（豬除外），腦脊髓炎和神經(jīng)炎的癥狀，人也可感染，但一般不發(fā)生死亡。近年來(lái)，隨著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，豬偽狂犬病在養(yǎng)豬業(yè)中流行嚴(yán)重，常常引起大批豬死亡。2019年11月期間，在太原某郊區(qū)一些養(yǎng)犬人士為了減少飼養(yǎng)成本，將豬場(chǎng)死豬肉生喂犬后引起犬發(fā)熱、大量流涎、劇癢，造成犬大批死亡，經(jīng)臨床診斷及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)確診為犬偽狂犬病，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 發(fā)病情況及癥狀

發(fā)病死亡犬均為太原某郊區(qū)家養(yǎng)犬，一部分是看家護(hù)院的大型犬，一部分是個(gè)人犬場(chǎng)飼養(yǎng)犬，品種有德國(guó)牧羊犬、藏獒；年齡從10月齡至10歲不等，均有飼喂豬場(chǎng)病死生豬肉和流產(chǎn)豬死胎的飼養(yǎng)史。

病犬初期表現(xiàn)精神極度萎靡、凝視、舔擦皮膚某一處，隨后出現(xiàn)瘙癢癥狀，口唇部肌肉痙攣伴隨大量流涎，并且用爪撓面部、耳部和肩部，有時(shí)用嘴咬身體，嚴(yán)重時(shí)產(chǎn)生大塊兒爛斑，周圍組織腫脹，并且煩躁不安，對(duì)外界刺激反應(yīng)強(qiáng)烈，有攻擊性，口中流出大量黏性液體，體溫升高，發(fā)生嘔吐，嚴(yán)重者可見(jiàn)頭部、頸部、臀部肌肉間斷性抽搐，呼吸困難，常于24～36 h死亡，偶爾不是急性死亡的，經(jīng)積極治療最終無(wú)效死亡。

2 剖檢變化

外觀可見(jiàn)局部損傷和因動(dòng)物搔抓造成的皮膚破潰，以面部、頭部、肩部多見(jiàn)，皮下呈彌漫性出血，局部見(jiàn)淋巴結(jié)腫脹、充血、肺水腫，特征性病變?yōu)槟X膜明顯充血，腦脊髓液增多，腎、肝、肺有散在的壞死點(diǎn)和出血，呼吸道鼻、氣管、支氣管也有炎癥變化。

3 診斷

3.1 臨床診斷

根據(jù)臨床癥狀和剖檢變化，如發(fā)熱、呼吸困難，流涎、頭頸部瘙癢，身體抽搐，結(jié)合飼喂情況可作出初步診斷。

3.2 偽狂犬病病毒PCR診斷

3.2.1 試劑 核酸提取試劑、瓊脂糖、電泳試劑、豬偽狂犬病病毒PCR檢測(cè)試劑盒（陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、PCR反應(yīng)液、Tak DNA聚合酶、0.2 mL薄壁PCR管）均購(gòu)自哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司。

3.2.2 儀器 分析天平、離心機(jī)、PCR擴(kuò)增儀、電泳儀、電泳槽、紫外凝膠成像儀（或紫外分析儀）、微波爐、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 μL、20 μL、200 μL、1 000 μL）。

3.2.3 耗材 稱量紙、20 mL一次性注射器、500 mL量筒、500 mL錐形瓶、經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水處理的滅菌 1.5 mL 離心管和吸頭（10 μL、200 μL、1 000 μL）、滅菌雙蒸水。

3.2.4 樣品采集 要求檢測(cè)病料新鮮，嚴(yán)禁反復(fù)凍融，取病死犬大腦海馬背側(cè)皮層、中腦、腦橋、扁桃體、淋巴結(jié)等組織；待檢活犬，用注射器取血5 mL，采集病料后盡快送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。

3.2.5 PCR操作方法 每份總體積20 μL，含16 μL PCR反應(yīng)液（用前混勻），2 μL Taq DNA聚合酶，2 μL模板DNA。在PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行以下程序：94℃3min，94 ℃ 30 s，65 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共 35次循環(huán)；再72℃延伸7 min。

3.2.6 電泳 稱4 g瓊脂糖放于500 mL錐形瓶中，加入50倍稀釋的TAE電泳緩沖液200 mL（取4 mL 50倍TAE電泳緩沖液，用雙蒸水稀釋至200 mL），于微波爐中溶解，再加入10 μL染色液混勻。在電泳槽內(nèi)放好梳子，倒入瓊脂糖凝膠，待凝固后將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物10 μL混合2 μL上樣緩沖液，點(diǎn)樣于瓊脂糖凝膠孔中，以110～120 V電壓于50倍稀釋的TAE電泳緩沖液中電泳，紫外燈下觀察結(jié)果。

3.2.7 結(jié)果判定 陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)217 bp擴(kuò)增帶、陰性對(duì)照無(wú)條帶出現(xiàn)時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果成立。被檢樣品出現(xiàn)217 bp擴(kuò)增帶為偽狂犬病陽(yáng)性，否則為陰性。

3.2.8 PCR診斷結(jié)果 由圖1可知，被檢患病犬樣品均在217 bp出現(xiàn)擴(kuò)增條帶，證明患病犬為偽狂犬病感染。

3.3 動(dòng)物試驗(yàn)

取病死犬腦組織加生理鹽水制成10%的懸浮液，每毫升溶液中加青霉素、鏈霉素各1 000 IU，置4℃ 1 h，然后3 000 r/min離心10 min后，取上清液接種健康家兔4只，于后腿多側(cè)皮下注射，每只2 mL，同時(shí)取2只健康家兔在相同部位分別注射生理鹽水2 mL作為對(duì)照，進(jìn)行觀察。接種病死犬腦組織懸浮液的家兔24 h后表現(xiàn)精神沉郁、發(fā)熱、呼吸加快，脈搏加快，開(kāi)始先舔接種部位，之后逐漸變成用力撕咬接種點(diǎn)，角弓反張，在地上打滾，出現(xiàn)出血性皮炎，局部脫毛，皮膚破損出血，表現(xiàn)局部奇癢癥狀，最后家兔出現(xiàn)衰竭，倒臥于一側(cè)，痙攣，呼吸困難而死亡，注射生理鹽水的對(duì)照組未出現(xiàn)任何異?，F(xiàn)象。

4 結(jié)果與討論

4.1 通過(guò)臨床癥狀、剖檢變化、PCR診斷及家兔接種試驗(yàn)可以確診為死亡犬是由于感染偽狂犬病病毒后導(dǎo)致的死亡，此類報(bào)道較少。

4.2 偽狂犬病病毒（PRV）在分類上屬皰疹病毒科，甲型皰疹病毒亞科，核酸型為雙股DNA。PRV僅有1個(gè)血清型，對(duì)外界環(huán)境具有較強(qiáng)的抵抗力。在污染的動(dòng)物舍內(nèi)可存活30～46 d，在肉中可存活35 d以上。PRV對(duì)乙醚、氯仿等脂溶劑及甲醛、紫外線、1%氫氧化鈉等敏感，胰蛋白酶、胃蛋白酶等能滅活此病毒，但不損壞衣殼。病毒粒子表面沒(méi)有能凝集禽類和哺乳類動(dòng)物紅細(xì)胞的血凝素[1]。

4.3 偽狂犬病病毒（PRV）具有廣泛的宿主范圍，易感畜禽包括豬、牛、綿羊、山羊、雞、鴨等，易感野生動(dòng)物包括野豬、狼、狐、獾、刺猬、鼬、蝙蝠、猿、浣熊、鹿等[1]，試驗(yàn)動(dòng)物中家兔、豚鼠、小鼠都易感，其中以家兔最敏感，在已知的自然宿主中，豬最具耐受性。豬和鼠類是自然界中病毒的主要貯存宿主和排毒者；也是引起其他動(dòng)物發(fā)病的疫源動(dòng)物，在偽狂犬病病毒的傳播上起著甚為重要的作用[2]。

4.4 除豬可經(jīng)直接接觸或間接接觸偽狂犬病病毒發(fā)生偽狂犬病的傳染外，其他動(dòng)物主要由于吃食病尸及病畜污染的飼料后經(jīng)消化道感染。此外，本病還可經(jīng)呼吸道黏膜破損處和配種等發(fā)生感染，妊娠母豬感染本病時(shí)可經(jīng)胎盤(pán)垂直傳播侵害胎兒，偽狂犬病病毒可通過(guò)胎盤(pán)傳遞給胎兒，而母體免疫球蛋白卻不能保護(hù)，所以對(duì)胎兒的感染是致命的[2]。據(jù)資料記載，在豬群發(fā)病的同時(shí)，犬、貓等伴侶動(dòng)物往往發(fā)病，多數(shù)病例體溫正常，動(dòng)物行為異常，沉郁，個(gè)別行為狂躁，攻擊人畜。頭、頸、肩部皮膚奇癢，不斷抓撓、啃咬，犬大量流涎，呼吸困難，1～3 d死亡，病死率100%[2]。

4.5 上述病例發(fā)病原因是由于犬主缺乏對(duì)偽狂犬病的認(rèn)知，為了節(jié)省人力財(cái)力，將豬場(chǎng)死于偽狂犬病的豬及流產(chǎn)胎兒未經(jīng)高溫加熱消毒處理，直接生喂犬，造成了犬偽狂犬病的發(fā)生，同時(shí)，也成為本病的傳播者，感染了其他同群飼養(yǎng)犬，造成了當(dāng)?shù)厝畟慰袢〉牧餍泻痛笈劳觥?/p>

4.6 上述病例應(yīng)用多種抗生素及化學(xué)藥物治療均無(wú)效，病犬在出現(xiàn)典型癥狀后，很快死亡，且死亡率高達(dá)100%。

綜上所述，犬偽狂犬病死亡率極高，無(wú)有效治療措施。隨著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，豬偽狂犬病在國(guó)內(nèi)很多地區(qū)流行嚴(yán)重，給犬、貓飼養(yǎng)造成了一定的威脅，疫苗接種是防治偽狂犬病的重要措施，但是，目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上沒(méi)有犬、貓偽狂犬病疫苗，所以，不給犬飼喂病死豬肉、牛肉、流產(chǎn)死亡的胎兒、胎衣等，禁止犬進(jìn)入豬場(chǎng)或接觸病死豬等，是預(yù)防犬感染該病的有效措施。除帶毒豬以外，帶毒鼠類等也是本病的主要傳染源。犬、貓也常因吃病鼠感染，因此，犬、貓飼養(yǎng)廠舍應(yīng)有隔離設(shè)施，防止野鼠進(jìn)入。同時(shí)，犬、貓要分別飼養(yǎng)，在犬舍貓舍設(shè)計(jì)上應(yīng)注意保持一定間隔[1]。

本病對(duì)人的威脅雖然很小，但在歐洲曾有人患病的報(bào)道，并分離到病毒，說(shuō)明偽狂犬病對(duì)人有一定的致病性[1]。因此在病死動(dòng)物的尸體處理過(guò)程中，有關(guān)人員應(yīng)高度重視自身防護(hù)。