首泉 王茜 譚志遠(yuǎn)

宮頸癌是女性常見的婦科腫瘤之一，其發(fā)病機制復(fù)雜，隨著精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的提出，從分子層面研究其發(fā)病機制可為其臨床精準(zhǔn)治療奠定理論基礎(chǔ)[1]。miRNA是一種小分子非編碼RNA，研究發(fā)現(xiàn)，越來越多的miRNA在宮頸癌細(xì)胞中表達(dá)存在異常，可能參與調(diào)控宮頸癌發(fā)生發(fā)展等過程，因此探索miRNA在宮頸癌中的作用機制，對于提高宮頸癌的診斷和治療及改善預(yù)后有重要意義[2]。miRNA-214在宮頸癌患者血漿中表達(dá)減少，過表達(dá)可以抑制宮頸癌細(xì)胞Siha進入S期，并且促進Siha細(xì)胞凋亡[3]；miR-144-3p在宮頸癌組織中低表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)[4]；miR-378、miR-10b也參與了宮頸癌的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移[5]。但miR-98-5p 對宮頸癌增殖、遷移和侵襲的影響及作用機制還尚未見報道。PYGO2蛋白是Wnt信號通路下游一個重要的新功能蛋白，在多種腫瘤中異常高表達(dá)，可激活Wnt 靶基因[6]。研究發(fā)現(xiàn)沉默PYGO2通過抑制H3K4抑制U251細(xì)胞的生長并增加細(xì)胞凋亡[7]。PYGO2調(diào)節(jié)MMTV-Wnt1小鼠中的乳腺腫瘤起始和異質(zhì)性[8]。但PYGO2蛋白在宮頸癌發(fā)生過程中的具體分子機制并不清楚。本實驗通過TargetScan數(shù)據(jù)庫預(yù)測到PYGO2與miR-98-5p存在結(jié)合位點，推測miR-98-5p可能靶向調(diào)控PYGO2，因此，本實驗旨在研究miR-98-5p及PYGO2對宮頸癌增殖、遷移和侵襲的影響及miR-98-5p是否靶向調(diào)控PYGO2影響宮頸癌的增殖、遷移和侵襲。為宮頸癌的早期診斷、精準(zhǔn)靶向治療和預(yù)后提供新靶點和新方向。

材料與方法

一、材料

1.組織標(biāo)本來源：選取2016年1月至2019年1月郴州市第一人民醫(yī)院接收且確診為宮頸癌的患者20例，其中年齡＜44歲6例，≥44歲14例；病理分級：高分化的為8例，中、低分化的為12例；TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期的14例，Ⅲ+Ⅳ期的6例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移7例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例；腫瘤大小：≥5 cm的14例，＜5 cm的6例。所有標(biāo)本均為手術(shù)切除樣本，患者均未接受過放化療，所有患者均簽署知情同意書。其中癌旁組織是取自距離癌組織邊緣2 cm處。

2.細(xì)胞與試劑：宮頸癌細(xì)胞Siha、Hela、Caski和正常宮頸細(xì)胞Ect1/E6E7（中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫）；胎牛血清、RPMI-1640培養(yǎng)基、胰蛋白酶（美國Gibico公司）；LipofectamineTM2000試劑盒（美國Invitrogen公司）；MTT試劑盒、二甲基亞砜（DMSO）、BCA試劑盒（美國Sigma公司）；Trizol試劑、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光定量試劑盒（日本TaKaRa公司）；雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒（北京Solarbio公司）；抗體（上海煊翎生物科技有限公司）；RIPA蛋白裂解液、SDS-PAGE試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）。

二、方法

1.細(xì)胞培養(yǎng)：宮頸癌細(xì)胞Siha、Hela、Caski和正常宮頸細(xì)胞株Ect1/E6E7用含10﹪胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基于37℃、5﹪ CO2飽和濕度條件下培養(yǎng)，2～3d換液1次，待細(xì)胞融和至70﹪時，加入胰蛋白酶進行消化傳代，選取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞進行實驗。

2.細(xì)胞轉(zhuǎn)染與分組：取常規(guī)培養(yǎng)的宮頸癌Siha細(xì)胞用0.25﹪胰蛋白酶消化后分別接種于96孔板及6孔板中，待細(xì)胞生長至80﹪融合，更換為無血清培養(yǎng)基同步化12 h，隨后進行轉(zhuǎn)染。將miR-NC、miR-98-5p、anti-miR-NC、anti-miR-98-5p、si-NC和si-PYGO2分別轉(zhuǎn)染至宮頸癌Siha細(xì)胞中，記為miR-NC組、miR-98-5p組、anti-miR-NC組、anti-miR-98-5p組、si-NC組、si-PYGO2組；將miR-98-5p分別與pcDNA和pcDNA-PYGO2共同轉(zhuǎn)染至宮頸癌Siha細(xì)胞中，記為miR-98-5p+pcDNA組和miR-98-5p+pcDNA-PYGO2組，轉(zhuǎn)染均按照LipofectamineTM2000試劑盒進行操作，干擾序列見表1。

表1 PYGO2 及miR-98-5p 干擾序列

qRT-PCR檢測miR-98-5p和PYGO2 mRNA表達(dá)水平：收集以上各組細(xì)胞，研磨充分后加入Trizol試劑提取總RNA，微量核酸測定儀檢測RNA純度和濃度。使用TaKaRa反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA 反轉(zhuǎn)錄成cDNA，按照TaKaRa熒光定量試劑盒使用說明配制反應(yīng)體系，以U6和GAPDH為內(nèi)參進行PCR擴增，每個樣品重復(fù)3次，循環(huán)條件為95℃ 3 min；95℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 30 s，共40個循環(huán)；60℃延長5 min。相對表達(dá)量采用2-△△Ct法計算，引物序列見表2。

表2 引物序列信息

4.Western blot檢測蛋白表達(dá)：收集以上各組細(xì)胞，加入RIPA裂解液裂解，4℃，12 000×g離心15 min，收集蛋白上清液，BCA試劑盒測定蛋白濃度。將蛋白樣品進行SDS-PAGE 電泳后轉(zhuǎn)至PVDF膜上，5﹪脫脂奶粉封閉液室溫封閉1h。分別加入一抗（1:1 000），4℃孵育過夜，TBST洗膜；加入二抗（1:2 000）室溫孵育2 h，TBST洗滌3次，每次10 min，后在暗室中曝光顯影，再浸入定影，最后洗去殘液晾干，將膠片用Quantity One凝膠分析軟件處理，測定各組蛋白條帶的吸光度，以目的條帶和GAPDH條帶的比值作為蛋白表達(dá)水平，每個蛋白樣品重復(fù)3次。

5.MTT檢測細(xì)胞活性：在以上各組細(xì)胞培養(yǎng)至24、48、72 h時加入20 μL（5 g/L）的MTT溶液，繼續(xù)孵育4 h；棄去多余培養(yǎng)基并加入150 μL DMSO振蕩反應(yīng)10 min，酶標(biāo)儀檢測490 nm處吸光度（A）值。細(xì)胞增殖活力（﹪）=實驗組A值/空白對照組A值×100﹪。

6.Transwell檢測細(xì)胞遷移和侵襲：在各組細(xì)胞，胰酶消化后使用無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，調(diào)整濃度為2×104個/mL。細(xì)胞遷移實驗：取200 μL細(xì)胞懸液接種于Transwell 小室上室中，并置于含完全培養(yǎng)基的下室中，37℃、5﹪CO2條件下培養(yǎng)24 h，取出小室，去除培養(yǎng)基后用棉簽輕輕擦去上層細(xì)胞，PBS洗滌，加入4﹪多聚甲醛固定30 min，0.1﹪結(jié)晶紫染色10 min，顯微鏡觀察并隨機選取5個視野拍照，計算結(jié)晶紫染色細(xì)胞數(shù)即為遷移細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞侵襲實驗：以1:5加入RPMI1640培養(yǎng)液稀釋Matrigel后，鋪于Transwell 小室的上室，室溫下干燥后，按照細(xì)胞遷移實驗步驟操作。最后顯微鏡下觀察結(jié)晶紫染色細(xì)胞數(shù)即為侵襲細(xì)胞數(shù)。

7.熒光素酶報告基因檢測實驗檢測miR-98-5p對PYGO2的靶向調(diào)控：TargetScan數(shù)據(jù)庫顯示PYGO2 3'UTR區(qū)域有miR-98-5p 結(jié)合位點。構(gòu)建野生型和突變型基因靶點PYGO2的3'UTR-熒光素酶表達(dá)載體（WT-PYGO2和MUT-PYGO2），取對數(shù)生長期宮頸癌Siha細(xì)胞接種于24孔板（5×104個/孔），待細(xì)胞生長至80﹪融合時，用LipofectamineTM2000將WT-PYGO2和MUT-PYGO2組細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染miR-NC和miR-98-5p。依據(jù)說明書要求，使用熒光素酶報告基因檢測儀進行雙熒光素酶報告實驗測定。實驗結(jié)果以熒光素酶活性和Renilla活性的比值進行統(tǒng)計學(xué)分析，實驗重復(fù)3次。

三、統(tǒng)計學(xué)分析方法

采用SPSS 20.00 進行統(tǒng)計學(xué)分析。miR-98-5p、PYGO2Cyclin D1、p21、p27、MMP-2、MMP-9和MMP-14表達(dá)水平、OD值、細(xì)胞遷移侵襲數(shù)、細(xì)胞熒光素酶活性等數(shù)據(jù)以表示。癌旁組織和宮頸癌組織中miR-98-5p、PYGO2表達(dá)水平比較采用配對t檢驗；兩組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、miR-98-5p和PYGO2在宮頸癌組織中的表達(dá)

qRT-PCR和Western blot檢測結(jié)果分別顯示，與癌旁組織相比，宮頸癌組織中miR-98-5p表達(dá)水平降低，PYGO2 mRNA和蛋白表達(dá)水平均升高（P均＜0.05）。miR-98-5p和PYGO2的表達(dá)水平與年齡無關(guān)，與病理分級、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤大小有關(guān)（圖1，表3～4）。

二、miR-98-5p和PYGO2在宮頸癌細(xì)胞和正常宮頸細(xì)胞中的表達(dá)

qRT-PCR檢測和Western blot檢測顯示，與正常宮頸細(xì)胞Ect1/E6E7 相比，宮頸癌細(xì)胞Siha、Hela、Caski 中miR-98-5p的表達(dá)水平均降低，PYGO2 mRNA和PYGO2蛋白表達(dá)水平均升高（P＜0.05，表5，圖2）。后續(xù)干預(yù)實驗選擇miR-98-5p表達(dá)量最低的Siha細(xì)胞進行。

圖1 PYGO2蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)

表3 不同臨床特征宮頸癌患者的宮頸癌組織中miR-98-5p、PYGO2基因相對表達(dá)量（n = 20）

表4 miR-98-5p和PYGO2在宮頸癌組織中的表達(dá)（x±s）

表5 miR-98-5p和PYGO2在宮頸癌細(xì)胞和正常宮頸細(xì)胞中的表達(dá)（±s，n = 3）

表5 miR-98-5p和PYGO2在宮頸癌細(xì)胞和正常宮頸細(xì)胞中的表達(dá)（±s，n = 3）

注：與Ect/E6E7細(xì)胞比較，aP ＜0.05；n為實驗重復(fù)次數(shù)

細(xì)胞名稱 miR-98-5p PYGO2 mRNA PYGO2蛋白Ect/E6E7 1.00±0.08 0.98±0.09 0.21±0.03 Siha 0.34±0.04a 2.76±0.23a 0.62±0.06a Hela 0.56±0.05a 2.46±0.24a 0.51±0.05a Caski 0.46±0.04a 2.55±0.21a 0.57±0.06a F值 82.116 48.961 38.292 P值＜0.001＜0.001＜0.001

圖2 PYGO2蛋白在宮頸癌細(xì)胞和正常宮頸細(xì)胞中的表達(dá)

三、miR-98-5p過表達(dá)對宮頸癌Siha細(xì)胞增殖、遷移、侵襲的影響

qRT-PCR、MTT法及Transwell 法檢測顯示，與miR-NC組相比，miR-98-5p組宮頸癌Siha細(xì)胞中miR-98-5p的表達(dá)水平升高，Siha細(xì)胞活性降低，遷移和侵襲數(shù)量均降低（P均＜0.05），而Western blot檢測顯示，與miR-NC組相比，miR-98-5p組宮頸癌Siha細(xì)胞中Cyclin D1蛋白表達(dá)水平降低，p21、p27蛋白表達(dá)水平升高，MMP-2、MMP-9和MMP-14蛋白的表達(dá)水平降低（P＜0.05）。（圖3～4，表6）

四、抑制PYGO2表達(dá)對宮頸癌Siha細(xì)胞增殖和遷移侵襲的影響

MTT法檢測及Transwell 法檢測顯示，與si-NC組相比，si-PYGO2組宮頸癌Siha細(xì)胞活性、Siha遷移和侵襲數(shù)量均降低（P均＜0.05）。Western blot檢測顯示，與si-NC組相比，si-PYGO2組宮頸癌Siha細(xì)胞中PYGO2、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9和MMP-14蛋白的表達(dá)水平降低，p21蛋白的表達(dá)水平升高（P＜0.05）。（圖5，表7）

圖3 miR-98-5p過表達(dá)對宮頸癌Siha細(xì)胞中增殖、遷移侵襲相關(guān)蛋白的表達(dá)的影響

圖4 熒光倒置顯微鏡下觀察miR-98-5p過表達(dá)抑制宮頸癌Siha細(xì)胞遷移侵襲（結(jié)晶紫染色，×200）

圖5 PYGO2和增殖、遷移侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)

五、miR-98-5p靶向調(diào)控PYGO2的表達(dá)

通過TargetScan數(shù)據(jù)庫預(yù)測到PYGO2 與miR-98-5p存在結(jié)合位點（圖6）。熒光素酶報告基因檢測實驗顯示，與miR-NC組比較，miR-98-5p組WT-PYGO2 宮頸癌Siha細(xì)胞的熒光素酶活性降低（P＜0.05），而miR-98-5p組MUT-PYGO2 宮頸癌Siha細(xì)胞的熒光素酶活性差異無統(tǒng)計學(xué)意義（表8）。Western blot檢測結(jié)果顯示，與miR-NC組比較，miR-98-5p組Siha細(xì)胞中PYGO2蛋白的表達(dá)水平降低（0.65±0.06比0.26±0.03，LSD-t= 10.070，P= 0.001）；與anti-miR-NC組比較，anti-miR-98-5p組Siha細(xì)胞中PYGO2蛋白的表達(dá)水平升高（0.62±0.06比0.96±0.08，LSD-t= 5.889，P= 0.04）（圖7）。

圖6 PYGO2的3'UTR 中含有與miR-98-5p 互補的核苷酸序列

表6 miR-98-5p過表達(dá)抑制宮頸癌Siha細(xì)胞中增殖、遷移侵襲能力比較（±s，n = 3）

表6 miR-98-5p過表達(dá)抑制宮頸癌Siha細(xì)胞中增殖、遷移侵襲能力比較（±s，n = 3）

注：n為實驗重復(fù)次數(shù)

分組 miR-98-5p OD值（490 nm）遷移細(xì)胞數(shù)（個）侵襲細(xì)胞數(shù)（個）24 h 48 h 72 h miR-NC組 1.02±0.09 0.37±0.04 0.61±0.05 1.02±0.09 112.46±10.27 92.47±9.56 miR-98-5p組 2.75±0.28 0.34±0.03 0.42±0.04 0.59±0.06 48.35±4.96 39.46±3.52 t 值 10.188 1.039 5.140 6.886 9.736 9.013 P值 0.001 0.357 0.007 0.002 0.001 0.001分組 CyclinD1蛋白 p21蛋白 p27蛋白 MMP-2蛋白 MMP-9蛋白 MMP-14蛋白miR-NC組 0.67±0.06 0.28±0.03 0.26±0.03 0.72±0.07 0.75±0.07 0.67±0.06 miR-98-5p組 0.31±0.03 0.60±0.06 0.57±0.05 0.35±0.04 0.31±0.03 0.27±0.03 t 值 9.295 8.262 9.208 7.949 10.007 10.328 P值 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001＜0.001

表7 抑制PYGO2表達(dá)抑制宮頸癌Siha細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力比較（±s，n = 3）

表7 抑制PYGO2表達(dá)抑制宮頸癌Siha細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力比較（±s，n = 3）

注：n為實驗重復(fù)次數(shù)

分組 PYGO2蛋白 OD值（490 nm）遷移細(xì)胞數(shù)（個）侵襲細(xì)胞數(shù)（個）24 h 48 h 72 h si-NC組 0.63±0.06 0.38±0.04 0.64±0.06 1.05±0.08 106.48±9.75 87.63±8.11 si-PYGO2組 0.27±0.03 0.37±0.04 0.46±0.05 0.67±0.06 42.16±4.25 35.42±6.20 t 值 9.295 0.306 3.992 6.582 10.474 8.858 P值 0.001 0.775 0.016 0.003＜0.001 0.001分組 CyclinD1蛋白 p2蛋白 MMP-2蛋白 MMP-9蛋白 MMP-14蛋白si-NC組 0.75±0.07 0.41±0.04 0.74±0.07 0.68±0.07 0.62±0.06 si-PYGO2組 0.26±0.03 0.55±0.06 0.39±0.04 0.36±0.03 0.23±0.03 t 值 11.144 3.363 7.519 7.278 10.070 P值＜0.001 0.028 0.002 0.002 0.001

表8 miR-NC組和miR-98-5p組熒光素酶相對活性（±s，n = 3）

注：n為實驗重復(fù)次數(shù)

分組 WT-PYGO2 MUT-PYGO2 miR-NC組 0.99images/BZ_22_665_496_665_497.png±0.08 1.01±0.09 miR-98-5p組 0.38±0.04 1.03±0.08 t 值 20.460 0.498 P值＜0.001 0.625

七、PYGO2過表達(dá)逆轉(zhuǎn)了miR-98-5p過表達(dá)對宮頸癌Siha細(xì)胞增殖和遷移侵襲的影響

MTT法檢測和Transwell法檢測顯示，與miR-NC組相比，miR-98-5p組宮頸癌Siha細(xì)胞活性、遷移和侵襲數(shù)量降低；與miR-98-5p+pcDNA組相比，miR-98-5p+pcDNA-PYGO2組宮頸癌Siha細(xì)胞活性、遷移和侵襲數(shù)量升高（P＜0.05）。Western blot檢測結(jié)果顯示，與miR-NC組相比，miR-98-5p組宮頸癌Siha細(xì)胞中PYGO2、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白的表達(dá)水平降低，p21蛋白的表達(dá)水平升高；與miR-98-5p+pcDNA組相比，miR-98-5p+pcDNA-PYGO2組宮頸癌細(xì)胞Siha 中PYGO2、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白的表達(dá)水平升高，p21蛋白的表達(dá)水平降低（P＜0.05）。（表9、圖8）。

圖8 PYGO2過表達(dá)逆轉(zhuǎn)了miR-98-5p過表達(dá)對宮頸癌Siha細(xì)胞中PYGO2和增殖、遷移侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

討 論

miRNA在宮頸癌的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)等過程中扮演重要角色，可通過調(diào)控靶基因從而促進宮頸癌細(xì)胞凋亡，并能改變腫瘤細(xì)胞對藥物的敏感性，有望作為宮頸癌診斷的標(biāo)記物和治療的靶點[9]。miR-98-5p在肺癌細(xì)胞中低表達(dá)，過表達(dá)miR-98-5p通過降低STAT3水平促進A549細(xì)胞凋亡，并抑制其增殖、侵襲和遷移[10]。miR-98-5p在富含順鉑耐藥的上皮性卵巢癌細(xì)胞中高表達(dá)會促進上皮性卵巢癌細(xì)胞中的順鉑耐藥性[11]。miR-98-5p在胰腺導(dǎo)管腺癌組織中的下調(diào)表達(dá)，miR-98-5p的下調(diào)通過下調(diào)MAP4K4和抑制下游MAPK/ERK信號傳導(dǎo)促進腫瘤發(fā)展[12]。miR-98-5p通過靶向IGF2BP1抑制肝細(xì)胞癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[13]。本實驗結(jié)果表明，miR-98-5p在宮頸癌組織和細(xì)胞中同樣呈低表達(dá)，過表達(dá)miR-98-5p可抑制Siha細(xì)胞增殖、遷移和侵襲；抑制PYGO2、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9和MMP-14蛋白的表達(dá)，促進p21、p27蛋白的表達(dá)。

表9 宮頸癌Siha細(xì)胞增殖和遷移侵襲的比較（±s，n = 3）

表9 宮頸癌Siha細(xì)胞增殖和遷移侵襲的比較（±s，n = 3）

注：與miR-NC組比較，aP ＜0.05；與miR-98-5p+pcDNA組比較，bP ＜0.05；n為實驗重復(fù)次數(shù)

分組 PYGO2蛋白OD值（490 nm）遷移細(xì)胞數(shù)（個）24 h 48 h 72 h mi-NC組 0.66±0.06 0.39±0.04 0.66±0.06 1.07±0.09 109.46±9.86 miR-98-5p組 0.24±0.03a 0.36±0.03 0.44±0.04a 0.59±0.05a 46.25±4.89a miR-98-5p+pcDNA組 0.21±0.02 0.35±0.03 0.40±0.04 0.52±0.05 43.16±4.22 miR-98-5p+pcDNA-PYGO2組 0.54±0.05b 0.38±0.03 0.56±0.05b 0.84±0.07b 87.65±8.12b F值 80.149 0.930 18.022 41.978 61.087 P值＜0.001 0.469 0.001＜0.001＜0.001分組 侵襲細(xì)胞數(shù)（個）CyclinD1蛋白 p21蛋白 MMP-2蛋白 MMP-9蛋白mi-NC組 91.43±9.25 0.69±0.06 0.27±0.03 0.74±0.07 0.71±0.07 miR-98-5p組 36.44±5.07 a 0.32±0.03a 0.62±0.06a 0.34±0.03a 0.32±0.03a miR-98-5p+pcDNA組 31.59±5.11 0.28±0.03 0.65±0.06 0.28±0.02 0.28±0.02 miR-98-5p+pcDNA-PYGO2組 71.25±6.98 b 0.57±0.05b 0.38±0.04b 0.57±0.05b 0.57±0.05b F值 52.768 59.190 42.309 62.195 58.023 P值＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與胚胎發(fā)育、細(xì)胞生長、干細(xì)胞增殖和腫瘤的發(fā)生，與女性多種生殖系統(tǒng)疾病有關(guān)且在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[14]。而PYGO2是Wnt信號通路中新的功能蛋白，PYGO2調(diào)節(jié)β-連環(huán)蛋白誘導(dǎo)的毛囊干細(xì)胞活化和皮膚增生[15]。PYGO2在人腦膠質(zhì)瘤中高表達(dá)，抑制PYGO2表達(dá)Wnt通路相關(guān)蛋白Cyclin D1表達(dá)下降，抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長、增殖[16]。PYGO2在腎癌組織中高表達(dá)[17]，下調(diào)其表達(dá)，細(xì)胞增殖能力和侵襲性明顯降低[18]。miR-873-5p通過干擾膀胱癌細(xì)胞中PYGO2基因的表達(dá)，阻滯細(xì)胞周期進展，抑制細(xì)胞的增殖[19]。PYGO2通過Wnt/β-連環(huán)蛋白途徑激活MDR1表達(dá)并介導(dǎo)乳腺癌中的化學(xué)抗性，抑制其表達(dá)恢復(fù)了抗性細(xì)胞的化學(xué)治療藥物敏感性[20]。本實驗結(jié)果表明，PYGO2在宮頸癌組織和細(xì)胞中同樣是高表達(dá)，抑制PYGO2表達(dá)可抑制Siha細(xì)胞增殖、遷移和侵襲；抑制PYGO2、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9和MMP-14蛋白的表達(dá)，促進p21、p27蛋白的表達(dá)。本研究還發(fā)現(xiàn)miR-98-5p靶向調(diào)控PYGO2的表達(dá)，PYGO2過表達(dá)能逆轉(zhuǎn)miR-98-5p過表達(dá)對宮頸癌Siha細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。

綜上所述，miR-98-5p可抑制宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，其機制可能與PYGO2表達(dá)有關(guān)，將為宮頸癌的預(yù)防和治療提供新靶點。