張建明

( 1.中國長江三峽集團有限公司中華鱘研究所，湖北 宜昌 443100; 2.三峽工程魚類資源保護湖北省重點實驗室，湖北 宜昌 443100 )

齊口裂腹魚(Schizothoraxprenanti)，屬鯉形目、鯉科、裂腹魚亞科、裂腹魚屬、裂腹魚亞屬，主要分布于長江上游、金沙江、岷江、大渡河等水系，底層冷水魚類，喜歡生活于急緩流交界處，有短距離生殖洄游現(xiàn)象，以著生藻類為食，偶爾亦攝食水生昆蟲、螺螄和植物的種子[1]。20世紀70年代，雅安周公河盛產齊口裂腹魚，但90年代以后，由于生存環(huán)境污染、產卵場破壞和過度捕撈，導致該魚的自然種群數(shù)量急劇減少，許多河段已無齊口裂腹魚的蹤影。2000年8月四川省政府將齊口裂腹魚列為重點保護動物，并設立禁漁區(qū)[2]。

饑餓是自然生態(tài)系統(tǒng)中影響魚類正常生長、發(fā)育、存活的重要因子之一[3]。仔魚期階段是魚類生活史中對環(huán)境條件最敏感、最脆弱的時期，而饑餓是引起仔魚死亡最重要的原因之一[4]。仔魚孵化出膜后要經歷內源性營養(yǎng)到外源性營養(yǎng)轉變的關鍵時期，若不能持續(xù)獲得食物建立主動攝食機能，仔魚將不能完成這一轉變，經過耐受時間仔魚將徹底喪失攝食能力，達到饑餓不可逆點而導致死亡[5-6]。

不可逆生長點，是Blaxter等[5]在1963年提出的從生態(tài)學角度測定仔魚饑餓耐受能力的一項重要指標，即初次攝食期仔魚耐受饑餓的時間臨界點。利用饑餓試驗確定仔魚的饑餓耐受力及不可逆生長點，對研究魚類早期生活史及苗種培育具有重要的意義。近年來，相關學者已經對哲羅鮭(Huchotaimen)[7]、黑鯛(Acanthopagrusschlegelii)[6]、大頭鱈(Gadusmacrocephalus)[3]、葉爾羌高原鰍(Triplophysayarkandensis)[8]等魚類開展了饑餓試驗及不可逆生長點的確定。關于齊口裂腹魚相關方面的研究較少，僅董艷珍等[9]研究了延遲投喂對齊口裂腹魚仔魚攝食、存活和生長的影響。筆者側重研究饑餓試驗中齊口裂腹魚仔魚生長、卵黃消耗、初次攝食率、初次攝食強度變化以及部分組織器官發(fā)育變化等內容，在此基礎上初步確定齊口裂腹魚仔魚的不可逆生長點，旨在全面了解齊口裂腹魚的饑餓耐受能力及仔魚早期培育過程中的攝食特點，積累仔魚早期發(fā)育階段生物學基礎數(shù)據(jù)和資料，為齊口裂腹魚仔魚規(guī)?；嘤峁﹨⒖?。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 初孵仔魚來源

試驗于2019年3月在中國長江三峽集團有限公司中華鱘研究所烏東德實驗站進行。選取人工馴養(yǎng)的齊口裂腹魚親魚，經人工催產、人工授精、流水孵化獲得仔魚。

1.1.2 仔魚培育

仔魚孵化后于2.0 m×0.8 m×0.6 m玻纖缸中培育，靜水養(yǎng)殖，微充氣，每日吸底排污，換水1次，換水量為50%，試驗用水為沉淀靜置、充分過濾后的金沙江水，確保水中無仔魚的生物餌料。每日統(tǒng)計養(yǎng)殖水溫。培育期間，水溫遵循自然水溫節(jié)律，水溫17.3～21.5 ℃，溶解氧>6.0 mg/L。

1.1.3 生物餌料

試驗用生物餌料為鹵蟲(Artemiasalina)，由愛家寵物水族用品有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 仔魚饑餓試驗

取當日孵化的同一批次仔魚，暫養(yǎng)于2.0 m×0.8 m×0.6 m玻纖缸中，當養(yǎng)殖到5日齡、即開口前1 d時，將仔魚隨機分為A、B、C 3組，每組500尾仔魚。仔魚6日齡開口投喂，每日向A組試驗魚投喂3次鹵蟲，作為正常生長仔魚。B組和C組作為饑餓組，不投喂任何餌料。

數(shù)據(jù)測量：試驗開始后，每日檢查記錄各試驗組死亡情況，定時隨機分別從A、B試驗組中各取10尾仔魚，測量并記錄其全長、體長、肛前長、體高、眼徑、卵黃囊長和高、鰾長和鰾高等生物學數(shù)據(jù)。

卵黃囊體積和鰾體積按下式計算[3,6]：

V=4/3π(r/2)2R/2

式中，r為卵黃囊(鰾)高，R為卵黃囊(鰾)長。

開鰾率/%=n1/n×100%

式中，n1為鰾充氣仔魚數(shù)，n為樣本仔魚數(shù)。

1.2.2 初次攝食率和初次攝食強度

齊口裂腹魚仔魚開口后每日自C組中隨機取20尾仔魚放入1 L水體的塑料盆中，微充氣并投喂足量的鹵蟲。2 h后將仔魚取出，在解剖鏡下解剖觀察仔魚攝食情況，并計數(shù)每尾仔魚攝食的鹵蟲數(shù)(攝入的鹵蟲卵當鹵蟲計數(shù))，計算仔魚的初次攝食率和攝食強度。

初次攝食率/%=n2/n×100%

初次攝食強度/%=n3/n×100%

式中，n為樣本仔魚數(shù)，n2為攝食仔魚數(shù)，n3為初次攝食仔魚消化道內鹵蟲數(shù)。

1.2.3 不可逆生長點的確定

以齊口裂腹魚仔魚孵化后的日齡表示，開口后每日測定饑餓試驗組仔魚的初次攝食率，當所測得的仔魚初次攝食率低于最高初次攝食率的50%時，即為不可逆生長點的時間[5]。

1.3 數(shù)據(jù)分析與計算

試驗所得數(shù)據(jù)用Excel 2013進行運算及繪圖，用SPSS 19.0進行統(tǒng)計分析，結果以平均值±標準差表示。比較饑餓試驗組和攝食試驗組仔魚的生長指標采用t-檢驗進行分析。

2 結 果

2.1 齊口裂腹魚饑餓組和攝食組仔魚生長的變化

水溫17.3～21.5 ℃，初孵仔魚全長(9.91±0.28) mm，體長(8.63±1.88) mm，體高(2.06±0.13) mm，肛前長(7.08±0.20) mm，眼徑(0.56±0.04) mm。初孵仔魚通體透明，卵黃囊前部呈球形或橢球形，后部呈圓柱形或棒狀，上有血管分布，眼廓明顯，有少量色素沉積，仔魚靜臥水底，偶有掙扎性游動。隨著日齡增加，初孵仔魚靠自身的內源性營養(yǎng)不斷生長，至4日齡時，仔魚全長(12.21±0.20) mm，體長(11.44±0.24) mm，體高(1.81±0.08) mm，肛前長(8.81±0.40) mm，眼徑(0.84±0.07) mm。5日齡時仔魚分組，6日齡攝食組開始投喂。8日齡時，攝食組仔魚全長、體長、體高、肛前長等生長指標均大于饑餓組仔魚，但兩個試驗組仔魚各項生長指標無顯著差異(P>0.05)。14日齡后，隨著饑餓組仔魚饑餓時間的進一步延長，攝食組和饑餓組仔魚全長、體長、體高、肛前長等生長指標變化差異極顯著(P<0.01)。隨著內源性營養(yǎng)的進一步消耗，攝食組仔魚經歷了內源性營養(yǎng)階段、混合營養(yǎng)階段，最終完全過渡到外源性營養(yǎng)階段，仔魚生長速度加快，全長、體高生長顯著，仔魚體質健壯，24日齡即試驗結束時，攝食組仔魚全長(17.11±0.29) mm，體長(15.32±0.28) mm，體高(2.56±0.12) mm，肛前長(11.56±0.24) mm，眼徑(1.30±0.05) mm。而饑餓組仔魚在13日齡后內源性營養(yǎng)基本消耗殆盡，又無外源性營養(yǎng)的及時攝入，全長、體長、肛前長、眼徑等生長幾乎停滯，體高不斷變小，仔魚消瘦形態(tài)明顯，頭大身瘦特點顯著，在20日齡后，多數(shù)仔魚頭部向下、游動緩慢、對外界刺激反應遲鈍，24日齡即試驗結束時，饑餓組仔魚全長(15.37±0.26) mm，體長(14.03±0.17) mm，體高(1.35±0.03) mm，肛前長(10.17±0.13) mm，眼徑(1.18±0.03) mm。饑餓組和攝食組仔魚生長變化數(shù)據(jù)見表1。

表1 齊口裂腹魚饑餓組和攝食組仔魚生長指標變化

2.2 齊口裂腹魚饑餓組和攝食組仔魚卵黃囊吸收及卵黃囊體積變化

齊口裂腹魚仔魚卵黃囊體積隨日齡的增加而不斷減小，初孵仔魚卵黃囊體積均值約為(10.68±1.42) mm3(圖1)。隨著仔魚日齡增加及生長發(fā)育，卵黃囊體積消耗速度很快，尤其在0～6日齡階段，消耗速度最快；6日齡時，饑餓組仔魚卵黃囊體積(3.97±0.75) mm3，占初孵仔魚卵黃囊體積的37.17%，攝食組仔魚卵黃囊體積(3.95±0.81) mm3，占初孵仔魚卵黃囊體積的36.99%。7日齡開始投喂之后，攝食組和饑餓組仔魚卵黃囊消耗及卵黃囊體積變化有所差異，即9日齡和10日齡攝食組仔魚卵黃囊消耗速度快于饑餓組，卵黃囊體積明顯小于饑餓組仔魚。至11日齡時，饑餓組和攝食組仔魚的卵黃囊進一步減小，體積分別為(0.37±0.15) mm3和(0.27±0.08) mm3。13日齡之后，攝食組和饑餓組仔魚卵黃囊基本消耗殆盡，齊口裂腹魚仔魚混合營養(yǎng)期為7 d。

圖1 齊口裂腹魚仔魚卵黃囊吸收與日齡的關系

2.3 齊口裂腹魚饑餓組和攝食組仔魚開鰾率及鰾體積變化

通過鏡檢觀察及綜合統(tǒng)計攝食組和饑餓組試驗仔魚開鰾平均值，隨著齊口裂腹魚仔魚的發(fā)育，仔魚在6日齡開始出現(xiàn)鰾，此時，仔魚卵黃囊尚未吸收完畢，已經做好開口前的準備；6日齡后試驗魚開鰾率迅速增加，至9日齡時，兩個試驗組開鰾率均大于95%(圖2)。

圖2 齊口裂腹魚仔魚開鰾率隨日齡變化

6～8日齡攝食組和饑餓組仔魚鰾體積變化差異較小，鰾體積為(0.02±0.01) mm3～(0.05±0.02) mm3。8日齡之后，攝食組仔魚鰾體積均大于饑餓組仔魚鰾體積，12日齡之后攝食組仔魚鰾體積隨著日齡的增加逐步增大，第24日齡時，攝食組仔魚的鰾體積為(0.84±0.15) mm3；而饑餓組仔魚12日齡之后鰾體積增大緩慢，在18日齡之后，鰾體積開始逐步減小，第24日齡時，其鰾體積僅為(0.24±0.06) mm3(圖3)。

圖3 齊口裂腹魚仔魚鰾體積隨日齡的變化

2.4 齊口裂腹魚仔魚初次攝食率、攝食強度及不可逆生長點確定

水溫17.3～21.5 ℃，仔魚在6日齡開始攝食外源性營養(yǎng)，初次攝食率約為15%，之后初次攝食率逐步提高。第13、14日齡仔魚的初次攝食率達到最高值100%，隨后初次攝食率開始下降，至第17、18日齡時，初次攝食率降至45%，低于最大初次攝食率的50%(圖4)。根據(jù)不可逆生長點的定義，出膜后的17日齡，即饑餓12 d，齊口裂腹魚仔魚到達饑餓不可逆點。

圖4 齊口裂腹魚仔魚的初次攝食率

齊口裂腹魚仔魚在6～15日齡期間，即饑餓10 d內，隨著饑餓時間的增加，仔魚初次攝食強度和攝食能力呈上升趨勢，15日齡后，仔魚的初次攝食強度和攝食能力隨饑餓時間的增加呈迅速下降趨勢(圖5)。

圖5 齊口裂腹魚仔魚初次攝食強度

2.5 齊口裂腹魚饑餓組和攝食組仔魚死亡率變化

水溫17.3～21.5 ℃，16日齡前，即饑餓11 d內，攝食組和饑餓組仔魚死亡率差異較小，兩個試驗組累計死亡率均<10%；17日齡開始，饑餓組仔魚的累計死亡率迅速增加；19日齡時，饑餓組仔魚的累計死亡率達到54.25%，累計死亡數(shù)量>50%，而攝食組仔魚累計死亡率為6%；24日齡時，即饑餓第18 d時，饑餓組仔魚的累計死亡率為100%，而攝食組仔魚累計死亡率為7.5%(圖6)。齊口裂腹魚饑餓組仔魚50%累計死亡率出現(xiàn)日齡為19日齡，在不可逆生長點之后。

圖6 齊口裂腹魚饑餓組和攝食組仔魚死亡率變化

3 討 論

3.1 饑餓對齊口裂腹魚仔魚生長及發(fā)育的影響

早期仔魚易受到餌料的影響，營養(yǎng)的缺乏會直接影響早期仔魚的正常發(fā)育，營養(yǎng)是影響早期仔魚存活的重要因素之一[3,10]。如果早期仔魚未能及時由內源性營養(yǎng)過渡到外源性營養(yǎng)，則其生長和存活將受到很大的影響。本試驗的研究結果表明，饑餓對齊口裂腹魚早期仔魚全長、體長、體高、肛前長、眼徑等生長指標具有極顯著性影響。從攝食組仔魚開始攝食后，饑餓組和攝食組仔魚的生長開始出現(xiàn)分化，尤其在14日齡之后，攝食組和饑餓組仔魚全長、體長、體高、肛前長等生長指標變化差異極顯著(P<0.01)，表現(xiàn)為攝食組仔魚生長速度加快，全長、體高生長顯著，仔魚體質健壯，而饑餓組仔魚在13日齡之后內源性營養(yǎng)基本消耗殆盡，又無外源性營養(yǎng)的及時攝入，其全長、體長、肛前長、眼徑等生長幾乎停滯甚至出現(xiàn)負生長現(xiàn)象，體高不斷變小，仔魚消瘦形態(tài)明顯，頭大身瘦特點顯著，這與大頭鱈[3]、白甲魚(Onychostomasima)[11]、亞東鮭(Salmotrutta)[10]等魚類饑餓試驗結果一致。饑餓不僅對仔魚的生長具有顯著性的影響，對仔魚的組織器官發(fā)育也具有明顯的影響，本試驗著重研究了饑餓對齊口裂腹魚仔魚眼徑、鰾等組織器官發(fā)育的影響，試驗結果顯示，饑餓對眼徑和鰾組織的發(fā)育具有極顯著的影響，饑餓組仔魚的眼徑和鰾組織器官在內源性營養(yǎng)消耗殆盡的情況下發(fā)育處于停滯甚至負生長的狀態(tài)，李艷秋等[3]在研究饑餓對大頭鱈仔魚的影響時亦得出相同的結果。

3.2 齊口裂腹魚仔魚混合營養(yǎng)期

魚類仔魚從內源性營養(yǎng)階段完全轉變?yōu)橥庠葱誀I養(yǎng)階段，一般要經歷混合營養(yǎng)期，魚類的混合營養(yǎng)期長短因種類而異。楊育凱等[12]研究表明，豹紋鰓棘鱸(Plectropomusleopardus)仔魚2.5日齡開口攝食，3日齡內源性營養(yǎng)消耗殆盡，混合營養(yǎng)期僅為0.5 d。萬瑞景等[13]研究表明，日本鳀(Engraulisjaponicus)仔魚混合營養(yǎng)期僅為1 d多。秦志清[14]研究表明，黑莓鱸(Pomoxisnigromacufatus)仔魚在6日齡開口攝食，8日齡卵黃囊消失，混合營養(yǎng)期為2 d。王茂元[15]研究表明，斑鱖(Sinipercascherzeri)仔魚3日齡開始攝食外源性食物，進入混合營養(yǎng)期，7日齡油球吸收完畢，進入外源性營養(yǎng)期，混合營養(yǎng)期為4 d。張永泉等[7]研究表明，哲羅鮭仔魚的混合營養(yǎng)期約為10 d。Hansen等[16]研究表明，大西洋鮭(Salmosalar)仔魚41日齡開口攝食，71日齡卵黃囊吸收完畢，混合營養(yǎng)期長達30 d。本試驗中，齊口裂腹魚仔魚6日齡開口攝食，13日齡卵黃囊基本消耗殆盡，混合營養(yǎng)期約為7 d，齊口裂腹魚仔魚混合營養(yǎng)期長于豹紋鰓棘鱸、日本鳀、黑莓鱸、斑鱖，短于哲羅鮭和大西洋鮭。魚類混合營養(yǎng)期除因魚種而異外，還受到水溫等環(huán)境因子的影響[13,17]。為了減小水溫與卵黃囊吸收速度等因素對仔魚混合營養(yǎng)期種間差異分析的影響，單秀娟等[17]提出了用仔魚開口攝食到卵黃囊吸收完畢的時間與仔魚孵化后到開口攝食的時間之比作為客觀反映不同魚類仔魚混合營養(yǎng)期相對狀況的判別標準，二者比值>1，說明仔魚具有較強的攝食能力，不易遭受饑餓脅迫威脅，二者比值<1，說明仔魚早期攝食能力低下，易遭受饑餓脅迫威脅。本試驗中，齊口裂腹魚仔魚開口攝食到卵黃囊吸收完畢的時間為7 d，仔魚孵化后到開口攝食的時間為6 d，二者比值7/6>1，說明齊口裂腹魚仔魚在卵黃囊吸收殆盡之前具有相對較長的混合營養(yǎng)期提高攝食能力并過渡到外源性營養(yǎng)階段，表明齊口裂腹魚具有較強的攝食能力，屬于不易遭受饑餓脅迫的魚類。本試驗結果顯示，齊口裂腹魚攝食組仔魚在6日齡開口攝食，即建立外源性營養(yǎng)攝取能力之后，其卵黃囊消耗速度快于饑餓組，而饑餓組由于沒有建立外源性營養(yǎng)，其卵黃囊吸收速度放緩，這與大瀧六線魚(Hexagrammosotakii)[18]、黑莓鱸[14]、條石鯛(Oplegnathusfasciatus)[19]、黑鯛[6]的研究結果相同，即仔魚在尚未及時建立外源性營養(yǎng)時，其內源性營養(yǎng)的消耗速度放緩，以便于仔魚在饑餓脅迫條件下延長存活時間、提高存活率，這可能是魚類仔魚面對饑餓脅迫的生理適應機制。本次試驗結果表明，隨著饑餓時間的增加，齊口裂腹魚仔魚初次攝食強度呈上升趨勢，15日齡之后仔魚的初次攝食強度隨饑餓時間的增加呈迅速下降趨勢，這與大頭鱈[3]仔魚的研究結果相同。在齊口裂腹魚育苗養(yǎng)殖生產中，及時觀察仔魚的卵黃囊吸收情況，準確把握開口時間并適時投喂，可使仔魚及時建立外源性營養(yǎng)，避免饑餓脅迫對仔魚的生長、存活造成影響，對提高育苗成活率具有重要作用。

3.3 齊口裂腹魚仔魚初次攝食率與不可逆生長點

不可逆生長點是評價魚類饑餓耐受能力的重要指標之一，不可逆生長點的時間越長表明仔魚的饑餓耐受力越強，不可逆生長點的時間越短表明仔魚的饑餓耐受力越弱[23]。有研究表明，白甲魚仔魚不可逆生長點為13.5日齡[11]，唐魚(Tanichthysalbonubes)仔魚不可逆生長點為8.5日齡[24]，條石鯛仔魚不可逆生長點為2.5～3日齡[19]，赤眼鱒仔魚不可逆生長點為10～11日齡[22]，鰱魚(Hypophthalmichthysmolitrix)、鳙魚(Aristichthysnobilis)、草魚(Ctenopharyngodonidellus)仔魚不可逆生長點均為16.5日齡[25]，中華鱘(Acipensersinensis)仔魚不可逆生長點為24日齡[26]，哲羅鮭仔魚不可逆生長點為39～40日齡[7]；而本試驗齊口裂腹魚仔魚在水溫17.3～21.5 ℃條件下，不可逆生長點為17日齡，與上述魚類相比，齊口裂腹魚仔魚耐饑餓能力強于白甲魚、唐魚、條石鯛、赤眼鱒，弱于中華鱘和哲羅鮭，與鰱魚、鳙魚、草魚相近。有學者采用不可逆生長點有效積溫參數(shù)作為標準評價不同魚類的不可逆生長點，利用該參數(shù)可以較客觀地評價不同魚類的耐饑餓能力。研究表明，多數(shù)魚類仔魚的不可逆生長點有效積溫為100～250 ℃·d[24]，本試驗齊口裂腹魚仔魚不可逆生長點有效積溫為322.4 ℃·d，處于較強的水平，不可逆生長點有效積溫數(shù)據(jù)也表明齊口裂腹魚仔魚具有較強的耐饑餓能力。董艷珍等[9]研究表明，水溫(16.0±0.7) ℃時，齊口裂腹魚仔魚不可逆生長點為19～20日齡，與本試驗結果存在一定的差異，這可能是由試驗水溫、親魚質量、卵質、仔魚活力等差異造成的。

3.4 饑餓對齊口裂腹魚仔魚存活的影響

饑餓是影響魚類仔魚早期成活率的重要因素[10]。本試驗結果表明，饑餓對齊口裂腹魚仔魚的存活具有顯著影響，自17日齡開始，饑餓組仔魚的累計死亡率迅速增加，19日齡，饑餓組仔魚的累計死亡率達到54.25%，累計死亡數(shù)量大于50%，24日齡時，即饑餓第18 d，饑餓組仔魚的累計死亡率為100%，隨著饑餓時間的延長，累計死亡率驟增，與唐魚[24]、白甲魚[11]、黑鯛[6]等魚類的研究結果一致。一般認為仔魚50%死亡率出現(xiàn)在不可逆生長點之后，意味著在不可逆生長點之前饑餓仔魚如能得到適宜的餌料還具有恢復生長的可能[11]，本試驗結果得出，齊口裂腹魚饑餓組仔魚50%累計死亡率出現(xiàn)在19日齡，在不可逆生長點之后，表明齊口裂腹魚仔魚在不可逆生長點之前得到適宜的餌料對仔魚的存活具有重要的意義。

3.5 齊口裂腹魚仔魚最佳投喂時間

在人工育苗中，如果在消化系統(tǒng)未發(fā)育完善的情況下過早投喂，或到達不可逆生長點時延時投喂均會增加仔魚的死亡率，影響苗種培育成活率。齊口裂腹魚仔魚具有較強的耐饑餓能力，本試驗在水溫17.3～21.5 ℃條件下，齊口裂腹魚仔魚雖然6日齡開始攝食，但攝食率較低，直到9日齡時其攝食率才大于50%，同時9日齡之后攝食強度也在穩(wěn)步上升；14～15日齡之后、攝食率和攝食強度均開始下降。因此，綜合研究結果認為，齊口裂腹魚最佳投喂時間為9日齡，最晚開口時間不晚于14～15日齡。

4 結 論

本次試驗從攝食生態(tài)學角度探討了齊口裂腹魚仔魚對饑餓脅迫的耐受能力，試驗結果表明，在水溫17.3～21.5 ℃條件下，齊口裂腹魚仔魚混合營養(yǎng)期為7 d，仔魚不可逆生長點為17日齡，齊口裂腹魚最佳投喂時間為9日齡，最晚開口時間不晚于14～15日齡。