摘要：目的? 探討HER2蛋白的表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系。方法? 選取2019年7月～2020年1月我院手術(shù)切除的201例胃癌標(biāo)本的病理資料，均進(jìn)行免疫組化（IHC）法與原位熒光雜交技術(shù)（FISH）檢測(cè)，并分析不同臨床病理特征HER2過表達(dá)情況。結(jié)果? 共201例標(biāo)本中，IHC 3+ 18例，IHC 2+ 39例，對(duì)IHC 2+標(biāo)本進(jìn)一步行FISH檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)有5例存在突變。IHC 1+ 56例，IHC 0+ 88例，共有23例存在HER2過表達(dá)。近端胃癌中HER2過表達(dá)率高于中遠(yuǎn)端胃癌，腸型胃癌HER2過表達(dá)率高于混合型和彌漫型胃癌，高中分化胃癌HER2過表達(dá)率高于低分化胃癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移中HER2過表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論? HER2蛋白在近端胃癌中的表達(dá)高于中遠(yuǎn)端胃癌，并且HER2蛋白的表達(dá)與Lauren分型和組織學(xué)分化有關(guān)，與淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移無關(guān)。

關(guān)鍵詞：HER2;免疫組化;病理特征

中圖分類號(hào)：R735.2? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.13.016

文章編號(hào)：1006-1959（2020）13-0057-03

Relationship Between Epidermal Growth Factor Receptor 2 Protein Expression and

Clinicopathological Characteristics in Gastric Cancer

GAO Xie

（Department of Pathology，the Third Affiliated Hospital of Suzhou University/Changzhou First People's Hospital，

Changzhou 213000，Jiangsu，China）

Abstract：Objective? To explore the relationship between HER2 protein expression and clinicopathological characteristics of gastric cancer.Methods From July 2019 to January 2020， the pathological data of 201 gastric cancer specimens that were surgically removed in our hospital were detected by immunohistochemistry （IHC） and in situ fluorescence hybridization （FISH）， and different clinicopathological features were analyzed HER2 overexpression.Results? A total of 201 specimens， IHC 3+ 18 cases， IHC 2+ 39 cases， further FISH testing of IHC 2+ specimens， 5 cases were found to have mutations. IHC 1+ 56 cases， IHC 0+ 88 cases， a total of 23 cases had HER2 overexpression. The overexpression rate of HER2 in proximal gastric cancer is higher than that in middle and distal gastric cancer， the overexpression rate of HER2 in intestinal gastric cancer is higher than that of mixed and diffuse gastric cancer， and the overexpression rate of HER2 in high-differentiated gastric cancer is higher than that in low-differentiated gastric cancer，the difference was statistically significant （P<0.05）; there was no statistically significant difference in the HER2 overexpression rate in lymph node metastasis （P>0.05）.Conclusion? The expression of HER2 protein in proximal gastric cancer is higher than that in middle and distal gastric cancer， and the expression of HER2 protein is related to Lauren typing and histological differentiation， and has nothing to do with lymph node metastasis.

Key words：HER2;Immunohistochemistry;Pathological features

胃癌（gastric cancer）是常見的惡性腫瘤之一，隨著醫(yī)療水平的不斷發(fā)展，近年來胃癌的發(fā)病率有降低趨勢(shì)，但其死亡率仍然位于惡性腫瘤第1位[1]。外科手術(shù)是目前胃癌的首要治療手段，但對(duì)于中晚期患者，即使采用手術(shù)輔以放化療治療，其生存率仍然很低。HER2在多種人類腫瘤中均有過表達(dá)，如乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、食管癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌等[2，3]，其中在乳腺癌中的應(yīng)用較廣泛。研究顯示[4]，乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中有20%～30%存在HER2基因擴(kuò)增和蛋白的過表達(dá)，提示預(yù)后較差。因此，提高胃癌患者HER2蛋白的檢測(cè)率對(duì)于改善患者預(yù)后具有重要意義。本研究主要探討HER2蛋白的表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料? 選取2019年7月～2020年1月蘇州大學(xué)附屬第三醫(yī)院/常州市第一人民醫(yī)院手術(shù)切除的胃腺癌患者201例，其中男性139例，女性62例，年齡34～84歲，中位年齡67歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①首次確診胃癌;②有完整臨床資料;③臨床評(píng)估為R0可切除;④未接受放、化療及免疫治療;⑤均行開放手術(shù)或腹腔鏡手術(shù);排除標(biāo)準(zhǔn)：全身廣泛轉(zhuǎn)移、合并其他原發(fā)性腫瘤及復(fù)發(fā)性腫瘤者。

1.2試劑? HER-2/NEU抗體試劑，DAB染色液，購(gòu)自羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司，人類HER-2基因擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒購(gòu)自廈門艾德生物醫(yī)藥科技股份有限公司。

1.3方法

1.3.1 HE染色? 組織均以4%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，HE染色，所有HE切片均在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行病理診斷。

1.3.2免疫組織化學(xué)（IHC）染色? 采用全自動(dòng)IHC系統(tǒng)及其配套試劑，切片在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行診斷，用已被證實(shí)的HER2 IHC3+胃癌組織作為陽(yáng)性對(duì)照，被檢測(cè)切片中癌旁正常胃粘膜組織作為陰性內(nèi)對(duì)照，以PBS緩沖液代替一抗，作為空白對(duì)照。

1.3.3熒光原位雜交（FISH）? 組織切片經(jīng)二甲苯脫蠟、復(fù)水、高溫清洗25 min，用100 mg/L的蛋白酶，在37℃條件下作用5～28 min后，用體積分?jǐn)?shù)1%甲醛溶液固定，作用10 min，再用乙醇梯度脫水，加入混合液10 μl，使之變性。在室溫條件下，用乙醇清洗3 min，待其干燥后，加入10 μl DAPI復(fù)染劑復(fù)染密封，作用20 min后，于熒光顯微鏡下進(jìn)行診斷，用已知陽(yáng)性和陰性胃癌病例作外對(duì)照，同一切片中的正常粘膜上皮、淋巴細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞為內(nèi)對(duì)照。

1.3.4判讀標(biāo)準(zhǔn)? ①免疫組化判讀參照胃癌HER2檢測(cè)指南（2011版）[5]，結(jié)果由2名高年資病理醫(yī)師判讀，其中評(píng)分為0和1+者診斷為陰性，評(píng)分為3+者診斷為陽(yáng)性，評(píng)分為2+者再次進(jìn)行FISH檢測(cè)，見表1;②FISH的判讀：選擇染色均一、細(xì)胞核大小一致、胞核邊界完整、無重疊、綠色CEP17信號(hào)清晰的細(xì)胞，隨機(jī)計(jì)數(shù)至少20個(gè)癌細(xì)胞核中的雙色信號(hào)。HER2/CEP17≥2.0，提示HER2擴(kuò)增陽(yáng)性;HER2/CEP17<2.0，且平均HER2基因拷貝數(shù)≥6.0同樣也提示HER2擴(kuò)增陽(yáng)性;HER2/CEP17<2.0，同時(shí)平均HER2基因拷貝數(shù)<4.0，提示HER2擴(kuò)增陰性;HER2/CEP17<2.0，且4.0≤平均HER2基因拷貝數(shù)<6.0，HER2擴(kuò)增不確定，此種情況下再選擇另1視野的20個(gè)癌細(xì)胞，由另1名醫(yī)師進(jìn)行判讀。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用？字2檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1胃癌HER2免疫組織化學(xué)染色結(jié)果情況? 共201例標(biāo)本中，IHC 3+ 18例，IHC 2+ 39例，對(duì)IHC 2+標(biāo)本進(jìn)一步行FISH檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)有5例存在突變，? IHC 1+ 56例，IHC 0+ 88例，共有23例存在HER2過表達(dá)，見圖1。

2.2不同臨床病理特征HER2過表達(dá)比較? 近端胃癌中HER2過表達(dá)率高于中遠(yuǎn)端胃癌，腸型胃癌HER2過表達(dá)率高于混合型和彌漫型胃癌，高中分化胃癌HER2過表達(dá)率高于低分化胃癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移中HER2過表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。

3討論

HER2基因又稱c-erbB-2基因，是一種原癌基因，定位于染色體17q21，其編碼產(chǎn)物HER2蛋白是一種相對(duì)分子量為185 kD的跨膜酪氨酸激酶受體，屬于表皮生長(zhǎng)因子受體（ErbB）家族成員[6，7]。HER2是ErbB家族中唯一沒有直接配體的受體[8]，但可以與ErbB家族中其他成員或自身形成異源或同源二聚體來發(fā)揮作用，而異源二聚體比同源二聚體具有更高的受體活性和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)能力，可激活胞內(nèi)許多HER2蛋白介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。HER2基因自身磷酸化后將會(huì)激活下游RAF/ERK1/2和PI13K/AKT兩條主要的信號(hào)通路，這在細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)、分化以及腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移過程中起重要作用[9，10]，因此對(duì)其表達(dá)的檢測(cè)將有助于多種腫瘤的預(yù)后判斷。

Van Cutsem E等[11]研究結(jié)果顯示，胃癌HER2陽(yáng)性率約為12%～20%。本研究應(yīng)用IHC及FISH法對(duì)我院201例胃癌標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，采用2011版胃癌HER2檢測(cè)指南中所列評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IHC 3+ 18例，IHC 2+ 39例，對(duì)IHC 2+標(biāo)本進(jìn)一步行FISH檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)有5例存在突變，IHC 1+ 56例，IHC 0+ 88例，共有23例（11.44%）存在HER2過表達(dá)，與Gravalos C等[12]報(bào)道接近。此外，近端胃癌中HER2過表達(dá)率高于中遠(yuǎn)端胃癌，腸型胃癌HER2過表達(dá)率高于混合型和彌漫型胃癌，高中分化胃癌HER2過表達(dá)率高于低分化胃癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移中HER2過表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示HER2蛋白的過表達(dá)可能與特定類型的癌細(xì)胞亞群有關(guān)。在正常情況下HER2處于非激活狀態(tài)，當(dāng)受到體內(nèi)外某些致癌因素刺激后被激活，具有腫瘤轉(zhuǎn)化活性，并最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，包括胃食管結(jié)合部、賁門、胃底在內(nèi)的近端胃癌通常情況下更易受到藥物、食物、機(jī)械刺激等理化因素影響而致?lián)p傷，在損傷后修復(fù)過程中發(fā)生HER2的過表達(dá)，異二聚化等一系列變化，促使新生細(xì)胞過度增殖或無限增殖，并逐漸向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化，推測(cè)其可能是近端胃癌HER2過表達(dá)率高于中遠(yuǎn)端胃癌的原因。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的多途徑多機(jī)制的過程，以往的研究中并未提及腸型胃癌HER2過表達(dá)率高于混合型和彌漫型胃癌的具體機(jī)制，另外高中分化胃癌往往大部分形成腺管狀，低分化胃癌沒有腺管形成，常常是單個(gè)細(xì)胞浸潤(rùn)，或呈條索狀浸潤(rùn)，細(xì)胞間缺乏粘附性，失去組織原有的分化形態(tài)，此次研究也未能深入分析高中分化胃癌HER2過表達(dá)率為何高于低分化胃癌，存在不足，有待于將來在這些方面的進(jìn)一步研究。據(jù)報(bào)道[13]，約20%的進(jìn)展期胃癌有HER2過表達(dá)，HER2蛋白過表達(dá)與患者預(yù)后不良相關(guān)。針對(duì)HER2蛋白的靶向藥物Herceptin可使胃癌在內(nèi)的多種腫瘤患者受益，延長(zhǎng)患者的生存期。因此，正確檢測(cè)和評(píng)價(jià)胃癌HER2蛋白表達(dá)和基因擴(kuò)增對(duì)胃癌的臨床診治具有重要意義。

綜上所述，HER2蛋白在近端胃癌中的表達(dá)高于中遠(yuǎn)端胃癌，并且HER2蛋白的表達(dá)與Lauren分型和組織學(xué)分化有關(guān)，與淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移無關(guān)。

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收稿日期：2020-04-17;修回日期：2020-04-27

編輯/杜帆

作者簡(jiǎn)介：高協(xié)（1990.12-），男，江蘇常州人，本科，住院醫(yī)師，主要從事臨床病理的取材與診斷工作