王素琴，翁責(zé)茗，夏伊莉，戴張嶠，邱彬，章家青

（寧?？h第一醫(yī)院a.體檢中心；b.泌尿外科；c.急診科；d.腎內(nèi)科；e.檢驗科，浙江 寧海315600）

研究表明隨機(jī)尿的蛋白濃度檢測結(jié)果不可靠[1]，目前在臨床上檢測24 h 尿蛋白對腎臟疾病診斷、治療和預(yù)后有著極其重要的意義[2-5]。 由于尿蛋白排出量不恒定，且理化性質(zhì)不穩(wěn)定，因此選擇正確的留取及存儲標(biāo)本顯得尤為重要。 存儲方法一般有冷藏法和化學(xué)防腐劑法，然而在實際存儲24 h 尿標(biāo)本過程中，應(yīng)用起來都不方便，且防腐劑均具有一定的腐蝕性和致癌性。 另外，有人認(rèn)為留取24 h 尿液對于疾病監(jiān)測而言并不便利[6]，所以，經(jīng)濟(jì)、方便、無害的尿液保鮮存儲法對慢性腎臟病的早期診斷和療效觀察顯得尤為重要。本研究通過用麝香草酚化學(xué)防腐法、2～8℃冷藏法、CO2物理保鮮法和常溫保存法保存尿標(biāo)本，尿液采取后放置24 h、48 h、72 h、96 h、192 h、384 h 時檢測尿蛋白濃度， 對同一患者的檢測結(jié)果進(jìn)行比較， 為臨床尋找一種更合適的尿液存儲方法和保存期限提供科學(xué)依據(jù)， 避免門診病人由于多種不便利造成尿標(biāo)本送檢時間的滯后， 從而延誤診斷和治療[5]。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來源 選取2018 年5 月15 日—8 月22日在寧?？h第一醫(yī)院腎內(nèi)科和內(nèi)分泌科住院并行24 h 尿蛋白定量檢測患者的24 h 尿液標(biāo)本共109例，其中男性56 例，女性53 例，年齡（62.16±13.40）歲。

1.2 實驗材料 儀器為日立全自動生化分析儀（008AS）， 試劑是美康生物科技股份有限公司生產(chǎn)的腦脊液與尿總蛋白檢測試劑盒 （產(chǎn)品批號：17080901；180127101），麝香草酚是國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)的 （產(chǎn)品批號：20161110）， 醫(yī)用CO2，便攜式氣體檢測儀（深圳市普利通電子科技有限公司），冷藏冰箱。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本留取 囑研究對象留取24 h 尿液， 收集后予以充分混勻，分裝置21 根試管中密封保存，其中1 管即時（24 h）進(jìn)行24 h 尿蛋白檢測；5 管加入麝香草酚（每100 mL 尿液加0.1 g）后保存于室溫（晝夜溫差15～37℃）內(nèi)，簡稱防腐劑保存；5 管充滿CO2氣體，并測量CO2濃度為10%以上后保存于室溫（晝夜溫差15～37℃）內(nèi)，簡稱CO2保存；5 管保存于冷藏冰箱（2～8℃）內(nèi)，簡稱冷藏保存；5 管不做任何處理保存于室溫（晝夜溫差15～37℃）內(nèi)，簡稱常溫保存。

1.3.2 檢測方法分別對收集到24 h 尿標(biāo)本和4種保存法的尿標(biāo)本于24 h、48 h、72 h、96 h、192 h、384 h 時進(jìn)行尿蛋白濃度檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法統(tǒng)計軟件采用SAS 10.1，計量資料分析采用±S 表示，兩組間均數(shù)比較采用配對樣本t 檢驗，多組間均數(shù)比較采用方差分析，其中，重復(fù)測量數(shù)據(jù)多組間均數(shù)比較采用重復(fù)測量方差分析，組間兩兩比較采用LSD 法。 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 同種存儲方法下不同時間點尿蛋白濃度比較重復(fù)測量數(shù)據(jù)方差分析結(jié)果顯示，尿蛋白濃度4組保存方法比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（F組間=0.025，P=0.995），不同時間點尿蛋白濃度比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F時間=4.867，P＜0.05），時間與組間不存在交互作用（F交互=1.286，P=0.203）。 進(jìn)一步單獨效應(yīng)分析，僅CO2保存組不同時間點尿蛋白濃度差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（FCO2=2.630，P=0.029），其他保存方法不同時間點尿蛋白濃度差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，說明長時間保存時，冷藏保存、常溫保存和防腐劑保存優(yōu)于CO2保存，詳見表1。 由于研究目的為時間對尿蛋白濃度的影響，可認(rèn)定為尿蛋白濃度24 h測量數(shù)據(jù)為基準(zhǔn)數(shù)據(jù)，進(jìn)一步對不同時間點分別與基準(zhǔn)測量數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，CO2保存方法192 h 和384 h 與基準(zhǔn)測量數(shù)據(jù)差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.167、3.053，P=0.033、0.003）。 說明如果尿標(biāo)本保存96 h 內(nèi)可選用CO2保存方法，一旦保存時間超過192 h 時不宜選用CO2保存方法。 如果保存時間不超過384 h 時，可選用冷藏保存、防腐劑保存和常溫保存。

表1 尿蛋白濃度不同保存方法下不同時間點測量值比較（±S，mg/L）

表1 尿蛋白濃度不同保存方法下不同時間點測量值比較（±S，mg/L）

注：#表示主效應(yīng)，*表示交互效應(yīng)

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3 討論

3.1 檢測24 h 尿蛋白濃度時，尿液標(biāo)本可不用防腐劑、冷藏和CO2保存方法，用常溫保存法即可，保存時間不宜超過384 h 李艷、薛雄燕、馮綺玲、鄧敬儀等[7-10]研究表明，防腐劑對24 h 尿蛋白定量檢測結(jié)果有影響,王修全、楊柳等[11-12]研究表明，尿液在常溫條件下保存24 h， 尿蛋白定量檢測結(jié)果顯著升高。本研究探討了同一患者的尿標(biāo)本分別用麝香草酚化學(xué)防腐法、 冷藏法、CO2物理保鮮法和常溫保存法保存，尿蛋白濃度4 組保存方法比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（F組間=0.025，P=0.995），再對其不同時間尿蛋白檢測結(jié)果進(jìn)行比較， 結(jié)果提示，4 種保存法保存尿標(biāo)本96 h 前， 尿蛋白濃度檢測結(jié)果與基準(zhǔn)測量結(jié)果比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義， 說明防腐劑、冷藏法、CO2物理保鮮法和常溫條件下保存96 h 對尿蛋白定量檢測結(jié)果沒有影響， 這與國內(nèi)黃燕青[13]、劉倩等[14]、胡金川等[15]研究結(jié)果相似。 Feres 等[16]研究也表明，無論尿液中是否添加防腐劑，尿蛋白以及微量白蛋白的檢測結(jié)果與即時測定結(jié)果比較，均無明顯變化。

3.2 檢測24 h 尿蛋白濃度時，用常溫保存法保存時間不宜超過384 h Lo 等[17]發(fā)現(xiàn)通過CO2的處理，可以抑制原奶中的細(xì)菌繁殖， 從而延長原奶的保存時間；Yang 等[18]研究表明CO2氣調(diào)法貯藏，可以延長冷藏牛排的保質(zhì)時間；李浪花等[19]介紹了CO2在乳制品及農(nóng)產(chǎn)品保鮮中的技術(shù)應(yīng)用和研究進(jìn)展； 張燕等[20]對氣調(diào)貯藏對松茸保鮮品質(zhì)的影響進(jìn)行了研究； 然而都未涉及到CO2氣調(diào)法貯藏對尿標(biāo)本保鮮的相關(guān)研究。以往有針對保存24 h 時間點進(jìn)行尿蛋白總量對比分析的研究[15,21-23]，但缺少對最佳存儲期限的探討。本研究探討了用麝香草酚化學(xué)防腐法、冷藏法、CO2物理保鮮法和常溫保存法保存尿標(biāo)本，在放置24 h、48 h、72 h、96 h、192 h、384 h 后， 分別檢測尿蛋白濃度， 并對同一患者檢測結(jié)果前后進(jìn)行比較，統(tǒng)計分析4 種保存方法存儲尿標(biāo)本的時間對檢測結(jié)果的影響， 并確定最佳保存方法和存儲期限。本研究發(fā)現(xiàn)CO2保存在192 h 和384 h 時間點與基準(zhǔn)測量比較時差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義， 而其他保存方法各時間點尿蛋白濃度差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（見表1）。 本研究結(jié)果提示，檢測24 h 尿蛋白濃度時， 尿液標(biāo)本可不用防腐劑、 冷藏和CO2保存方法， 在室溫下放陰涼處即可， 但保存時間不宜超過384 h。

3.3 研究的局限性 由于本次研究尿標(biāo)本保存96 h后時間跨度較大， 因此不能確切得出CO2保存具體時長。另外，本次研究只涉及到CO2在保存尿液標(biāo)本中的應(yīng)用，但筆者通過閱讀文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，CO2的保鮮效果的影響因素包括氧氣分壓、CO2分壓、 儲存材料、溫度、濕度等[17-20，24-25]，本次研究均未涉及。 關(guān)于CO2保鮮效果的影響因素，在尿液標(biāo)本保鮮中的具體運(yùn)用以及存在的相關(guān)問題有待進(jìn)一步研究。

[致謝]感謝沈陽醫(yī)學(xué)院的黃啟風(fēng)老師對本文統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)的指導(dǎo)和把關(guān)。