張大軍,王世聯(lián)

(湘西民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院,湖南吉首 416000)

草魚(yú)是我國(guó)廣泛養(yǎng)殖的魚(yú)種之一，早在10年前，其每年的總產(chǎn)量就超過(guò)了420 萬(wàn)t。集約化水產(chǎn)養(yǎng)殖依賴于人工飼料，配方基于魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)需求。磷是魚(yú)類必需的重要礦物質(zhì)元素之一，淡水中這種元素的濃度很低，魚(yú)不能從水中吸收足夠的磷。飼糧磷是草魚(yú)磷攝入的主要來(lái)源。日糧缺磷會(huì)導(dǎo)致草魚(yú)飼料效率低下，生長(zhǎng)緩慢（Xie 等，2011）。目前，對(duì)磷需求的研究主要集中在幼魚(yú)，如草魚(yú)幼魚(yú)和劍魚(yú)幼魚(yú)。但營(yíng)養(yǎng)需求可能因魚(yú)的生長(zhǎng)階段不同而不同。魚(yú)的肌肉組織是人類主要的食用部分，魚(yú)肉中含有豐富的多不飽和脂肪酸和平衡的氨基酸，越來(lái)越受到消費(fèi)者的歡迎（莊海旗等，2018）。眾所周知，水分、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)含量、系水力、pH、膠原蛋白濃度、羥脯氨酸含量及肌肉的機(jī)械性共同構(gòu)成了最重要的肉質(zhì)性狀（耿翠竹等，2016）。這些肌肉特征受飼料、遺傳、運(yùn)動(dòng)和環(huán)境的影響，而在這些因素中，營(yíng)養(yǎng)是一個(gè)重要因素。有報(bào)道稱，低鈣日糧可以減少豬的滴水損失。但目前關(guān)于磷對(duì)魚(yú)肉品質(zhì)影響的研究有限。Zhou等（2004）發(fā)現(xiàn)，磷可以提高紅點(diǎn)石斑魚(yú)的肌肉鈣含量，表明磷可能影響魚(yú)類肌肉的硬度。本研究旨在探討磷對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、脂質(zhì)過(guò)氧化、蛋白質(zhì)氧化和抗氧化狀態(tài)及肌肉性狀的影響。通過(guò)研究磷對(duì)肌肉抗氧化性能的影響，揭示抗氧化對(duì)肌肉性狀的影響機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)選擇平均初始體重為（283.15±3.29）g 的 720 條草魚(yú)為試驗(yàn)動(dòng)物，隨機(jī)分為6 組，每組4 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30 條。日糧有效磷水平分別為 1.0、2.5、4.0、5.5、7.0、8.5 g/kg，試驗(yàn)共開(kāi)展8 周。試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)草魚(yú)飼養(yǎng)在水溫為（25.8±2）℃，pH 為 7.02±0.51，溶解氧保持在 6.0 mg/L 以上的水族缸中。試驗(yàn)前和試驗(yàn)中每天采集水樣進(jìn)行分析。水體中磷的平均濃度低于0.049 mg/L。為了確定基礎(chǔ)日糧或磷酸氫鈣中磷的有效性，將1.0和4.0 g/kg 有效磷日糧（均含5 g/kg Cr2O3）分別投喂3 次，經(jīng)過(guò)10 d 的喂養(yǎng)期后，于采食后6 h 收集糞便。根據(jù)Xie 等（2011）的方法測(cè)定磷表觀消化率。

1.2 樣品采集與分析 在飼養(yǎng)試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束階段，每個(gè)水缸里的魚(yú)都被稱重。增重率/%= 日增重/ 初重×100，特定生長(zhǎng)率/%=（平均末重-平均初重）/ 試驗(yàn)天數(shù)×100。在采樣之前，將魚(yú)禁食12 h，每個(gè)處理選出體重接近的20 條魚(yú)，從尾靜脈提取血液，置于5 mL 試管中，-4℃保存過(guò)夜，3000×g離心 10 min，取血清，-20℃保存至分析。同時(shí)選取肌肉樣本儲(chǔ)存在-80℃。肌肉樣品用于測(cè)定取樣后0 和24 h 后的pH 及蒸煮損失和剪切力。用常規(guī)養(yǎng)分分析方法測(cè)定肌肉的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分、鈣和磷含量。血清磷含量和堿性磷酸酶活性、血清生化指標(biāo)[ 如丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）含量]、蛋白羰基（PC）、滅活超氧陰離子（ASA）、滅活羥基自由基（AHR）、超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽 -S- 轉(zhuǎn)移酶（GST）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GPx）和谷胱甘肽還原酶（GR）活性采用商品試劑盒測(cè)定。

1.3 數(shù)據(jù)計(jì)算與分析 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 單因素方差分析，數(shù)據(jù)以“平均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用Duncan 法進(jìn)行多重比較，P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同有效磷對(duì)草魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響 由表2 可知，日糧有效磷水平達(dá)到4.0 g/kg 時(shí)增長(zhǎng)率顯著提高（P＜0.05），且達(dá)到平臺(tái)水平。日糧有效磷水平≥5.5 g/kg 時(shí)，特定生長(zhǎng)速率和飼料效率與增長(zhǎng)率一致，顯著提高（P＜0.05）。日糧有效磷水平對(duì)采食量的影響表現(xiàn)為顯著二次曲線效應(yīng)，在4.0 g/kg 有效磷水平時(shí)達(dá)到平臺(tái)值。血清磷和堿性磷酸酶數(shù)據(jù)顯示，日糧有效磷水平達(dá)到5.5 g/kg 時(shí)，血清磷水平顯著提高（P＜0.05），此后保持不變（P＞0.05）。血清堿性磷酸酶活性隨日糧磷水平升高呈顯著二次曲線效應(yīng)（P＜ 0.05）。

表1 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平 %

2.2 不同有效磷對(duì)草魚(yú)體成分及肉質(zhì)的影響 由表3 可知，8.5 g/kg 有效磷組肌肉水分含量最高，4.0 g/kg 有效磷組肌肉水分含量最低（P＜0.05）。日糧有效磷水平為4.0 g/kg 和5.5 g/kg 時(shí)，草魚(yú)肌肉粗蛋白質(zhì)含量顯著高于其他組（P＜0.05）。日糧有效磷水平為5.5 ～8.5 g/kg 時(shí)，肌肉粗脂肪含量顯著低于 1.0 ～ 4.0 g/kg 組（P＜ 0.05）。5.5 g/kg 有效磷組草魚(yú)肌肉灰分、鈣和磷含量最低（P＜0.05）。日糧中有效磷水平為2.5 g/kg 時(shí)，草魚(yú)屠宰后 0 和 24 h pH 最低（P＜ 0.05），其余各組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。日糧有效磷水平分別為4.0 g/kg 和5.5 g/kg 時(shí)，肌肉蒸煮損失顯著降低，之后增加（P＜0.05）。不同有效磷水平飼養(yǎng)的6個(gè)處理組間肌肉剪切值和羥脯氨酸含量無(wú)顯著差異（P＞ 0.05）。

2.3 不同有效磷對(duì)草魚(yú)肌肉生化指標(biāo)的影響由表4 可知，日糧有效磷水平達(dá)到4.0 g/kg 時(shí)，肌肉細(xì)胞丙二醛含量顯著降低，之后升高（P＜0.05）。當(dāng)日糧有效磷水平達(dá)到5.5 g/kg 時(shí)，蛋白羰基最低（P＜0.05）。無(wú)磷添加處理組滅活

羥基自由基水平顯著低于磷添加組（P＜0.05）。與其他組相比，不添加磷組的魚(yú)肌肉滅活超氧陰離子含量較高（P＜0.05）。日糧有效磷水平達(dá)到4.0 g/kg 后，堿性磷酸酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽水平均心臟提高（P＜0.05），隨后又下降（P＜0.05）。相反，日糧有效磷水平達(dá)到5.5 g/kg后，谷胱甘肽還原酶水平顯著下降（P＜0.05），隨后趨于穩(wěn)定。未補(bǔ)充有效磷日糧處理組谷胱甘肽-S- 轉(zhuǎn)移酶水平低于其他處理組。有效磷在1.0 ～4.0 g/kg 處理組谷胱甘肽過(guò)氧化物水平顯著高于其他處理組（P＜0.05）。

表2 飼料有效磷水平對(duì)草魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

表3 飼料不同有效磷水平對(duì)草魚(yú)體成分及肉質(zhì)的影響

表4 飼料不同有效磷水平對(duì)草魚(yú)肌肉生化指標(biāo)的影響

3 討論

研究表明，日糧有效磷水平對(duì)草魚(yú)生長(zhǎng)性能有顯著影響，缺磷日糧組增長(zhǎng)率較差，通過(guò)最佳補(bǔ)磷得到改善。在本研究中，隨著日糧有效磷添加水平的升高，采食量和飼料效率被提高到最佳水平。此外，補(bǔ)充有效磷可顯著提高血清磷和堿性磷酸酶活性，說(shuō)明改善了其營(yíng)養(yǎng)狀況，這與（Ye等，2006）的研究結(jié)果一致。在大多數(shù)硬骨魚(yú)中，肌肉質(zhì)量占身體質(zhì)量的60%以上（Alami-Durante等，2010）。本研究表明，隨著飼糧中磷水平的增加，肌肉蛋白含量增加。肌肉蛋白磷含量的增加可能與氨基酸脫氨和氨排泄減少有關(guān)。日糧蛋白代謝的主要最終產(chǎn)物是硬骨魚(yú)體內(nèi)的氨，Yang 等（2011）也發(fā)現(xiàn)，磷可以降低銀鱸幼魚(yú)氨基酸脫氨和氨排泄。而缺磷處理組魚(yú)肌肉脂質(zhì)含量增加。缺磷導(dǎo)致更高的肌肉脂質(zhì)積累，可能是由于抑制了β- 氧化的脂肪酸。

魚(yú)的肌肉組織是人們主要食用部分，在本研究中，我們考察了不同磷水平對(duì)肉品質(zhì)的影響，如肉的pH、羥脯氨酸含量、剪切力和系水力。以2.5 g/kg 有效磷飼糧喂養(yǎng)的草魚(yú)肉pH 低于其他各組。由于豬肉pH 受乳酸和緩沖能力的影響，當(dāng)ATP 耗盡時(shí)，由于乳酸的產(chǎn)生，豬肌肉pH 開(kāi)始下降，說(shuō)明磷化合物在調(diào)節(jié)肉類pH 方面具有緩沖作用（Kyla-Puhju 等，2004）。

丙二醛和蛋白羰基是脂質(zhì)氧化損傷最容易檢測(cè)的生物標(biāo)志物（Dalle-Donne 等，2003）。在本研究中，草魚(yú)肌肉中的丙二醛和蛋白羰基含量在最佳日糧有效磷補(bǔ)充的情況下下降，這表明磷可以降低魚(yú)的肌肉脂質(zhì)和蛋白質(zhì)氧化。脂質(zhì)過(guò)氧化通常是由活性氧引起的，而本結(jié)果暗示，日糧補(bǔ)充適宜水平的有效磷可以清除和 OH-的能力。磷參與 NADPH 的組成，Yang 等（2011）提出NADPH 可能保護(hù)淡水貽貝中的過(guò)氧化氫酶活性，同時(shí)谷胱甘肽作為主要的抗氧化物可以降低活性氧。本研究表明，日糧中有效磷水平越高，谷胱甘肽活性越高。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著日糧有效磷水平的提高，谷胱甘肽還原酶活性下降，由于谷胱甘肽的穩(wěn)態(tài)是通過(guò)細(xì)胞內(nèi)的合成或其氧化形式谷胱甘肽二硫的再生來(lái)維持，本試驗(yàn)結(jié)果可能是由于在降低谷胱甘肽二硫過(guò)程中消耗了谷胱甘肽還原酶（Fang 等，2002）。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，日糧有效磷的補(bǔ)充能顯著提高草魚(yú)生長(zhǎng)性能和肌肉系水力，通過(guò)提高自由基清除能力和抗氧化酶活力，如超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽-S- 轉(zhuǎn)移酶活性和谷胱甘肽含量，防止肌肉脂質(zhì)、蛋白氧化。