張夢麒　田孟華　張振宇　楊新周

摘 要：目的：研究天麻和刺五加提取物對于改進睡眠質(zhì)量的作用，為天麻和刺五加改善睡眠保健食品或藥品的開發(fā)奠定一定的基礎(chǔ)。方法：分別以0.05、0.1、0.3g/kg·bw劑量給小鼠連續(xù)灌胃30d，采用直接睡眠實驗、延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時間實驗、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗、巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗，對小鼠睡眠時間和潛伏睡眠時間等進行觀察。結(jié)果：經(jīng)口給予小鼠不同劑量的天麻刺五加提取物30d，末次給藥后，與溶媒對照組比較，（1）各劑量組小鼠均未發(fā)生睡眠現(xiàn)象;（2）0.3g/kg·bw劑量組小鼠睡眠時間顯著增加，具有顯著性差異，（3）0.1、0.3g/kg·bw劑量組入睡動物數(shù)顯著增加，具有顯著性差異。（4）0.05g/kg·bw、0.1g/kg·bw劑量組小鼠睡眠潛伏期明顯縮短，具有顯著性差異。結(jié)論：天麻刺五加提取物具有輔助睡眠的功效和縮短睡眠潛伏期的時間，具有改善睡眠質(zhì)量的作用。

關(guān)鍵詞：天麻;刺五加;提取物;改善睡眠

隨著社會的不斷進步與發(fā)展，生活節(jié)奏越來越快，人們的生活壓力隨之增大，加之人們睡前使用電子產(chǎn)品的頻率增加，睡眠障礙疾病也隨之產(chǎn)生，失眠也逐漸成為臨床最常見的睡眠障礙類型。根據(jù)第三屆世界睡眠大會統(tǒng)計表明，預(yù)計到2020年大約有超過7億失眠者。目前針對失眠多采用一些藥物治療，包括苯二氮□類類受體激動藥、褪黑素或褪黑素受體激動劑、具有鎮(zhèn)靜作用的抗抑郁癥藥物、某些抗精神病藥、有中樞抑制作用的抗組胺藥物、中藥等進行治療，長期服用西藥類藥物容易產(chǎn)生依賴并帶來一定的副作用，如出現(xiàn)共濟失調(diào)、順行記憶障礙等。因此研究一些藥食同源的具有養(yǎng)心安神的藥品或保健食品，用于改善失眠癥狀極為重要。

天麻（GastrodiaeRhizoma）為蘭科真菌營養(yǎng)型多年生草本植物天麻（Gastrodiaelata Bl.）的干燥塊莖，是我國傳統(tǒng)名貴中藥材之一，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，位列上品，在中國和東亞國家已有上千年的應(yīng)用歷史?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，天麻對預(yù)防和治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管和免疫系統(tǒng)疾病具有一定功效，臨床醫(yī)學(xué)常用于治療頭暈?zāi)垦?、肢體麻木、癲癇抽搐、小兒驚風(fēng)、風(fēng)濕痹痛等癥。此外，天麻富含多種營養(yǎng)成分和礦質(zhì)元素，已廣泛用于食品輔料，如“天麻蒸蛋”、“天麻烏骨雞”和“天麻粥”等。刺五加（Radix AcanthopanacisSemticosi）為我國的傳統(tǒng)中藥，重點開發(fā)的北藥之一，益氣健脾、補腎安神的功效?，F(xiàn)代臨床和實驗研究表明，刺五加在治療睡眠障礙提高睡眠質(zhì)量方面具有獨特的優(yōu)勢。

天麻和刺五加均具有安眠鎮(zhèn)靜的作用，因此，本文根據(jù)天麻和五味子的作用，將二者的提取物進行配伍，研究天麻和刺五加提取物對于改進睡眠質(zhì)量的作用，為天麻和刺五加改善睡眠保健食品或藥品的開發(fā)奠定一定的基礎(chǔ)。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

SPF級KM小鼠，全雌，周齡4～6周，體重18～22g，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（粵）2013-0002。實驗動物使用許可證：SYXK（滇）K2017-0004，發(fā)證單位：昆明市科技局。小鼠于PC飼養(yǎng)盒群養(yǎng)，每日飼喂大小鼠生長繁殖飼料，自由取食，自由飲水。飼養(yǎng)溫度為25±2℃，相對濕度40～70%。

1.2 藥品與試劑

天麻提取物配伍刺五加提取物（以下簡稱“天麻刺五加提取物”），兩種提取物單獨提取，按照1∶2比例進行配伍，人體推薦量為0.5g/60kg·bw（成人）/日。天麻提取物選用干燥的優(yōu)質(zhì)天麻塊莖，粉碎，加入10倍量的70%乙醇加熱回流提取3次，合并提取液，濃縮、干燥所得，每克天麻提取物相當(dāng)于8.0g生藥量;刺五加提取物采用優(yōu)質(zhì)刺五加根莖粉碎至約40目，加入10倍量的60%乙醇加熱回流提取3次，合并提取液，濃縮、干燥所得，每克刺五加提取物相當(dāng)于12.0g生藥量。

根據(jù)天麻刺五加提取物人體推薦劑量，設(shè)0.042、0.083、0.25g/kg·bw三個劑量組（根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》分別相當(dāng)于受試樣品人體推薦攝入量的5倍、10倍、30倍），采用純水配制，經(jīng)口每日1次給予小鼠相應(yīng)劑量的受試物，小鼠灌胃量為0.1mL/10g·bw。

戊巴比妥鈉，Sigma公司分裝，批號：20131225、巴比妥鈉，上海試劑三廠生產(chǎn)，批號：65001。

1.3 實驗儀器

JJ2000型電子天平，常熟市雙杰測試儀器廠生產(chǎn)、SQP型電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司生產(chǎn)、ELGA LA 613超純水機，英國ELGA LabWater/VWS（UK）Ltd生產(chǎn)。

2 實驗方法

2.1 直接睡眠實驗

取SPF級KM小鼠48只，隨機分為溶媒對照組、天麻刺五加提取物低、中、高劑量組，每組12只，全雄。受試組以0.1mL/10g·bw給藥體積灌胃給予相應(yīng)受試物，溶媒對照組給予等體積純水，1次/d，連續(xù)30d。末次給藥后，以小鼠翻正反射消失1min為進入睡眠，翻正反射恢復(fù)即為小鼠覺醒判定標準，記錄各組入睡動物數(shù)及睡眠時間，并對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。

2.2 延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗

分組及給藥方法同“2.1”。末次給藥15min后，各組小鼠均以45mg/kg·bw劑量腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為10mL/kg·bw。記錄動物翻正反射消失至覺醒的時間為持續(xù)睡眠時間（當(dāng)小鼠置于背臥位時，能立即翻正身位，超過60s不能翻正者，即認為翻正反射消失，進入睡眠。翻正反射恢復(fù)即為動物覺醒，翻正反射消失至恢復(fù)這段時間為動物睡眠時間），觀察受試樣品能否延長戊巴比妥鈉睡眠時間。比較溶媒對照組與受試物組之間睡眠時間延長的差異，睡眠時間延長有顯著性，則實驗結(jié)果陽性。

2.3 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗

分組及給藥方法同“2.1”。末次給藥15min后，各組動物按30mg/kg·bw劑量腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為10mL/kg·bw，記錄30min內(nèi)入睡動物數(shù)（以小鼠翻正消失1min為睡眠指標）。比較溶媒對照組與受試物組之間入睡動物數(shù)的差異，入睡動物數(shù)增加有顯著性，則實驗結(jié)果陽性。

2.4 巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗

分組及給藥方法同“2.1”。末次給藥15min后，各組小鼠均以10mL/kg·bw給藥體積腹腔注射巴比妥鈉（300mg/kg·bw），記錄注射巴比妥鈉后至小鼠翻正反射消失時間作為入睡潛伏期（以小鼠翻正消失1min為睡眠指標），觀察受試物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響。比較溶媒對照組與受試物組之間睡眠潛伏期的差異，睡眠潛伏期縮短有顯著性，則實驗結(jié)果陽性。

2.5 試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

入睡潛伏期、睡眠時間為計量資料，用SPSS17.0軟件對各試驗原始數(shù)據(jù)進行方差齊性檢驗，滿足方差齊要求的數(shù)據(jù)資料，用單因素方差分析方法中多個試驗組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計處理;對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)資料進行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換所得的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理。入睡動物數(shù)為計數(shù)資料，用X2檢驗進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。

3 實驗結(jié)果

3.1 對直接睡眠的影響

實驗結(jié)果如表1所示：經(jīng)口給予小鼠不同劑量的天麻刺五加提取物30d，末次給藥后，各組小鼠均未發(fā)生睡眠現(xiàn)象。天麻刺五加提取物0.05、0.1、0.3g/kg·bw劑量對小鼠均無直接睡眠作用。

3.2 天麻刺五加對延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時間的影響

實驗結(jié)果如表2所示：經(jīng)口給予小鼠不同劑量的天麻刺五加提取物30d，腹腔注射戊巴比妥鈉，觀察小鼠的睡眠時間。睡眠時間經(jīng)方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析中多個實驗組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計處理，與溶媒對照組比較，0.3g/kg·bw劑量組小鼠睡眠時間顯著增加，具有顯著性差異（P<0.05）。

3.3 天麻刺五加提取物對戊巴比妥鈉閾下劑量催眠的影響

實驗結(jié)果如表3所示：經(jīng)口給予小鼠不同劑量的天麻刺五加提取物30d，腹腔注射戊巴比妥鈉，觀察30min內(nèi)各組小鼠睡眠發(fā)生率。入睡動物數(shù)用X2檢驗進行統(tǒng)計處理。與溶媒對照組比較，0.1、0.3g/kg·bw劑量組入睡動物數(shù)顯著增加，具有顯著性差異（P<0.05）。

3.4 天麻刺五加提取物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響

實驗結(jié)果如表4所示：經(jīng)口給予小鼠不同劑量的天麻刺五加提取物30d，腹腔注射巴比妥鈉，觀察小鼠的睡眠潛伏期。睡眠潛伏期經(jīng)方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計處理。與溶媒對照組比較，0.05g/kg·bw、0.1g/kg·bw劑量組小鼠睡眠潛伏期明顯縮短，具有顯著性差異（P<0.05）。

4 討論

本文參照《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》（2003年版）的要求，采用4個實驗對天麻刺五加提取物的改善睡眠作用進行研究。其中，直接睡眠實驗對受試物的直接催眠作用進行研究;延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗主要是研究受試物與戊巴比妥鈉的協(xié)同作用;戊巴比妥鈉通過肝酶代謝，若受試物對肝酶具有抑制作用，亦可延長戊巴比妥鈉睡眠時間，因此，為了排除干擾，進行戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗，如果入睡動物數(shù)顯著增加，可說明受試樣品與戊巴比妥鈉（閾下劑量）具有協(xié)同作用;巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗是在巴比妥鈉催眠的基礎(chǔ)上，觀察受試樣品能否縮短入睡潛伏期，若睡眠潛伏期縮短，則說明受試樣品與巴比妥鈉有協(xié)同作用。

目前，對天麻、刺五加在改善睡眠方面的研究較多，但對兩者進行配伍后的研究較少。在本實驗條件及所設(shè)計的劑量范圍內(nèi)，天麻刺五加提取物0.3g/kg·bw可明顯增加戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時間，0.1和0.3g/kg·bw劑量可明顯增加戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠入睡數(shù)量，且呈現(xiàn)出明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系;天麻刺五加提取物0.1和0.3g/kg·bw劑量組小鼠睡眠潛伏期明顯縮短。上述結(jié)果表明，天麻刺五加提取物具有改善睡眠的保健功能。同時，實驗中發(fā)現(xiàn)天麻刺五加提取物各劑量組對小鼠均無明顯直接睡眠作用。

綜上所述，根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》（2003年版）中的判定標準，本實驗條件及劑量范圍內(nèi)，天麻刺五加提取物具有改善睡眠功能作用，且不具有直接睡眠作用，其催眠作用弱于鎮(zhèn)靜催眠藥物，其改善睡眠作用的機制，還需進一步深入研究。

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