牛奶是人們?nèi)粘Ｉ钪邢矏鄣氖澄镏?，營養(yǎng)豐富，容易消化吸收，是理想的天然食品。眾所周知，純牛奶因為原料只有牛奶，所以是不含蔗糖的，但在實際的檢測過程中，按GB5009.8-2016采用高效液相色譜法檢測牛奶中的蔗糖含量時，在色譜圖上，有時我們會看到疑似蔗糖的色譜峰，該色譜峰的出峰時間與蔗糖標(biāo)液的出峰時間完全吻合，那么這到底是不是蔗糖？該如何確定與判斷，我們做了大量的實驗對比，確定了疑似蔗糖的色譜峰并不是蔗糖，而是乳糖。乳糖是牛奶本身就含有的物質(zhì)，乳糖的存在往往會干擾蔗糖的檢測，容易讓檢測者誤將乳糖判為蔗糖，影響最終的檢測結(jié)果，因此我們對蔗糖檢測的研究對實際的檢測檢驗工作有著重要意義。

實驗部分

儀器：本實驗使用島津高效液相色譜儀LC-20A 與示差折光檢測器RID-10A。具體配置為：LC-20A×2 輸液泵，SIL-20A自動進(jìn)樣器，CTO-20A 柱溫箱，CBM-20A 系統(tǒng)控制器， SHIMADZU LCsolution 色譜工作站。

試劑與材料：蔗糖、乳糖（國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，純度均為99%）；乙腈（色譜純）；亞鐵氰化鉀、乙酸鋅（分析純）；實驗用水為一級水。實驗樣品：樣品來源于當(dāng)?shù)爻匈徺I的牛奶，包括樣品1：三元天愛純牛奶；樣品2：蒙牛純牛奶；樣品3：百菲酪高鈣水牛奶。

色譜條件：色譜柱：氨基色譜柱（250L×4.6，5μm）；流動相：乙腈+水；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣體積：10μL；柱溫：40℃

主要溶液配制：蔗糖標(biāo)液（10mg/mL)：稱取經(jīng)96℃±2℃干燥過的蔗糖標(biāo)物0.5g，加水溶解并定容至50mL。乳糖標(biāo)液（10mg/mL)：稱取經(jīng)96℃±2℃干燥過的乳糖標(biāo)物0.5g，加水溶解并定容至50mL。亞鐵氰化鉀溶液：稱10.6g亞鐵氰化鉀，加水溶解并定容至100mL。乙酸鋅溶液：稱21.9g乙酸鋅，加冰乙酸3mL，加水溶解并定容至100mL。

樣品制備：稱取10.0g樣品，加50mL水溶解，分別加5mL亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液，用水定容至100mL。超聲30min，用濾紙過濾，濾液過0.45μm濾膜過濾至進(jìn)樣瓶，供液相色譜分析。

實驗條件與結(jié)果討論

實驗一。蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：10mg/mL，流動相：乙腈：水=70:30，以此條件進(jìn)樣，對三元天愛和蒙牛兩種純牛奶進(jìn)行檢測，并做了加標(biāo)實驗，發(fā)現(xiàn)兩種純牛奶和加標(biāo)實驗都在蔗糖標(biāo)液的出峰位置看到了相應(yīng)的色譜峰，如圖1所示：

由圖1可以看出，樣品1、樣品2和樣品1加標(biāo)的出峰時間與蔗糖標(biāo)準(zhǔn)的出峰時間完全吻合，那究竟是不是蔗糖呢？從理論上來說，純牛奶中是不含有蔗糖的，且由檢測到的蔗糖濃度可以看出，濃度與牛奶中乳糖的含量極為相似，為了確保實驗的準(zhǔn)確性，于是又進(jìn)行了實驗二的驗證。

實驗二。配制一個乳糖標(biāo)液（10mg/mL），采用“實驗一”同樣的條件進(jìn)樣，發(fā)現(xiàn)乳糖標(biāo)準(zhǔn)的出峰時間與蔗糖的出峰時間完全重合了（見圖2），因此懷疑“實驗一”中樣品檢測到的色譜峰極有可能是乳糖。為了驗證這個猜測，我們對流動相進(jìn)行了調(diào)整，將乙腈與水的配比調(diào)整為85：15，目的是把乳糖和蔗糖的色譜峰分開。經(jīng)過再次對標(biāo)液和“實驗一”的樣品進(jìn)行重新檢測，發(fā)現(xiàn)在蔗糖標(biāo)準(zhǔn)出峰的時間不再看到有色譜峰了，而在乳糖標(biāo)準(zhǔn)的出峰時間則看到了相應(yīng)的色譜峰，如圖3所示。

結(jié)論

由圖3可見，實驗一中檢測到的色譜峰就是乳糖，而不是蔗糖。通過實驗一和實驗二可以看出，在檢測牛奶中蔗糖含量時，同時對乳糖進(jìn)行檢測是非常有必要的，否則可能就會發(fā)生實驗一的情況，容易造成假陽性的誤判，影響最終的實驗結(jié)果。