張百重, 蘇 栩, 盧留洋, 甄叢愛(ài), 朱 斌, 李亞設(shè), 董文陽(yáng),汪 耿, 胥燕博, 孔凡彬, 劉潤(rùn)強(qiáng), 陳錫嶺,*, 高希武,*

(1. 河南科技學(xué)院資源與環(huán)境學(xué)院, 河南新鄉(xiāng) 453003; 2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲(chóng)學(xué)系, 北京 100193)

草地貪夜蛾Spodopterafrugiperda是一種具有重大入侵性且危害嚴(yán)重的雜食性害蟲(chóng)，主要危害玉米、水稻、高粱、花生等作物(Goergenetal., 2016; 劉杰等, 2019)。目前，草地貪夜蛾的防治手段仍以化學(xué)防治為主(Okumaetal., 2018; Togolaetal., 2018; 趙勝園等, 2019)。Hardke等(2011)報(bào)道氯蟲(chóng)苯甲酰胺、氰蟲(chóng)酰胺、氟蟲(chóng)雙酰胺、乙基多殺菌素、茚蟲(chóng)威、高效氯氟氰菊酯、甲氧蟲(chóng)酰肼、雙苯氟脲等對(duì)該害蟲(chóng)防治效果較好。2019年我國(guó)推薦防治草地貪夜蛾的藥劑有氯蟲(chóng)苯甲酰胺、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(甲維鹽)、乙基多殺菌素、蘇云金桿菌Bacillusthuringiensis(Bt)等25種。氯蟲(chóng)苯甲酰胺、甲維鹽及Bt作為目前防治鱗翅目害蟲(chóng)的主要藥劑(潘有祥, 2005; Cordovaetal., 2006)。但在實(shí)際生產(chǎn)中，由于這些殺蟲(chóng)劑的長(zhǎng)期不合理使用，部分害蟲(chóng)已產(chǎn)生不同程度的抗性，如小菜蛾P(guān)lutellaxylostella田間種群對(duì)Bt抗性倍數(shù)高達(dá)200多倍、對(duì)氯蟲(chóng)苯甲酰胺抗性倍數(shù)高達(dá)2 000多倍(胡珍娣等, 2012; Wang and Wu, 2012; Wangetal., 2013; 夏耀民等, 2013)，粘蟲(chóng)田間種群對(duì)氯蟲(chóng)苯甲酰胺抗性倍數(shù)為1.314～4.213倍、對(duì)甲維鹽抗性倍數(shù)為1.000～4.385倍(董杰等, 2014; Liuetal., 2016)，在巴西草地貪夜蛾田間種群已對(duì)Bt產(chǎn)生10倍以上的抗性(Monneratetal., 2015)。害蟲(chóng)對(duì)殺蟲(chóng)劑的抗性機(jī)制主要涉及靶標(biāo)抗性和代謝抗性兩方面。除靶標(biāo)抗性外，解毒酶代謝活性增加將殺蟲(chóng)劑代謝成無(wú)毒或毒性較低產(chǎn)物是害蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性的另一個(gè)重要方面(Francisetal., 2006; 邱星輝, 2014; 李秀霞等, 2015)。殺蟲(chóng)劑通過(guò)影響害蟲(chóng)體內(nèi)解毒酶相關(guān)基因的表達(dá)增加其代謝活性，從而增加害蟲(chóng)對(duì)殺蟲(chóng)劑的抗性(或耐藥性)(陳澄宇等, 2015; Elzakietal., 2015)。

細(xì)胞色素P450是昆蟲(chóng)體內(nèi)的重要代謝酶系之一，能夠代謝多種內(nèi)源和外源化合物(Zhuetal., 2010; Riveronetal., 2013; Edietal., 2014)。害蟲(chóng)P450酶活性能夠被農(nóng)藥等外源化合物誘導(dǎo)升高，進(jìn)而使昆蟲(chóng)適應(yīng)多樣化的環(huán)境(Van Pottelbergeetal., 2008; Yangetal., 2015)。P450基因表達(dá)被殺蟲(chóng)劑誘導(dǎo)上升是害蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性的普遍機(jī)制(邱星輝, 2014)。研究表明，殺蟲(chóng)劑亞致死劑量可誘導(dǎo)P450活性上升，以及多個(gè)P450基因表達(dá)上調(diào)(徐鹿, 2017; 張琪慧等, 2018; 劉俊杰等, 2019)，進(jìn)而促進(jìn)其產(chǎn)生耐藥性。我們前期研究表明，用殺蟲(chóng)劑的LC10處理草地貪夜蛾2齡幼蟲(chóng)48 h時(shí)對(duì)P450基因表達(dá)的誘導(dǎo)效應(yīng)最好。氯蟲(chóng)苯甲酰胺、甲維鹽及Bt作為防治草地貪夜蛾的主要有效藥劑，研究氯蟲(chóng)苯甲酰胺、甲維鹽及Bt亞致死劑量對(duì)草地貪夜蛾P(guān)450基因表達(dá)的誘導(dǎo)效應(yīng)在評(píng)估其在害蟲(chóng)防治中的作用有著重要的意義。

因此，本研究根據(jù)Giraudo等(2015)報(bào)道的植物次生物質(zhì)和殺蟲(chóng)劑對(duì)草地貪夜蛾42個(gè)P450基因表達(dá)影響的基礎(chǔ)上，從中選擇了可能被殺蟲(chóng)劑誘導(dǎo)表達(dá)的16個(gè)P450基因，而后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitative PCR, RT-qPCR)技術(shù)分析不同殺蟲(chóng)劑亞致死劑量對(duì)草地貪夜蛾16個(gè)P450基因表達(dá)的影響，以期為合理科學(xué)使用農(nóng)藥及深入開(kāi)展研究草地貪夜蛾P(guān)450基因的功能和調(diào)控提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試蟲(chóng)源

供試草地貪夜蛾來(lái)自云南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院昆蟲(chóng)病原體實(shí)驗(yàn)室饋贈(zèng)，在溫度23～25℃、相對(duì)濕度50%～70%、光周期17L∶7D的條件下飼養(yǎng)于養(yǎng)蟲(chóng)籠中，采用玉米葉片和人工飼料飼養(yǎng)。

1.2 試劑與藥品

RNA提取試劑(TRIzol Reagent)，美國(guó)Invitrogen公司產(chǎn)品；cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒(FastKing RT Kit)和Pfu Taq DNA合成酶，天根生化科技(北京)有限公司產(chǎn)品；qPCR 熒光染料TB GreenTMPremix ExTaqTMII、連接載體pMD19-T、大腸桿菌EscherichiacoliDH5α感受態(tài)細(xì)胞，日本TaKaRa公司產(chǎn)品；DNA回收試劑盒、質(zhì)粒提取試劑盒(EZNA Plasmid Mini Kit)，美國(guó)Omega公司產(chǎn)品；98%氯蟲(chóng)苯甲酰胺(chlorantraniliprole)原藥，94%甲維鹽(emamectin benzoate)原藥，來(lái)自深圳諾普信股份有限公司；32 000 IU/mg蘇云金桿菌(Bt)，來(lái)自山東魯抗生物農(nóng)藥有限責(zé)任公司；其余所用的化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

Bio-Rad T100TMPCR儀、PowerPacTM電泳儀、CFX96實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，美國(guó)Bio-Rad公司產(chǎn)品；凝膠成像系統(tǒng)BG-gdsAUTO，北京百晶生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；Nano Photometer TMP-Class微量核酸蛋白分析儀，德國(guó)Implen公司產(chǎn)品；引物由華大基因合成。

1.3 毒力測(cè)定

為確定處理草地貪夜蛾的殺蟲(chóng)劑亞致死劑量，采用葉片浸漬法(游靈等, 2013; 董杰等, 2014)分別測(cè)定氯蟲(chóng)苯甲酰胺、甲維鹽和蘇云金桿菌(Bt)對(duì)草地貪夜蛾的毒力。先將氯蟲(chóng)苯甲酰胺和甲維鹽原藥分別用丙酮配制成母液，Bt母液用含0.05%Triton X-100的蒸餾水配制，使用時(shí)再用蒸餾水含0.05% Triton X-100按等比稀釋5個(gè)濃度，每個(gè)濃度3次重復(fù)。用移液槍分別吸取2 mL稀釋后的藥液加入到4 mL離心管中，另吸取2 mL蒸餾水包含0.05% Triton X-100加入到離心管中作為對(duì)照。將培養(yǎng)的3葉期玉米葉片剪成長(zhǎng)×寬=5 cm×0.5 cm的長(zhǎng)方形葉片在不同處理中浸漬15 s，取出晾干后放入直徑為9 cm的玻璃培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿放入大小一致、健康的草地貪夜蛾2齡幼蟲(chóng)15頭，置于溫度23～25℃、相對(duì)濕度70%～80%、光周期14L∶10D條件下的養(yǎng)蟲(chóng)室飼養(yǎng)，每個(gè)處理重復(fù)3次。48 h后觀察和統(tǒng)計(jì)各處理草地貪夜蛾的死亡情況，用鑷子撥動(dòng)仍不活動(dòng)可判斷死亡。

1.4 RT-qPCR測(cè)定3種殺蟲(chóng)劑處理后草地貪夜蛾P(guān)450基因的表達(dá)量

1.4.1草地貪夜蛾樣品藥劑處理：用蒸餾水包含0.05% (v/v) Triton X-100分別將氯蟲(chóng)苯甲酰胺、甲維鹽和Bt稀釋成其相應(yīng)的LC10濃度，將新鮮玉米葉片在藥液中浸漬15 s后取出，以在蒸餾水包含0.05% (v/v) Triton X-100中浸漬15 s的玉米葉片為對(duì)照，晾干后將其放入培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿放入15頭健康的草地貪夜蛾2齡幼蟲(chóng)。48 h后用離心管收集存活個(gè)體，立即浸入液氮，-80℃冷藏，備用。每個(gè)離心管收集3～5頭試蟲(chóng)為一重復(fù)，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.4.2總RNA的提?。嚎俁NA的提取用Trizol試劑提取，用0.1% DEPC處理的無(wú)菌水清洗3次，加入l mL Trizol，按照Trizol、氯仿、異丙醇三步法提取，將所得總RNA溶解于經(jīng)DEPC處理的水中。經(jīng)檢測(cè)，RNA完整性(RIN)數(shù)值位于6.7～7.6之間，0D260/OD280值在1.85～1.99之間，這些結(jié)果表明RNA的完整性和純度都是較高的，達(dá)到了反轉(zhuǎn)錄的要求。

1.4.3cDNA第1鏈的合成：根據(jù)TaKaRa公司的Recombinant DNase Ⅰ(RNases-Free)使用說(shuō)明書(shū)，在反轉(zhuǎn)錄前進(jìn)行草地貪夜蛾總RNA的基因組DNA的消化反應(yīng)，cDNA 第1鏈的合成按TaKaRa公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒(PrimeScriptTM1st Strand cDNA Synthesis Kit)說(shuō)明進(jìn)行，合成qPCR cDNA模板。

1.4.4基因表達(dá)量測(cè)定：按照Real Master Mix SYBR Green PCR Kit操作說(shuō)明書(shū)對(duì)16個(gè)P450基因進(jìn)行qPCR驗(yàn)證，以GADPH為內(nèi)參基因(de Souza, 2013; do Nascimentoetal., 2015)，16個(gè)P450基因的引物見(jiàn)表1，引物委托深圳華大基因股份有限公司合成。qPCR反應(yīng)體系(20 μL): cDNA 1.0 μL, SYBR Premix Ex TaqTM10 μL，上下游引物(10 μmol/L)各0.4 μL, 50×Rox Reference Dye II 0.4 μL, ddH2O 7.8 μL。 qPCR 反應(yīng)條件: 95℃ 30 s; 95℃ 5 s, 55℃ 30 s, 循環(huán)40次。采用7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用2-ΔΔCt法計(jì)算草地貪夜蛾細(xì)胞色素P450基因的相對(duì)表達(dá)量(Pfaffl, 2001)。

表1 草地貪夜蛾P(guān)450基因和內(nèi)參基因qPCR引物Table 1 Primer pairs used for qPCR analysis of cytochrome P450 genes anda candidate housekeeping gene in Spodoptera frugiperda

1.5 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用Excel 2010軟件和SPSS 19.0(SPSS Inc., Chicago, IL)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和統(tǒng)計(jì)分析，其中各處理的校正死亡率采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后通過(guò)probit analysis計(jì)算各殺蟲(chóng)劑對(duì)草地貪夜蛾的亞致死劑量，采用Student氏t檢驗(yàn)法對(duì)P450基因表達(dá)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 3種殺蟲(chóng)劑對(duì)草地貪夜蛾2齡幼蟲(chóng)的毒力

氯蟲(chóng)苯甲酰胺、甲維鹽和Bt對(duì)草地貪夜蛾2齡幼蟲(chóng)的致死中濃度(LC50)分別為2.087, 0.602和2 185.365 mg/L，對(duì)草地貪夜蛾2齡幼蟲(chóng)的LC10分別為0.931, 0.283和1 089.688 mg/L(表2)。

表2 氯蟲(chóng)苯甲酰胺、甲維鹽和蘇云金桿菌(Bt)對(duì)草地貪夜蛾2齡幼蟲(chóng)的毒力Table 2 Toxicity of chlorantraniliprole, emamectin benzoate and Bacillus thuringiensisagainst the 2nd instar larvae of Spodoptera frugiperda

幼蟲(chóng)平均體重為9.58 mg/頭；采用葉片浸漬法處理幼蟲(chóng)，處理后48 h時(shí)測(cè)定毒力。Average larval weight was 9.58 mg per larva. The larvae were treated by leaf-dipping method, and the toxicity was determined at 48 h post treatment.

2.2 殺蟲(chóng)劑對(duì)草地貪夜蛾2齡幼蟲(chóng)P450基因表達(dá)影響

首先根據(jù)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并通過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，以確定PCR擴(kuò)增條帶與目的條帶大小一致，且只出現(xiàn)一條帶，表明無(wú)引物二聚體情況出現(xiàn)，無(wú)非特異性擴(kuò)增，符合熒光定量PCR的條件。選擇草地貪夜蛾2齡幼蟲(chóng)樣品提取總RNA，以反轉(zhuǎn)錄所得的cDNA為模板按一定比例進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)瑑?nèi)參基因GAPDH和16個(gè)P450基因分別按不同濃度模板進(jìn)行qPCR。結(jié)果表明，草地貪夜蛾內(nèi)參基因GAPDH以及16個(gè)P450 基因的擴(kuò)增效率具有一致性(表1)。

用LC10氯蟲(chóng)苯甲酰胺處理草地貪夜蛾2齡幼蟲(chóng)48 h后，16個(gè)P450基因，即CYP4G75,CYP6AB12,CYP6AN4,CYP6B50,CYP321A7,CY321A8,CYP321A9,CYP321A10,CYP321B1,CYP337B5,CYP9A60,CYP9A59,CYP9A58,CYP6AE44,CYP6AE43及CYP340L1的表達(dá)水平分別為對(duì)照的3.58, 2.78, 0.83, 4.93, 8.85, 5.71, 15.30, 5.48, 8.55, 5.43, 0.60, 5.16, 3.65, 34.60, 3.52及0.43倍(圖1)；除了CYP6AN4表達(dá)不受氯蟲(chóng)苯甲酰胺影響以及CYP9A60和CYP340L1表達(dá)下調(diào)外，其余13個(gè)P450基因表達(dá)均顯著上調(diào)，其中CYP6AE44能被氯蟲(chóng)苯甲酰胺誘導(dǎo)最大值，為對(duì)照的34.60倍。

圖1 亞致死劑量(LC10)氯蟲(chóng)苯甲酰胺對(duì)草地貪夜蛾2齡幼蟲(chóng)P450基因表達(dá)的影響Fig. 1 Effect of chlorantraniliprole at the sublethal dose (LC10) on the expression of P450 genesin the 2nd instar larvae of Spodoptera frugiperda用LC10濃度(見(jiàn)表2)農(nóng)藥采用浸漬法處理2齡幼蟲(chóng), 48 h后檢測(cè)基因表達(dá)量。圖中數(shù)據(jù)為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差；星號(hào)表示處理與對(duì)照(0.05% Triton X-100)間經(jīng)Student氏t檢驗(yàn)在0.05水平差異顯著。The 2nd instar larvae were treated with pesticides at the LC10 concentration (as shown in Table 2) by leaf-dipping method, and the gene expression level was determined at 48 h post treatment. Data are mean±SD. The asterisk indicates significant difference between the treatment and the control (0.05% Triton X-100) at the 0.05 level by Student’s t-test. 圖2和3同The same for Figs. 2 and 3.

用LC10甲維鹽處理草地貪夜蛾2齡幼蟲(chóng)48 h后，16個(gè)P450基因，即CYP4G75,CYP6AB12,CYP6AN4,CYP6B50,CYP321A7,CY321A8,CYP321A9,CYP321A10,CYP321B1,CYP337B5,CYP9A60,CYP9A59,CYP9A58,CYP6AE44,CYP6AE43及CYP340L1的表達(dá)水平分別為對(duì)照的6.15, 2.13, 0.97, 1.28, 3.76, 8.58, 24.00, 3.41, 28.70, 5.41, 0.64, 0.80, 1.85, 8.71, 1.62及0.76倍(圖2)；除了CYP6AN4,CYP6B50,CYP9A60,CYP9A59及CYP340L1表達(dá)不受甲維鹽影響外，其余11個(gè)P450基因表達(dá)均顯著上調(diào)，其中CYP321B1能被甲維鹽誘導(dǎo)出最大值，為對(duì)照的28.70倍。

用LC10Bt處理草地貪夜蛾2齡幼蟲(chóng)48 h后，16個(gè)P450基因，即CYP4G75,CYP6AB12,CYP6AN4,CYP6B50,CYP321A7,CY321A8,CYP321A9,CYP321A10,CYP321B1,CYP337B5,CYP9A60,CYP9A59,CYP9A58,CYP6AE44,CYP6AE43及CYP340L1表達(dá)水平分別為對(duì)照的4.37, 2.87, 2.52, 0.31, 3.55, 15.30, 18.50, 5.53, 36.20, 19.60, 0.69, 1.18, 0.62, 40.80, 5.58及0.94倍(圖3)；除了CYP9A60,CYP9A59及CYP340L1表達(dá)不受Bt 影響以及CYP6B50和CYP9A58表達(dá)下調(diào)外， 其余11個(gè)P450基因表達(dá)均顯著上調(diào)，其中CYP6AE44能被Bt誘導(dǎo)最大值，為對(duì)照的40.80倍。

圖2 亞致死劑量(LC10)甲維鹽對(duì)草地貪夜蛾2齡幼蟲(chóng)P450基因表達(dá)的影響Fig. 2 Effect of emamectin benzoate at the sublethal dose (LC10) on the expressionof P450 genes in the 2nd instar larvae of Spodoptera frugiperda

圖3 亞致死劑量(LC10)蘇云金桿菌(Bt)對(duì)草地貪夜蛾2齡幼蟲(chóng)P450基因表達(dá)的影響Fig. 3 Effect of Bacillus thuringiensis (Bt) at the sublethal dose (LC10) on the expressionof P450 genes in the 2nd instar larvae of Spodoptera frugiperda

3 討論

氯蟲(chóng)苯甲酰胺、甲維鹽和Bt是廣泛用于草地貪夜蛾防治的主要有效藥劑(陳利民等, 2019; 王勇慶等, 2019)，但隨著這些藥劑的大量使用，部分地區(qū)草地貪夜蛾已對(duì)其產(chǎn)生一定的抗性(Burtetetal., 2017; Gutiérrez-Morenoetal., 2018)。研究表明，細(xì)胞色素P450在草地貪夜蛾抗藥性中發(fā)揮著重要作用，P450誘導(dǎo)表達(dá)譜測(cè)定發(fā)現(xiàn)CYP6B, CYP321A和CYP9A等亞家族的多個(gè)基因被殺蟲(chóng)劑誘導(dǎo)表達(dá)，推測(cè)一些基因可能參與草地貪夜蛾對(duì)有毒物質(zhì)的代謝(Giraudoetal., 2015)。亞致死劑量下的殺蟲(chóng)劑對(duì)害蟲(chóng)產(chǎn)生一定的刺激效應(yīng)，有助于害蟲(chóng)抗藥性的發(fā)生。因此，為了進(jìn)一步明確草地貪夜蛾P(guān)450基因能否被推薦的某些殺蟲(chóng)劑誘導(dǎo)，我們測(cè)定了亞致死劑量下的殺蟲(chóng)劑對(duì)草地貪夜蛾P(guān)450基因表達(dá)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)草地貪夜蛾響應(yīng)氯蟲(chóng)苯甲酰胺、甲維鹽和Bt脅迫上調(diào)的P450基因分別為CYP3家族和CYP4家族基因(Feyereisen, 2006)，這些家族基因被認(rèn)為與害蟲(chóng)抗藥性最相關(guān)(Lietal., 2018)。王學(xué)貴等(2015)研究結(jié)果顯示，當(dāng)用氯蟲(chóng)苯甲酰胺處理甜菜夜蛾Spodopteraexigua后，P450基因的過(guò)量表達(dá)可能參與甜菜夜蛾對(duì)氯蟲(chóng)苯甲酰胺的抗性。戴瀚洋等(2015)發(fā)現(xiàn)亞致死劑量甲維鹽誘導(dǎo)甜菜夜蛾S.exigua時(shí)，甜菜夜蛾的P450基因及其他解毒酶基因響應(yīng)殺蟲(chóng)劑脅迫上調(diào)表達(dá)。我們的測(cè)定結(jié)果亦是如此，13個(gè)P450基因，即CYP4G75,CYP6AB12,CYP6B50,CYP321A7,CY321A8,CYP321A9,CYP321A10,CYP321B1,CYP337B5,CYP9A59,CYP9A58,CYP6AE44及CYP6AE43均能被氯蟲(chóng)苯甲酰胺顯著誘導(dǎo)，而CYP6AN4,CYP9A60及CYP340L1不能被誘導(dǎo)；11個(gè)P450基因，即CYP4G75,CYP6AB12,CYP321A7,CY321A8,CYP321A9,CYP321A10,CYP321B1,CYP337B5,CYP9A58,CYP6AE44及CYP6AE43能被甲維鹽顯著誘導(dǎo)，而CYP6AN4,CYP6B50,CYP9A60,CYP9A59及CYP340L1表達(dá)不受甲維鹽影響；11個(gè)P450基因，即CYP4G75,CYP6AB12,CYP6AN4,CYP321A7,CY321A8,CYP321A9,CYP321A10,CYP321B1,CYP337B5,CYP6AE44及CYP6AE43能被Bt顯著誘導(dǎo)，而CYP9A60,CYP9A59,CYP340L1,CYP6B50及CYP9A58不能被Bt誘導(dǎo)。其中10個(gè)P450基因，即CYP4G75,CYP6AB12,CYP321A7,CY321A8,CYP321A9,CYP321A10,CYP321B1,CYP337B5,CYP6AE44及CYP6AE43能夠被3種殺蟲(chóng)劑同時(shí)誘導(dǎo)，推測(cè)其可能是廣譜性的P450基因，具有響應(yīng)殺蟲(chóng)劑的多重選擇壓力的功能。而CYP6B50和CYP9A59只能被氯蟲(chóng)苯甲酰胺誘導(dǎo)；CYP6AN4只能被Bt誘導(dǎo)；推測(cè)其可能是專(zhuān)一性的P450基因。不同P450基因成員的底物不同，但它們之間可能存在重疊以適應(yīng)環(huán)境的變化，多個(gè)P450基因表達(dá)響應(yīng)殺蟲(chóng)劑等外源化合物誘導(dǎo)的同時(shí)均有可能用于響應(yīng)殺蟲(chóng)劑的選擇壓力，表現(xiàn)出進(jìn)化的可塑性(邱星輝, 2014)。此外，P450基因表達(dá)的可誘導(dǎo)性是代謝抗性產(chǎn)生的重要方式(陳秋霞, 2001; 張百重等, 2018; 朱英慧, 2018)。而Giraudo等(2015)研究表明，草地貪夜蛾CYP6B, CYP321A和CYP9A亞家族基因能被植物化學(xué)品誘導(dǎo)，只有少量P450基因能被殺蟲(chóng)劑誘導(dǎo)，這部分P450基因大多屬于CYP9A家族基因, 藥劑種類(lèi)、處理劑量、P450的專(zhuān)一性和普遍性、基因表達(dá)檢測(cè)方法可能是造成結(jié)果不一致的重要因素，但具體原因需進(jìn)一步研究。

氯蟲(chóng)苯甲酰胺、甲維鹽和Bt作為目前防治玉米田鱗翅目害蟲(chóng)的主要有效藥劑。因此，本研究闡述了亞致死劑量氯蟲(chóng)苯甲酰胺、甲維鹽和Bt對(duì)草地貪夜蛾P(guān)450基因表達(dá)的影響，揭示草地貪夜蛾P(guān)450基因表達(dá)在殺蟲(chóng)劑脅迫下的可誘導(dǎo)性，為P450解毒酶參與害蟲(chóng)抗藥性形成的機(jī)制提供基礎(chǔ)資料。但受3種殺蟲(chóng)劑誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)的P450基因能否對(duì)殺蟲(chóng)劑代謝解毒，還需結(jié)合單一的P450蛋白異源表達(dá)和體外代謝及RNAi等方法進(jìn)一步驗(yàn)證其功能。