董淑蕓　張世洋

[摘要]目的?探討羊胎盤凍干粉片對小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法?將200只KM小鼠隨機分為5個免疫組，每個免疫群組40只。設羊胎盤凍干粉片低、中、高劑量組分別為[0.3、0.6、1.8g/（kg·BW）]和陰性對照組，每組10只動物。 按0.2 ml/100g的體積經(jīng)口給予小鼠灌胃，每天灌胃1次，連續(xù)灌胃30天后，進行各項免疫指標的測定。 結(jié)果?羊胎盤凍干粉片劑量組與陰性對照組比較能促進小鼠脾淋巴細胞增殖、轉(zhuǎn)化作用（P<0.05），促進小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應（P<0.05），促進小鼠的抗體生成細胞增加及提高小鼠的血清溶血素水平（P<0.05），增強小鼠的單核-巨噬細胞吞噬能力（P<0.05），對小鼠NK細胞活性則無明顯影響（P>0.05）。結(jié)論 羊胎盤凍干粉片具有增強小鼠免疫力功能的作用。

[關鍵詞]?羊胎盤凍干粉;枸杞子提取物;維生素C;小鼠;免疫、NK

羊胎盤是由羊的子宮粘膜和尿囊絨毛膜發(fā)生聯(lián)系所形成，它是在母羊孕育胎兒時，胎兒血液和母體進行養(yǎng)分交換的組織。胎盤中含有多種活性物質(zhì)以及豐富的營養(yǎng)成分[1]。徐桂花[2-3]等對羊胎盤進行化學成分分離提取后進行定量分析發(fā)現(xiàn)，羊胎盤中具有高含量的谷氨酸，約占氨基酸總量的16.07%，精氨酸約占氨基酸總量的13.988%?除谷氨酸，精氨酸外，還含有14種常見氨基酸，其中8種為必需氨基酸，約占氨基酸總量的33.50%。文獻論證[4-5]谷氨酸，精氨酸可有效的促進細胞免疫功能，體液免疫功能.

枸杞子甘，性平。主要歸肝、腎、肺經(jīng)。為滋陰助陽，益精補血之良藥。其化學成分主要含胡蘿卜素、硫胺素、核黃素、煙酸、抗壞血酸、β-谷甾醇、及微量元素等?，F(xiàn)代醫(yī)學通過大量藥理實驗和臨床實驗明，枸杞其主要活性成份枸杞多糖（Lycicum barbarum polysaccbarides，LBP）具有顯著增強免疫功能[6-7]、保肝功能，抗衰老功能及抗疲勞等藥理作用[8]。

維生素 C（Vitamin C ，Ascorbic Acid）又叫 L-抗壞血酸，是人體必需的微量營養(yǎng)元素之一，它具有抗氧化、參與合成膠原蛋白、治療和預防壞血病、預防動脈硬化、治療貧血、防癌等多種生理學功能。除此之外，維生素C還能促進機體內(nèi)抗體的形成，提高白細胞的吞噬能力和對疾病的抵抗力以及對寒冷的耐受力，從而增強機體的免疫功能[9-10]。

本實驗通過灌胃小鼠方式，觀察羊胎盤凍干粉片對小鼠免疫調(diào)節(jié)作用。羊胎盤凍干粉片由羊胎盤凍干粉、枸杞子提取物和維生素C原料制成。

材料與方法

1.1 受試物?實驗室自制，以羊胎盤凍干粉、枸杞子提取物、維生素C原料制成。每片含羊胎盤凍干粉片250mg、枸杞子提取物30mg、維生素C?10mg，規(guī)格0.6g/片。推薦成人每日口服6片。

1.2 動物?采用健康清潔級KM種小鼠200只，雄性，體重18～22g，SPF級，廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供。

1.3 主要儀器與試劑?酶標儀、電子分析天平、二氧化碳培養(yǎng)箱、半自動生化分析儀、顯微鏡等。MTT、RPMI1640培養(yǎng)液、、綿羊紅細胞、等。

1.4分組及劑量?先將動物隨機分組，每40只小鼠為1個免疫組，共5個免疫組。每個免疫群組設羊胎盤凍干粉片低、中、高劑量組分別為[0.3、0.6、1.8g/（kg·BW）]和陰性對照組，每組10只小鼠。動物灌胃按0.2ml/100g體積給予，對照組給予等體積純水。每天灌胃1次，連續(xù)灌胃30d。

1.5 實驗方法 采用MTT法檢測ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力和耳腫脹法檢測遲發(fā)型變態(tài)反應兩項細胞免疫功能檢測;采用Jerne改良玻片法檢測抗體生成細胞數(shù)和血凝法檢測血清溶血素水平兩項體液免疫功能檢測;采用小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗（半體內(nèi)法）和小鼠碳廓清實驗兩項單核-巨噬細胞吞噬功能檢測;NK細胞活性檢測采用乳酸脫氫酶測定法。

1.6 統(tǒng)計學方法?采用SPSS 17.0 統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行方差分析，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 受試物對小鼠體重和臟器/體重比值的影響?受試物各劑量組的小鼠末期體重、體重增重、胸腺/體重及脾臟/體重比值與陰性對照組間比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），提示受試物對小鼠的體重增長和免疫器官重量無明顯影響。

2.2 受試物對小鼠細胞免疫的影響 小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力實驗中，中劑量組的增殖能力[（Dλ）差值]與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。遲發(fā)型變態(tài)反應實驗中，中、高劑量組的左右耳片重量差值與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表1）。

2.3 受試物對小鼠體液免疫的影響?抗體生成細胞數(shù)檢測中，中、高劑量組的溶血空斑數(shù)與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。血清溶血素水平檢測中，中、高劑量組的溶血素抗體積數(shù)與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學意（P<0.05）。（表1）

2.4 受試物對小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能的影響?吞噬雞紅細胞實驗中，各劑量組小鼠的腹腔巨噬細胞對雞紅細胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)均高于陰性對照組，其中高劑量組的吞噬百分率和吞噬指數(shù)與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。小鼠碳廓清實驗中，低、中劑量組的碳廓清吞噬指數(shù)與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05，P<0.01）（表2）。

2.5 受試物對小鼠 NK 細胞活性的影響?受試物各劑量組的NK細胞活性高于陰性對照組，但差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（表2）。

3討論

本實驗結(jié)果顯示，羊胎盤凍干粉片劑量組與陰性對照組比較能促進小鼠脾淋巴細胞增殖、轉(zhuǎn)化作用（P<0.05），促進小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應（P<0.05），促進小鼠的抗體生成細胞增加及提高小鼠的血清溶血素水平（P<0.05），增強小鼠的單核-巨噬細胞吞噬能力（P<0.05），對小鼠NK細胞活性則無明顯影響（P>0.05）。表明羊胎盤凍干粉片具有增強小鼠免疫力的作用。

引用文獻：

廖俊，應孟周.羊胎盤的研究進展及其開發(fā)應用.吉林農(nóng)業(yè).2014年，第3期：60

徐桂花.羊胎盤全粉的開發(fā)與研究.甘肅畜牧獸醫(yī)，2000（3）：16-17

陸暉，閆曉梅，張雙全.羊胎盤活細胞素微量元素和氨基酸組成的分析.南京師大學報（自然科學版）2001 年第 24 卷第 1 期：79-82

李玉慶 張小平 程愛國.精氨酸的免疫調(diào)理作用.中國煤炭工業(yè)醫(yī)學雜志 2007年2月第 1O卷第 2期：121-122

趙保路，張標.專利號：CN201611034280.3. 2017年2月22號：1-7

段文杰.枸杞子的藥理作用及價值.?黑龍江醫(yī)藥.2013年，26（6）：127-128

宋憲銘 ，賈 寧。枸杞多糖對小鼠免疫功能響的研究。甘肅奇牧獸醫(yī) 2011年 6（總 221）期：5-7

8.蔣萬志 ，張洪泉.枸杞多糖在免疫和抗衰老方面的研究進展. 中國野生植 第 29卷第 2期2010年 4月：5-7

9..孫秀川.維生素 C 對機體免疫功能的影響.內(nèi)蒙古醫(yī)學雜志.2014年，46（2）：174-176

10.維生素C對小鼠免疫功能的影響.右江名族醫(yī)學院學報.1990年3月，12（1）：1-3