郭麗蓉 徐松 吳銀雙 李娜

[摘要]目的 建立測(cè)定酚氨咖敏顆粒中四種有效成分溶出的方法。方法 溶出試驗(yàn)采用槳法，轉(zhuǎn)速為50 r/min，溶出介質(zhì)體積為900 ml，選取0.1N鹽酸、pH6.8磷酸鹽緩沖液、水及pH4.0醋酸鹽緩沖液為溶出介質(zhì)。結(jié)果 咖啡因、對(duì)乙酰氨基酚、馬來(lái)酸氯苯那敏及氨基比林等四種有效成分在1 h內(nèi)均能溶出標(biāo)示量的85%以上。結(jié)論 本研究為酚氨咖敏顆粒的體外溶出曲線一致性評(píng)價(jià)提供了試驗(yàn)依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]對(duì)乙酰氨基酚;氨基比林;咖啡因;馬來(lái)酸氯苯那敏;溶出曲線

[中圖分類號(hào)] R973.2? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2020）5（b）-0015-06

Study on the dissolution of four effective components in Paracetamol， Aminophenazone Phenacetin， Caffeine and Chlorphenamine Maleate Granules

GUO Li-rong? ?XU Song? ?WU Yin-shuang? ?LI Na

Yunnan Institute of Materia Medica， Yunnan Baiyao Group Innovation and R & D Center， Yunnan Province Company Key Laboratory for Traditional Chinese Medicine and Ethnic Drug of New Drug Creation， Kunming? ?650111， China

[Abstract] Objective To establish a method for the dissolution of four effective components in Paracetamol， Aminophenazone Phenacetin， Caffeine and Chlorphenamine Maleate Granules. Methods The paddle method was adopted， the rotation rate was 50 r/min， and the volume of dissolution mediums was 900 ml. Hydrochloric acid solution （0.1N）， phosphate buffer （pH=6.8）， water and acetic acid-sodium acetate buffer solution （pH=4.0） were adopted as dissolution mediums. Results The dissolution of Caffeine， Paracetamol， Chlorpheniramine Maleate and Aminopyrine were all above 85% of the labelled quantity in 1 h. Conclusion The study provides the experimental basis for the consistency evaluation of the dissolution curves of Paracetamol， Aminophenazone Phenacetin， Caffeine and Chlorphenamine Maleate Granules in vitro.

[Key words] Paracetamol; Aminopyrine; Caffeine; Chlorphenamine Maleate; Dissolution curve

目前酚氨咖敏顆粒的國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]采用高效液相色譜法，用2種色譜條件對(duì)氨基比林、咖啡因及馬來(lái)酸氯苯那敏等三個(gè)組分的含量進(jìn)行測(cè)定，未收載對(duì)乙酰氨基酚的含量控制方法。且該品種為口服固體制劑，溶出度是制劑評(píng)價(jià)的重點(diǎn)項(xiàng)目，體外溶出度試驗(yàn)是評(píng)價(jià)口服固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的一種重要方法[2]，尤其是多種pH溶出介質(zhì)中的溶出行為，不僅可反映仿制制劑內(nèi)在品質(zhì)是否一致，還可提高藥物生物等效性試驗(yàn)的成功率[3-7]。建立有區(qū)分力的溶出曲線可以在一定程度上比較不同制劑的差別，評(píng)價(jià)藥品的質(zhì)量[8-9]。故本研究根據(jù)國(guó)家頒布的相關(guān)指導(dǎo)原則規(guī)定，建立四組分的含量測(cè)定方法及溶出曲線測(cè)定方法，探索酚氨咖敏顆粒中四種有效成分的溶出情況，為仿制制劑的生產(chǎn)工藝和內(nèi)在質(zhì)量提升研究提供參考及思路[10]。

1儀器與試藥

1.1儀器

Waters 2695高效液相色譜儀（美國(guó) Waters）;Waters 2998 PDA二極管陣列檢測(cè)器（美國(guó) Waters）;Waters XTERRA MS C18（4.6×250 mm，5 μm）;Agilent 1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫）;Agilent DAD二極管陣列檢測(cè)器（美國(guó)安捷倫）;Agilet ZORBAX XDB C18（4.6×250 mm，5 μm）。

1.2試藥

酚氨咖敏顆粒（H5321827，批號(hào)190701、190702、190703）;對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品（100018-20161，中國(guó)食品藥品檢定研究院）;氨基比林對(duì)照品（10053-201302，中國(guó)食品藥品檢定研究院）;咖啡因?qū)φ掌罚?71215-201512，中國(guó)食品藥品檢定研究院）;馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品（100047-201507，中國(guó)食品藥品檢定研究院）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

2.1.1氨基比林、對(duì)乙酰氨基酚及咖啡因檢測(cè)的色譜條件

色譜柱為Waters XTERRA MS C18（4.6×250 mm，5 μm）;流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水（35∶5∶60）;流速為1.0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為273 nm。

2.1.2馬來(lái)酸氯苯那敏檢測(cè)的色譜條件

色譜柱為Agilet ZORBAX XDB C18（4.6×250 mm， 5 μm）;流動(dòng)相為乙腈-0.3%十二烷基磺酸鈉溶液-磷酸=60∶40∶0.02（用三乙胺調(diào)pH到3.3）;流速為1.0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為215 nm。

2.2方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1氨基比林、對(duì)乙酰氨基酚及咖啡因含量方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1.1專屬性? 取流動(dòng)相作為空白對(duì)照溶液;按處方比例稱取各輔料，加流動(dòng)相溶解，制成空白輔料溶液;酚氨咖敏顆粒研細(xì)，取細(xì)粉300.17 mg（約相當(dāng)于氨基比林10 mg），加入流動(dòng)相25 ml，稱定重量，超聲處理30 min，放置至室溫，用流動(dòng)相補(bǔ)足重量，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5 ml，置50 ml量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，過(guò)0.45 μm濾膜，作為供試品溶液。

取上述各溶液10 μl，采用高效液相色譜法檢測(cè)，結(jié)果見圖1～3，提示該方法專屬性良好。

2.2.1.2精密度? 精密移取三種對(duì)照品溶液各5 ml，置于50 ml量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，得混標(biāo)溶液。取混標(biāo)溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算峰面積的RSD值。結(jié)果提示，對(duì)乙酰氨基酚峰面積的RSD為0.31%，咖啡因峰面積的RSD為0.48%，氨基比林峰面積的RSD為0.49%，符合驗(yàn)證要求（RSD≤1.0%），提示該方法精密度良好。

2.2.1.3重復(fù)性? 平行制備6份供試品溶液，各進(jìn)樣10 μl，計(jì)算各成份峰面積RSD值。結(jié)果提示，對(duì)乙酰氨基酚峰面積的RSD為1.51%，咖啡因峰面積RSD為1.51%，氨基比林峰面積的RSD為1.51%，重復(fù)性符合驗(yàn)證要求（RSD≤2.0%）。

2.2.1.4線性? 精密稱取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品60.45 mg、咖啡因?qū)φ掌?2.51 mg和氨基比林對(duì)照品40.28 mg，置于100 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解定容至刻度，作為混標(biāo)儲(chǔ)備液。分別精密量取混標(biāo)儲(chǔ)備液0.5、1、2、5、6、8 ml于50 ml量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，各進(jìn)樣10 μl，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制線性關(guān)系圖，結(jié)果見圖4～6。結(jié)果提示，對(duì)乙酰氨基酚濃度在6.04～96.72 μg/ml內(nèi)，咖啡因濃度在1.25～20.02 μg/ml內(nèi)，氨基比林濃度在4.03～64.45 μg/ml內(nèi)，線性符合驗(yàn)證要求（r≥0.998）。

2.2.1.5回收率? 分別精密量取混標(biāo)儲(chǔ)備液4、5、6 ml于50 ml容量瓶中，各加入空白輔料溶液5 ml，最后加流動(dòng)相定容至刻度。平行制備3份，各進(jìn)樣10 μl，計(jì)算9份樣品回收率的RSD，結(jié)果見表1，結(jié)果提示，該方法回收率良好。

2.2馬來(lái)酸氯苯那敏含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1專屬性

取酚氨咖敏顆粒約1 g于三角瓶中，加50 ml流動(dòng)相后稱重，超聲處理10 min，放置至室溫，稱重，用流動(dòng)相補(bǔ)足損失，過(guò)0.22 μm濾膜，取續(xù)濾液，進(jìn)樣20 μl，記錄色譜圖（圖7），結(jié)果提示，方法專屬性良好。

2.2.2精密度

取同一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，峰面積RSD為0.32%，提示該方法精密度良好。

2.2.3重復(fù)性

平行制備6份供試品溶液，各進(jìn)樣10 μl，記錄峰面積。結(jié)果顯示，峰面積的RSD為0.75%，提示該方法的重復(fù)性良好。

2.2.4線性

精密稱取馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成濃度約為0.21 mg/ml的線性儲(chǔ)備溶液。取線性儲(chǔ)備液，逐級(jí)稀釋制成濃度為21.24、8.50、4.25、2.12和0.85 μg/ml的線性溶液。

取上述線性儲(chǔ)備液和線性溶液，各進(jìn)樣10 μl，記錄峰面積。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制線性關(guān)系圖，結(jié)果見圖8，提示馬來(lái)酸氯苯那敏在濃度0.85～21.24 μg/ml內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.2.5回收率

按處方比例加入各輔料，配制成空白輔料儲(chǔ)備液。精密稱取馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成濃度為0.1951 mg/ml的馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品溶液;分別取馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品溶液0.8、1.0及1.2 ml各3份于10 ml量瓶中，然后分別加入空白輔料儲(chǔ)備液各5 ml，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣檢測(cè)，記錄峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2，提示該方法回收率良好。

2.3四種主成分溶出研究

2.3.1試驗(yàn)條件

根據(jù)2015年版《中國(guó)藥典》[11]及《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》分別配制溶出介質(zhì)。介質(zhì)體積為900 ml，37℃采用槳法，轉(zhuǎn)速50 r/min，每次取樣10 ml后補(bǔ)充相應(yīng)的介質(zhì)10 ml，取樣時(shí)間為5、10、15、20、30、45及60 min。樣品經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾后，采用高效液相色譜法檢測(cè)，按照公式計(jì)算累積溶出度。

2.3.2溶出結(jié)果

2.3.2.1酚氨咖敏顆粒中對(duì)乙酰氨基酚在四種介質(zhì)中的溶出情況? 酚氨咖敏顆粒中對(duì)乙酰氨基酚在四種介質(zhì)中的溶出曲線見圖9～12。

2.3.2.2酚氨咖敏顆粒中氨基比林在四種介質(zhì)中的溶出情況? 酚氨咖敏顆粒中氨基比林在四種介質(zhì)中的溶出曲線見圖13～16。