魏舒婷 劉元乾 黃堅 盛云華 唐黎明

摘要 吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸的干燥近成熟果實(shí)，主要含有的化學(xué)成分有生物堿、苦味素、揮發(fā)油和黃酮類成分，其中生物堿為其主要活性成分。吳茱萸藥理作用較為廣泛，臨床上主要功效為止痛，止嘔。藥典記載吳茱萸有小毒，動物試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，大劑量給予吳茱萸水煎液能造成實(shí)驗(yàn)動物明顯肝損傷，其機(jī)制可能與過氧化損傷、炎性反應(yīng)因子介導(dǎo)、線粒體損傷、藥物-蛋白質(zhì)加合物的形成等相關(guān)。本文通過對近年來國內(nèi)外與吳茱萸相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行整理分析，概述了吳茱萸化學(xué)成分、藥理作用和肝毒性及其機(jī)制的研究進(jìn)展，為深入研究吳茱萸的藥理作用機(jī)制、肝毒性物質(zhì)及致毒機(jī)制，指導(dǎo)臨床合理用藥提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞 吳茱萸;化學(xué)成分;藥理作用;作用機(jī)制;肝毒性;臨床不良反應(yīng);致毒機(jī)制;研究進(jìn)展

Research Progress of Chemical component，Medicinal Efficacy and Liver Toxicity of Fructus Evodiae

WEI Shuting1，2，LIU Yuanqian2，HUANG Jian2，SHENG Yunhua2，TANG Liming2

（1 China State Institute of Pharmaceutical Industry，Shanghai 201203，China; 2 Shanghai Institute of Food and Drug Control，Shanghai 201203，China）

Abstract Fructus Evodiae is the dry and near-mature fruit of the rutaceae plant.Fructus Evodiae，the main chemical components are alkaloids，bitter elements，volatile oil and flavonoids，of which alkaloids are the main active ingredients.Fructus Evodiae has a wide range of pharmacological effects，and the main clinical effects are to relieve pain and prevent vomiting.The Pharmacopoeia recorded that Fructus Evodiae has a small toxicity.Animal experiments have found that large doses of Fructus Evodiae Decoction can cause significant liver damage in experimental animals.The mechanism may be related to peroxide damage，inflammatory response factor-mediated，mitochondrial damage，drug-protein adduct formation etc.This paper reviews and analyzes the literature related to Fructus Evodiae in recent years worldwide，and summarizes the research progress of the chemical composition，pharmacological effects，hepatotoxicity and mechanism of Fructus Evodiae in order to provide the pharmacological action mechanism，hepatotoxic substances and mechanism of liver toxicity，and guidance on clinical rational use of drugs for further study.

Keywords Fructus Evodiae; Chemical composition; Pharmacological effects; Mechanism; Liver toxicity; Clinical adverse reactions; Toxic mechanism; Research progress

中圖分類號：R284;R285文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.23.008

吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth.、石虎Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth.var.officinalis（Dode）Huang或疏毛吳茱萸Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth.var.bodinieri（Dode）Huang的干燥近成熟果實(shí)。歸肝、脾、胃、腎經(jīng)[1]。吳茱萸使用歷史較早，其始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歸屬于本草中品，具有溫中下氣止痛等功效[2]。近代研究表明吳茱萸主要含有生物堿、苦味素、揮發(fā)油和黃酮等成分，其中吳茱萸堿和吳茱萸次堿為其主要活性成分。藥理學(xué)研究證明其有鎮(zhèn)痛抗炎、抗?jié)?、抗腫瘤以及對心血管系統(tǒng)的保護(hù)等作用。隨著吳茱萸在臨床上的廣泛使用，其毒性也逐漸暴露出來?！侗静菥V目》記載吳茱萸：“多食沖眼又脫發(fā)也”“有小毒，動脾火，病目者忌之”等[3]。有關(guān)吳茱萸肝毒性臨床不良反應(yīng)報道和現(xiàn)代研究逐年增多。本文通過對吳茱萸的化學(xué)成分、主要藥理作用、所致肝毒性及其機(jī)制3個方面對吳茱萸研究概況進(jìn)行綜述。

1 化學(xué)成分

1.1 生物堿 生物堿類成分是吳茱萸中含有的主要成分也是指標(biāo)成分，其主要分為吲哚類生物堿、喹諾酮類生物堿。黃小龍等[4]應(yīng)用高效液相色譜-四級桿-飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-Q-TOF-MS/MS）對40余個主要峰進(jìn)行成分分析，最終從吳茱萸甲醇提取物中鑒定了21種生物堿，包括10種吲哚生物堿，10種喹諾酮生物堿，1種麻黃堿。蘇秀麗等[5]采用UPLC-Q-TOF-MS法從吳茱萸80%乙醇提取物甲醇部位中共鑒定出25種成分，其中5-甲氧基-N-甲基色胺為首次從吳茱萸屬植物中發(fā)現(xiàn)，同時還發(fā)現(xiàn)了2種生物堿類新化合物：1-甲基-2-[4-羥基-丁基]-4（1H）-喹諾酮和羥基吳茱萸新堿。

1.2 苦味素 苦味素也是吳茱萸的重要指標(biāo)成分，其主要成分是檸檬苦素類化合物，包括檸檬苦素、12-α-羥基檸檬苦素、6-α-乙酰氧基-5-表檸檬苦素、吳茱萸苦素、吳茱萸內(nèi)酯醇、吳茱萸苦素乙酯、12-α-吳茱萸內(nèi)酯醇、6-β-乙酰氧基-5-表檸檬苦素等[6]。李瓊等[7]在吳茱萸未成熟果實(shí)中分離并鑒定了11個檸檬苦素化合物包括一個新化合物6α-乙酰氧基-12α-羥基吳茱萸內(nèi)酯醇1。

1.3 揮發(fā)油 吳茱萸揮發(fā)油性質(zhì)不穩(wěn)定，且隨吳茱萸產(chǎn)地、成熟度等變化而不同。有報道在疏毛吳茱萸果實(shí)揮發(fā)油中41種化合物，占比例的72.02%，其中占比最多的5種化合物分別為β-攬香烯、石竹烯氧化物、α-杜松油醇、地匙菌烯及芳樟醇，占比分別為10.3%、8.07%、7.13%、4.66%、3.58%[8]。李斐等[9]運(yùn)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定了吳茱萸揮發(fā)油中所含的化學(xué)成分和其相對含量，在揮發(fā)油中共鑒定出48種化合物，占吳茱萸揮發(fā)油含量的93.99%，其中相對含量較高的成分有（Z）-羅勒烯（60.57%）、（E）-羅勒烯（9.11%）、月桂烯（5.94%）等，β-松油烯、里那醇為吳茱萸揮發(fā)油的首次報道化合物。此外，有研究認(rèn)為β-月桂烯、檸檬烯、β-反式-羅勒烯及石竹烯可以作為化學(xué)標(biāo)記性成分，用于區(qū)分和評估不同成熟度的吳茱萸果實(shí)[10]。

1.4 其他成分 吳茱萸中黃酮類成分的含量也較高，劉珊珊[11]從吳茱萸水提物中分離并鑒定出檸檬黃素-3-O-β-D-木糖（1→2）-β-D-葡萄糖苷、檸檬黃素-3-O-[2-O-β-D-木糖-6-O-α-L-鼠李糖]-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素、金絲桃苷、蘆丁等14個黃酮及其苷類化合物。吳茱萸中還含有有機(jī)酸類物質(zhì)，有研究從吳茱萸果實(shí)的水提物中分離鑒定了11個化合物，包括綠原酸，新綠原酸，隱綠原酸，松柏苷，咖啡酸，槲皮素-3-O-α-D-吡喃阿拉伯糖苷等，其中隱綠原酸，松柏苷，槲皮素-3-O-α-D-吡喃阿拉伯糖苷為首次從該屬植物中分離得到[12]。

2 藥理作用

2.1 對心血管系統(tǒng)作用

2.1.1 對心臟的作用 林淑嫻等[13]研究發(fā)現(xiàn)10 mg/L和100 mg/L的吳茱萸總堿能明顯抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大，心肌細(xì)胞表面積和蛋白質(zhì)含量的增加，其保護(hù)心肌細(xì)胞保護(hù)作用可能與增加細(xì)胞一氧化氮（NO）的生成，促進(jìn)絲裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1的表達(dá)以及增加絲裂原活化蛋白激酶去磷酸化有關(guān)。此外，吳茱萸堿還對心肌細(xì)胞缺血具有一定保護(hù)作用。吳青青等[14]發(fā)現(xiàn)1、5、10 μmol/L的吳茱萸堿可增加缺氧24 h后損傷的心肌細(xì)胞的活性，與對照組比較，能明顯減少腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IF-1）和白細(xì)胞介素-6（IF-6）等炎性反應(yīng)因子的轉(zhuǎn)錄，減少細(xì)胞凋亡數(shù)量，其機(jī)制可能是通過增加蛋白激酶B和AMP依賴蛋白激酶α的活性，抑制NF-κB的活性發(fā)揮其心肌保護(hù)作用。

2.1.2 對血管的作用 吳茱萸次堿具有抑制血管生成和擴(kuò)張血管的作用。Ji L等[15]發(fā)現(xiàn)吳茱萸次堿可抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）的活性[IC50=（16.54±2.4）μmol/L]，對HUVEC的遷移和黏附具有顯著的抑制作用，并可在雞胚絨膜尿囊膜上對抗血管生成活性，其機(jī)制與吳茱萸次堿在體外能顯著抑制了血管內(nèi)皮生長因子受體2（VEGFR2）的活性并阻斷了VEGFR2介導(dǎo)的Akt/（mTOR）/p70s6k信號通路有關(guān)。吳茱萸次堿還有擴(kuò)張血管的作用，降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）是最有效的血管舒張物質(zhì)，而吳茱萸次堿能通過刺激CGRP合成和激活TRPV1釋放而表現(xiàn)出血管舒張作用[16]。此作用提示吳茱萸次堿具有開發(fā)成為抗高血壓藥物的潛力。

2.2 抗胃腸道潰瘍 Zhao Z等[17]在吳茱萸堿抗?jié)冏饔玫难芯恐校l(fā)現(xiàn)吳茱萸堿能顯著對抗乙醇誘導(dǎo)的小鼠胃潰瘍，明顯改善胃部病變，防止胃組織氧化損傷、降低前列腺素E2（PGE2），IL-6和TNF-α的水平，提高血清谷胱甘肽（GSH），超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶（CAT）的水平，降低了血清中丙二醛（MDA）的含量，降低了胃組織中髓過氧化物酶（MPO）。其機(jī)制與吳茱萸堿能有效抑制乙醇引起的小鼠Rho，Rho激酶1、Rho激酶2，胞質(zhì)和細(xì)胞核中NF-κBp65的蛋白表達(dá)升高，通過Rho/NF-κB途徑改善抗氧化劑和抗炎狀態(tài)有關(guān)。Shen P等[18]發(fā)現(xiàn)吳茱萸堿對右旋糖酐硫酸鈉（DSS）誘發(fā)的結(jié)腸炎具有潛在的保護(hù)作用，吳茱萸堿處理可改善DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎（UC）小鼠的體質(zhì)量減輕，活動指數(shù)下降，結(jié)腸長度縮短，結(jié)腸病理損傷并提高M(jìn)PO活性，其作用機(jī)制與吳茱萸堿調(diào)節(jié)NF-κB信號和NLRP3炎性小體抑制炎性反應(yīng)，調(diào)節(jié)小帶閉合蛋白1（ZO-1）和閉合蛋白的表達(dá)，促進(jìn)腸道緊密連接結(jié)構(gòu)的完整性，降低脂溶性脂多糖的濃度，重新平衡了大腸桿菌和乳桿菌的水平有關(guān)。此外也有研究表明吳茱萸堿可以逆轉(zhuǎn)壓力引起的胃腸道過度運(yùn)動[19]。

2.3 對生殖系統(tǒng)的作用 Nam EY等[20]研究發(fā)現(xiàn)吳茱萸提取物在體外能劑量依賴性地阻斷4-乙烯基環(huán)己烯二過氧化物（VCD）所致的卵巢細(xì)胞毒性;吳茱萸提取物能顯著激活CHO-K1細(xì)胞中的Akt和下游效應(yīng)因子mTOR、GSK-3β等，表明吳茱萸可能是通過激活A(yù)kt，發(fā)揮對卵巢細(xì)胞的保護(hù)作用。Park E等[21]研究了70%的吳茱萸醇提物（EEER）在體外對良性前列腺增生（BPH）的抑制作用，發(fā)現(xiàn)在BPH-1細(xì)胞中，EEER對5α還原酶有抑制作用，EEER處理可抑制BPH-1細(xì)胞的活力，降低增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、細(xì)胞周期蛋白D1和熒光蛋白ERK1/2的表達(dá)，EEER還能以濃度依賴的方式加劇caspase-8和caspase-3的激活，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，包括染色質(zhì)濃縮、凋亡小體生成和核間DNA斷裂，最終導(dǎo)致PARP的裂解。王嫣等[22]采用寒凝血瘀型痛經(jīng)大鼠模型，通過離體子宮平滑肌實(shí)驗(yàn)，測定大鼠血漿NO、6-Keto-PGF1α含量的改變，結(jié)果發(fā)現(xiàn)吳茱萸水煎液能抑制縮宮素引起的子宮痙攣性收縮并使痛經(jīng)大鼠血漿NO、6-Keto-PGF1α含量均明顯升高。

2.4 鎮(zhèn)痛抗炎作用

2.4.1 鎮(zhèn)痛作用 黃偉[23]用小鼠扭體和熱板試驗(yàn)考察了吳茱萸水提物鎮(zhèn)痛效果，發(fā)現(xiàn)小鼠連續(xù)7 d灌胃給予0.63～2.50 g/kg劑量的吳茱萸水提物能顯著減少小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)和提高熱板痛閾值。蔡卿嫣等[24]發(fā)現(xiàn)吳茱萸乙醇、甲醇和水提取物均能顯著抑制小鼠扭體反應(yīng)及減少福爾馬林致痛小鼠舔足時間，其中乙醇提取物組效果明顯優(yōu)于甲醇提取物和水提取物，且乙醇提取物中吳茱萸堿和吳茱萸次堿的含量高于甲醇提取物和水提取。與已有研究[25]表明的吳茱萸的鎮(zhèn)痛抗炎主要活性成分為吳茱萸堿和吳茱萸次堿結(jié)論一致。在陳洋等[26]研究吳茱萸成分譜與鎮(zhèn)痛藥效之間的關(guān)系，首次發(fā)現(xiàn)吳茱萸中反式咖啡酰葡萄糖的鎮(zhèn)痛作用，同時還發(fā)現(xiàn)吳茱萸中一些黃酮類化合物（蘆丁、金絲桃苷等）也具有一定的鎮(zhèn)痛作用。王婷等[27]發(fā)現(xiàn)吳茱萸乳膏能明顯緩解熱及福爾馬林皮下注射所致小鼠疼痛，其鎮(zhèn)痛機(jī)制可能與降低疼痛部位皮膚中降鈣素基因相關(guān)肽表達(dá)量，從而耗竭并阻斷降鈣素基因相關(guān)肽傳導(dǎo)并協(xié)同抗炎作用有關(guān)。

2.4.2 抗炎作用 吳茱萸的抗炎主要活性成分是吳茱萸次堿[28]。Li Y等[29]在自然免疫條件下構(gòu)建了咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣皮炎小鼠模型，分別用不同濃度的吳茱萸次堿外搽5 d治療后，發(fā)現(xiàn)0.5%、1%的劑量組小鼠表皮厚度與正常小鼠相似，病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)給藥小鼠真皮炎性細(xì)胞浸潤明顯少于模型組，銀屑病樣皮炎性反應(yīng)狀得到顯著改善。進(jìn)一步研究表明吳茱萸次堿通過調(diào)節(jié)NF-κB和TLR7信號來影響pDC和Th17相關(guān)細(xì)胞因子，從而改善咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣皮炎。Li Z[30]在研究吳茱萸次堿對采用盲腸結(jié)扎穿刺法（CLP）手術(shù)建立膿毒癥動物模型的影響中發(fā)現(xiàn)，吳茱萸次堿能顯著提高CLP手術(shù)后小鼠存活率，并改善CLP手術(shù)導(dǎo)致小鼠體質(zhì)量持續(xù)下降。此外，吳茱萸次堿還能顯著減輕膿毒癥誘導(dǎo)的肝損傷和細(xì)菌感染。其作用機(jī)制與吳茱萸次堿能恢復(fù)腹膜常駐巨噬細(xì)胞的比率和CD11b（+）腹膜巨噬細(xì)胞中GATA6的水平，增加腹腔內(nèi)巨噬細(xì)胞數(shù)量，抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激/NF-κB途徑的激活來減輕膿毒癥誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)有關(guān)。

2.5 抗腫瘤作用 現(xiàn)有研究表明吳茱萸堿在體外具有抗舌鱗癌、結(jié)腸癌、肝癌、卵巢癌、膽管癌、腎癌、口腔癌、鼻咽癌、骨肉瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤等多種癌癥的作用。劉美延等[31]將吳茱萸堿聯(lián)合吉西他濱對Cal-27舌鱗癌裸鼠進(jìn)行藥物干預(yù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)吳茱萸堿對皮下移植瘤的生長具有抑制作用（P<0.05）且合用吉西他濱作用更為顯著（P<0.01）。Guo XX等[32]發(fā)現(xiàn)吳茱萸堿顯著誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞在G2/M期的周期阻滯，上調(diào)P53和Bax，下調(diào)Bcl-2、cyclinB1和Cdc2蛋白。此外，吳茱萸堿還降低了細(xì)胞內(nèi)NOD1、p-P65、p-ERK、p-p38和p-JNK的水平。Peng X等[33]在研究中發(fā)現(xiàn)吳茱萸堿能有效抑制HONE1和CNE1細(xì)胞的遷移和侵襲，幾乎不影響細(xì)胞增殖，但在體外顯著抑制細(xì)胞黏附活性。吳茱萸堿還抑制了NF-κBp65的轉(zhuǎn)運(yùn)，這涉及到鼻咽癌細(xì)胞在癌癥侵襲中的表達(dá)調(diào)控。在對吳茱萸堿抗腫瘤作用的眾多研究中發(fā)現(xiàn)其抗腫瘤機(jī)制與抑制細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡以及抑制細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。

2.6 抗氧化作用 甄攀等[34]用硫酸亞鐵和過氧化氫反應(yīng)產(chǎn)生氫氧根離子;用鄰苯三酚自氧化法產(chǎn)生氧離子，發(fā)現(xiàn)吳茱萸正丁醇提取物1、2和乙醚提取物及Vc清除氫氧根離子的IC50分別為145.0、141.0、335.0、2.3 μg/mL;正丁醇提取物2、乙醚提取物及Vc清除氧離子的IC50分別為270.0、0.185、0.057 5 μg/mL，表明3種吳茱萸提取物均有一定的抗氧化作用并呈量效關(guān)系。吳茱萸脂溶性成分清除氧離子的作用非常顯著，與Vc有相似作用。Zhang Y等[35]在研究吳茱萸堿在阿爾茨海默病中的藥理基礎(chǔ)也中發(fā)現(xiàn)吳茱萸堿具有抗氧化作用，能顯著提高細(xì)胞活力，抑制活性氧的積累，改善線粒體功能。

2.7 其他作用 袁樹民等[36]發(fā)現(xiàn)吳茱萸堿能夠顯著改善APPswe/PS△E9癡呆模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力;陳洋等[37]的止嘔實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對照組比較，吳茱萸不同部位提取物除乙酸乙酯部位外，均具有止嘔作用，能顯著減少家鴿的嘔吐次數(shù)，呈一定的劑量依賴關(guān)系。李雯婧等[38]在對吳茱萸揮發(fā)油抑菌活性的研究中發(fā)現(xiàn)吳茱萸揮發(fā)油對空氣中的細(xì)菌和真菌的抑菌率分別為97.86%和99.50%;對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均有抑制作用，對革蘭氏陽性菌的抑制效果較強(qiáng)。

3 肝毒性及其致毒機(jī)制

吳茱萸作為常用的溫里藥，臨床上有較好的治療效果，但吳茱萸的毒性一定程度上制約了其在臨床上更廣泛的應(yīng)用。吳茱萸在臨床不良反應(yīng)較多且受關(guān)注程度較高的是其肝毒性。因此，探明吳茱萸的毒性劑量、致毒機(jī)制有助于更好的指導(dǎo)臨床用藥，更有利于中藥的推廣應(yīng)用。

3.1 臨床不良反應(yīng) 吳茱萸主要有內(nèi)服和外敷2種使用方法，內(nèi)服常用量為2～5 g[1]。臨床上常因內(nèi)服未制透的吳茱萸或生品吳茱萸，或因超劑量服用而產(chǎn)生中毒現(xiàn)象[39]。蔡雪映等報道患者服用含吳茱萸湯劑出現(xiàn)劇烈腹痛、頭痛、暈厥、嘔吐、視物不清、錯覺、胸悶等癥狀。經(jīng)血清毒物分析，該患者血清中含吳茱萸生物堿，且發(fā)現(xiàn)患者所服湯劑中每劑含吳茱萸12 g，為《中華人民共和國藥典》規(guī)定最大用量的2.4倍，推測該不良反應(yīng)為服用吳茱萸過量所致[40]。美國青年男子也因服用含有吳茱萸和千層塔的營養(yǎng)補(bǔ)充劑“white flood”而出現(xiàn)肝毒性[41]，提示吳茱萸能造成肝損傷。臨床上吳茱萸多與其他中藥配伍使用，不當(dāng)?shù)呐湮橐部赡茉斐刹涣挤磻?yīng)及肝損傷。有報道患者服用含有附子和吳茱萸湯劑后，出現(xiàn)唇口發(fā)麻，惡心，手足麻木，繼之運(yùn)動失靈，頻繁嘔吐，心慌，面白肢冷，胸悶煩躁，痛覺減退，心率減慢，血壓下降。原方減去吳茱萸后上述癥狀消失，推測上述中毒癥狀為吳茱萸配伍附子引起[42]。馬銳等[43]也報道有患者口服含補(bǔ)骨脂、吳茱萸的中藥顆粒劑，出現(xiàn)發(fā)熱、惡心、嘔吐等癥狀，肝功能指標(biāo)異常，臨床診斷為中藥顆粒劑致肝臟損害，因補(bǔ)骨脂和吳茱萸使用劑量均在藥典規(guī)定劑量以下，故認(rèn)為該不良反應(yīng)可能為補(bǔ)骨脂配伍吳茱萸所致。

3.2 肝毒性研究 吳茱萸提取物大劑量單次給藥可造成肝臟損傷。大鼠單次灌胃給予吳茱萸70%乙醇提取物60 g（生藥）/kg，可引起大鼠血清轉(zhuǎn)氨酶活性和肝臟指數(shù)增加，病理檢查發(fā)現(xiàn)中央靜脈周圍肝細(xì)胞變性、壞死[44]。祝靚靚等[45]發(fā)現(xiàn)小鼠給予吳茱萸水煎劑60 g/kg以上劑量時，可引起小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶活性和肝組織MDA水平升高，組織病理學(xué)檢查見肝組織腫脹和脂肪變性。重復(fù)給藥試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，大鼠分別灌胃給予16.67、4.98、1.67 g（生藥）/kg的吳茱萸水提取物，連續(xù)給30 d時，血清生化學(xué)檢查即發(fā)現(xiàn)16.67 g（生藥）/kg組大鼠血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、總膽固醇升高，3個劑量組動物肝臟指數(shù)均升高。組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)部分動物肝細(xì)胞胞質(zhì)疏松，肝細(xì)胞灶性壞死;電鏡檢查顯示肝細(xì)胞染色質(zhì)呈現(xiàn)固縮凝聚，線粒有腫脹，肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見大量的脂滴。劉舒凌等[46]研究發(fā)現(xiàn)將小鼠分別給予生吳茱萸組、甘草制吳茱萸組及鹽制吳茱萸3種吳茱萸炮制品，給藥15 d后，每組小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）均顯著提高，說明3種吳茱萸炮制品均可造成肝損傷。周琦等[47]以最大100 g（生藥）/kg劑量的吳茱萸，小鼠連續(xù)灌胃8 d，發(fā)現(xiàn)小鼠血清ALT、AST及肝臟指數(shù)均顯著升高，且成一定量效關(guān)系。孫向明等[48]研究也發(fā)現(xiàn)大鼠分別灌胃給予吳茱萸醇提物12.5 g（生藥）/kg和25 g（生藥）/kg，給藥14 d，檢查發(fā)現(xiàn)大鼠肝臟系數(shù)和血清中ALT、AST均明顯升高，高劑量組毒性反應(yīng)明顯高于低劑量組。病理學(xué)檢查顯示肝細(xì)胞有脂肪變性，炎性細(xì)胞的浸潤和小灶壞死，說明吳茱萸醇提物對大鼠可造成肝臟損傷。尹利順等[49]也有研究發(fā)現(xiàn)吳茱萸揮發(fā)油組分也可造成動物肝損傷，大鼠分別灌胃吳茱萸揮發(fā)油給予0.12、0.06、0.012 mL/kg給藥35 d。檢測顯示大鼠血清中ALT、AST、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TP）均升高，肝臟指數(shù)升高，病理組織檢查發(fā)現(xiàn)0.12 mL/kg組的大鼠肝臟出現(xiàn)，重度濁腫，部分嗜酸性變，并有大的灶性壞死，其余2組肝細(xì)胞呈現(xiàn)水樣、嗜酸性、玻璃樣變性，并有小出血灶、點(diǎn)狀壞死，肝臟間質(zhì)充血，部分細(xì)胞水腫或溶解消失。上述研究表明吳茱萸水提物，醇提物，揮發(fā)油均可造成動物肝損傷，表現(xiàn)為血清ALT，AST水平升高，肝臟組織脂肪變性和壞死。

3.3 肝毒性機(jī)制研究

3.3.1 過氧化損傷 谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）等為體內(nèi)氧化-抗氧化系統(tǒng)的重要參與物質(zhì)。正常情況下，機(jī)體內(nèi)的氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)是處于動態(tài)平衡的。GSH-Px、SOD活性和GSH含量下降以及MDA含量升高均說明機(jī)體內(nèi)自由基增加，機(jī)體氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡。李曉宇等[50]用吳茱萸揮發(fā)油灌胃小鼠連續(xù)7 d。可致血清和肝組織內(nèi)MDA含量增加，SOD活性下降，肝組織及血中GSH含量下降，GSH-Px的活性下降。張晟瑞[51]用3種吳茱萸炮制品水提物灌胃小鼠15 d后，各炮制組與正常組比較均可明顯降低肝組織中SOD的活力，并顯著升高M(jìn)DA含量。周璐等[52]用吳茱萸水煎液連續(xù)灌胃小鼠21 d后，造成小鼠肝損傷，同時檢測發(fā)現(xiàn)給藥小鼠肝組織中丙二醛（MDA）含量升高，SOD/MDA比值顯著下降，谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性明顯下降，且病理形態(tài)學(xué)出現(xiàn)肝細(xì)胞灶性壞死。有研究表明[53]用吳茱萸水提物灌胃小鼠15 d后，小鼠肝組織SOD的活力顯著降低，隨給藥劑量增大，各劑量組SOD水平降低程度增大。因此，吳茱萸的肝毒性與其引起的肝臟氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)，且具有一定量效關(guān)系。

3.3.2 炎性反應(yīng)因子介導(dǎo) 炎性損傷是致肝損傷原因之一。IL-1β、IL-6及TNF-α等均是與炎性反應(yīng)密切相關(guān)的炎性反應(yīng)遞質(zhì)，這些炎性反應(yīng)遞質(zhì)能將炎性反應(yīng)信號進(jìn)一步放大，促進(jìn)肝細(xì)胞凋亡和壞死。劉舒凌等[53]用吳茱萸水提物灌胃小鼠15 d后，發(fā)現(xiàn)小鼠出現(xiàn)一定肝損傷且肝組織中TNF-α、IL-1β水平升高。研究表明生吳茱萸高、中、低劑量組均能顯著升高小鼠肝組織中TNF-α、IL-1β表達(dá)水平（P<0.01）。周璐等[52]用吳茱萸水煎液連續(xù)灌胃小鼠21 d后，TNF-α，IL-1β，IL-6含量顯著升高，且具有一定的量效關(guān)系。另外，Erk 1/2是TGFbeta-Ras-Erk 1/2-Smad以及m TOR信號通路中的關(guān)鍵分子，介導(dǎo)細(xì)胞一系列的應(yīng)答，通過對這2條信號通路的影響，介導(dǎo)細(xì)胞炎性反應(yīng)和細(xì)胞凋亡關(guān)聯(lián)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。廖文強(qiáng)等[54]用吳茱萸水提物和醇提物連續(xù)灌胃小鼠15 d后，發(fā)現(xiàn)吳茱萸水提物和醇提物均可致小鼠肝臟磷酸化Erk 1/2表達(dá)量顯著上調(diào)（P<0.01）。綜上可以看到吳茱萸肝毒性的機(jī)制可能與炎性反應(yīng)因子的產(chǎn)生有關(guān)。

3.3.3 線粒體損傷 線粒體是細(xì)胞生物氧化的主要場所，主要合成三磷酸腺苷（ATP）。ATP作為能量物質(zhì)在細(xì)胞生長、代謝過程中發(fā)揮重要作用。在藥物性肝損傷中，線粒體是藥物毒性作用的重要靶標(biāo)。蔡卿嫣[55]用吳茱萸水提物灌胃大鼠15 d后，檢測顯示肝臟組織中的ATP含量明顯減少，肝臟線粒體膜的通透性增加，并且膜電位降低，進(jìn)而使細(xì)胞中的色素C釋放，肝細(xì)胞的抗氧化能力降低，電鏡觀察顯示大鼠肝臟線粒體出現(xiàn)不同程度的空泡樣變，且部分發(fā)生腫脹。此外，吳茱萸肝毒性機(jī)制可能還與其他亞細(xì)胞器，如染色質(zhì)有關(guān)。李莉等[56]用吳茱萸水提物灌胃大鼠30 d后，組織病理學(xué)檢查顯示肝細(xì)胞胞質(zhì)變得疏松，肝細(xì)胞有一定程度的灶性壞死，染色質(zhì)形態(tài)固縮凝聚，線粒體有腫脹，胞質(zhì)內(nèi)可見大量的脂滴。由此，吳茱萸毒性的機(jī)制可能與肝細(xì)胞中亞細(xì)胞器，特別是線粒體損傷相關(guān)。

3.3.4 藥物-蛋白質(zhì)加合物的形成 人體內(nèi)代謝藥物的主要酶是細(xì)胞色素P450超家族（CYPs）。大多數(shù)藥物在體內(nèi)代謝為非活性代謝產(chǎn)物，而有些藥物通過CYPs的生物活性轉(zhuǎn)化為反應(yīng)性代謝產(chǎn)物（RMs）。RMs可以共價修飾蛋白質(zhì)，在藥物性肝損傷中起重要作用。Zhang FL等[57]在研究中發(fā)現(xiàn)吳茱萸中的吳茱萸次堿的仲胺結(jié)構(gòu)可被CYPs酶活化為活性代謝物，并與大鼠肝細(xì)胞中CYPs和蛋白質(zhì)共價結(jié)合產(chǎn)生藥物-蛋白質(zhì)加合物。且研究發(fā)現(xiàn)吳茱萸次堿能抑制多種類型的CYPs活性，即CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19和CYP2E1，表明在多次氧化反應(yīng)中可以生成不止一種的代謝物?；钚源x物能消耗谷胱甘肽（GSH），進(jìn)而導(dǎo)致活性氧（ROS）過量產(chǎn)生，引起呼吸鏈功能障礙，細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)激，線粒體損傷，細(xì)胞膜損傷，最終致肝細(xì)胞損傷[58]。另據(jù)Zhou SF等[59]認(rèn)為藥物代謝物的選擇性蛋白質(zhì)共價結(jié)合可能導(dǎo)致選擇性器官毒性。藥物-蛋白質(zhì)加合物可能通過損害所修飾蛋白質(zhì)的生理功能或通過免疫介導(dǎo)機(jī)制引起毒性。

以上毒理學(xué)研究表明吳茱萸致毒機(jī)制與過氧化損傷、炎性反應(yīng)因子介導(dǎo)、線粒體損傷有關(guān)，吳茱萸中的生物堿可被CYPs活化為活性代謝物，繼而產(chǎn)生藥物-蛋白質(zhì)加合物，造成肝臟免疫損傷，可能是吳茱萸造成的肝損傷的分子起始事件。

4 展望

吳茱萸化學(xué)成分復(fù)雜，隨著近代分析技術(shù)的逐步提升和進(jìn)步，研究者們在吳茱萸中不斷分離鑒定出新化合物，使得吳茱萸所含的化學(xué)成分譜更加清晰和全面。吳茱萸在臨床上有多種藥效作用，研究人員基于吳茱萸的化學(xué)成分開展了大量的體內(nèi)外藥效研究，除發(fā)現(xiàn)吳茱萸堿和吳茱萸次堿為其主要活性成分外，還發(fā)現(xiàn)了吳茱萸其他成分的藥效活性，為吳茱萸臨床廣泛應(yīng)用提供了理論依據(jù)。但是現(xiàn)有吳茱萸毒性研究尚未能確定吳茱萸的主要毒性成分，有研究認(rèn)為吳茱萸潛在毒性成分可能不唯一，可能存在多種毒性成分[60]。因此，找到吳茱萸的毒性物質(zhì)基礎(chǔ)，并在此基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)吳茱萸的毒性劑量和致毒機(jī)制，有利于進(jìn)一步闡明吳茱萸毒性作用，為臨床安全合理用藥提供必要的指導(dǎo)。

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（2020-11-19收稿 責(zé)任編輯：王明）