張大鵬，楊艷輝

·論著·

LncRNA NR2F2-AS1靶向抑制miR-129-5p調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和凋亡的機(jī)制研究

張大鵬，楊艷輝

453000 河南，新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院神經(jīng)外科（張大鵬）；453600 河南，輝縣市人民醫(yī)院超聲科（楊艷輝）

研究 lncRNA NR2F2-AS1 和 miR-129-5p 在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其對膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞增殖和凋亡的影響。

qRT-PCR 檢測 lncRNA NR2F2-AS1 和 miR-129-5p 在膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞中表達(dá)水平，MTT 法和流式細(xì)胞術(shù)檢測 U251 細(xì)胞增殖和凋亡，Western blot 檢測細(xì)胞中CyclinD1、p21、Bax 和 Bcl-2 的蛋白表達(dá)水平，雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證 NR2F2-AS1 和 miR-129-5p 的調(diào)控關(guān)系。

與正常腦組織相比，在膠質(zhì)瘤組織中 lncRNA NR2F2-AS1 的含量顯著升高（< 0.05），miR-129-5p 的含量則顯著下降（< 0.05）；干擾 NR2F2-AS1 表達(dá)和過表達(dá) miR-129-5p 均可抑制膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，使細(xì)胞中 CyclinD1 和 Bcl-2 含量降低（< 0.05），p21 和 Bax 含量升高（< 0.05）；lncRNA NR2F2-AS1 靶向負(fù)調(diào)控 miR-129-5p 的表達(dá)；抑制 miR-129-5p 表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾 NR2F2-AS1 表達(dá)對 U251 細(xì)胞增殖、凋亡的作用。

干擾 lncRNA NR2F2-AS1 通過靶向促進(jìn) miR-129-5p表達(dá)抑制膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。LncRNA NR2F2-AS1 可能是膠質(zhì)瘤的分子靶點(diǎn)。

膠質(zhì)瘤； U251 細(xì)胞； NR2F2-AS1； miR-129-5p； 增殖； 凋亡

膠質(zhì)瘤是常見的原發(fā)性惡性腦腫瘤，主要治療手段是手術(shù)和放化療，但治療效果差，患者生存期短，預(yù)后較差[1]。研究抑制膠質(zhì)瘤的分子機(jī)制，尋找潛在的個(gè)性化精準(zhǔn)治療靶點(diǎn)，已成為膠質(zhì)瘤基礎(chǔ)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。

研究表明，長鏈非編碼 RNA（long non-coding RNA，lncRNA）可能通過參與信號通路調(diào)控機(jī)制與microRNA（miRNA）相互作用，影響膠質(zhì)瘤的生長和進(jìn)展[2]。研究表明，核受體亞家族 2 組 F 成員 2 反義 RNA1（nuclear receptor subfamily 2 group F member 2-antisense RNA 1，NR2F2-AS1）在前列腺癌[3]、結(jié)直腸癌[4]、非小細(xì)胞肺癌[5]組織中表達(dá)上調(diào)，與癌細(xì)胞的增殖和凋亡有關(guān)，但其在膠質(zhì)瘤中的作用尚不清楚。本研究通過 LncBase 預(yù)測發(fā)現(xiàn)，miR-129-5p 可能是NR2F2-AS1 的靶基因。miR-129-5p 在膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，過表達(dá) miR-129-5p 抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[6]。miR-129-5p 和NR2F2-AS1 在膠質(zhì)瘤中是否存在某種調(diào)控關(guān)系，尚不清楚。

本課題以膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞為主要研究對象，研究 NR2F2-AS1 和 miR-129-5p 對U251 增殖、凋亡的影響及潛在分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

2016 年 6 月– 2017 年 6 月于本院病理檢查確診為膠質(zhì)瘤的患者 20 例，其中男 12 例，女8 例，年齡 21 ~ 65（43.2 ± 14.8）歲，膠質(zhì)瘤分級：I 級 2 例，II 級 5 例，III 級 8 例，IV 級 5 例。留取 20 例患者手術(shù)切除的膠質(zhì)瘤組織，同時(shí)選擇 20 例志愿者（腦外傷行顱內(nèi)減壓手術(shù)患者）正常腦組織作為對照。所有患者術(shù)前未接受放療和化療。本研究通過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并與所有患者或其家屬、志愿者簽訂知情同意書。

人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株 U251 購自美國 ATCC；高糖 DMEM 培養(yǎng)基和胎牛血清（FBS）購自美國 Gibco 公司；胰蛋白酶、噻唑藍(lán)（MTT）和二甲基亞砜（DMSO）購自美國 Sigma-Aldrich 公司；Trizol 試劑、Real-time PCR 試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒（RT-PCR）和 Lipofectamine 2000 轉(zhuǎn)染試劑盒購自寶生物工程（大連）有限公司；流式細(xì)胞儀和流式試劑盒購自美國 BD 公司；NR2F2-AS1 干擾劑（si-NR2F2-AS1）、NR2F2-AS1 過表達(dá)載體（pcDNA-NR2F2-AS1）、miR-129-5p 模擬物（miR- 129-5p）、miR-129-5p 抑制劑（anti-miR-129-5p）、陰性對照（si-NC、miR-NC、pcDNA、anti-miR-NC）、NR2F2-AS1 野生型和突變型雙熒光素酶報(bào)告載體均購自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司；CyclinD1 抗體、p21 抗體、Bax 抗體、Bcl-2 抗體和 GAPDH 抗體購自美國 Santa Cruze 公司；雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)購自美國 Promega 公司；全自動(dòng)酶標(biāo)儀及 Real-time PCR 儀購自美國 Bio-Rad 公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 將 U251 細(xì)胞用含10% FBS、1% 青-鏈霉素的高糖 DMEM 培養(yǎng)液培養(yǎng)，然后將培養(yǎng)瓶置于37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中，濕度 95%。待細(xì)胞生長至對數(shù)生長期時(shí)，洗滌消化，1:3 傳代。

1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 收集對數(shù)生長期的 U251 細(xì)胞，以2 × 105個(gè)/孔接種于 6 孔板中，細(xì)胞培養(yǎng)至融合為一層時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。用 Lipofectamine 2000 將si-NC、si-NR2F2-AS1、miR-NC、miR-129-5p、pcDNA、pcDNA-NR2F2-AS1、si-NR2F2-AS1 + anti-miR-NC、si-NR2F2-AS1 + anti-miR-129-5p、WT-NR2F2-AS1 + miR-NC、WT-NR2F2-AS1 + miR-129-5p、MUT-NR2F2-AS1 + miR-NC 和 MUT-NR2F2-AS1 + miR-129-5p 轉(zhuǎn)染入培養(yǎng)好的 U251 細(xì)胞中，培養(yǎng) 4 h，換成完全培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染48 h，收集細(xì)胞。

1.2.3 Real-time PCR 檢測 RNA 的表達(dá) 收集膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織樣本及各組轉(zhuǎn)染后的 U251 細(xì)胞，提取組織樣本和細(xì)胞總 RNA，然后反轉(zhuǎn)錄合成 cDNA，然后以 cDNA 為模板進(jìn)行 Real-time PCR 反應(yīng)合成 lncRNA NR2F2-AS1 和 miR-129-5p，反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃ 5 min；94 ℃ 40 s、59 ℃ 40 s、72 ℃ 40 s，35 個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。引物如下：miR-129-5p 上游：5' GGGGGCTTTTT GCGGTCTGG 3'，下游：5' AGTGCGTGTCGGAG TC 3'；NR2F2-AS1 上游：5' CTCTGGGAATCGTCC TGTATGC 3'，下游：5' TGGTTTCCTGGTTCTCTG CC 3'。用 2?ΔΔCt方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.2.4 MTT 實(shí)驗(yàn)測定細(xì)胞活性 收集轉(zhuǎn)染后的U251 細(xì)胞，以 2 × 103個(gè)/孔接種于96 微孔板中，置培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)，分別在 24、48、72 h 時(shí)進(jìn)行 MTT 實(shí)驗(yàn)，每孔加入 5 mg/ml 的 MTT 20 μl，培養(yǎng) 4 h，棄上清，加入 DMSO 150 μl/孔，室溫振蕩 10 min，酶標(biāo)儀測定 490 nm 吸光度值。

1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率 將培養(yǎng)至對數(shù)生長期的各組轉(zhuǎn)染后的 U251 細(xì)胞接種于 6 孔板中，繼續(xù)培養(yǎng) 48 h，收集細(xì)胞，洗滌 2 次，根據(jù)凋亡試劑盒說明書操作，用 400 μl 標(biāo)記緩沖液重懸細(xì)胞，加入 5 μl Annexin V-FITC 和 10 μl 碘化丙啶（PI），室溫避光 20 min，用流式細(xì)胞儀檢測凋亡率。

1.2.6 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)實(shí)驗(yàn) 根據(jù) 1.2.2 進(jìn)行 U251 細(xì)胞的培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染，將構(gòu)建的 lncRNA NR2F2-AS1 的野生型（WT-NR2F2-AS1）和突變型（MUT-NR2F2-AS1）雙熒光素酶報(bào)告載體，分別與 miR-NC 或 miR-129-5p 共轉(zhuǎn)染 U251 細(xì)胞，轉(zhuǎn)染 48 h，收集細(xì)胞，裂解細(xì)胞，離心收集上清，檢測上清中熒光素酶活性。以海腎熒光素酶活性為內(nèi)參照，計(jì)算相對螢火蟲熒光素酶活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 lncRNA NR2F2-AS1 和 miR-129-5p 在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)

與正常腦組織相比，在膠質(zhì)瘤組織中 lncRNA NR2F2-AS1 的含量顯著升高（< 0.05），miR-129-5p 的含量則顯著下降（< 0.05），見表 1。

表 1 lncRNA NR2F2-AS1 和 miR-129-5p在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)（，n = 20）

注：與正常腦組織組比較，*< 0.05。

Note:*0.05 vs normal brain tissue.

2.2 干擾 lncRNA NR2F2-AS1 表達(dá)可抑制膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞增殖

干擾 NR2F2-AS1 表達(dá)后，膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞中 lncRNA NR2F2-AS1 含量顯著下降（< 0.05），細(xì)胞490在 24、48 和 72 h 均顯著下降（< 0.05），CyclinD1 表達(dá)降低（< 0.05），p21 表達(dá)升高（< 0.05），見圖 1 和表 2。說明干擾 NR2F2-AS1 表達(dá)可以抑制膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞增殖。

2.3 干擾 lncRNA NR2F2-AS1 表達(dá)可誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞凋亡

干擾 lncRNA NR2F2-AS1 表達(dá)后，U251 細(xì)胞凋亡率顯著增加（< 0.05），細(xì)胞中Bax 含量升高（< 0.05），Bcl-2 表達(dá)降低（< 0.05），見圖 2 和表 3。說明干擾 NR2F2-AS1 表達(dá)可誘導(dǎo) U251 細(xì)胞凋亡。

2.4 miR-129-5p 過表達(dá)可抑制膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡

過表達(dá) miR-129-5p 后，U251 細(xì)胞中 miR-129-5p 含量顯著升高（< 0.05），細(xì)胞490在 48 h 和 72 h 時(shí)顯著下降（< 0.05），細(xì)胞凋亡率升高（< 0.05），CyclinD1和 Bcl-2 含量降低（< 0.05），p21 和 Bax 含量升高（< 0.05），見圖 3 和表 4。說明過表達(dá) miR-129-5p 可抑制 U251 細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

圖 1 增殖相關(guān)蛋白表達(dá)

Figure 1 Expression of proteins related to proliferation

表 2 干擾 lncRNA NR2F2-AS1 表達(dá)對膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞增殖的影響（，n = 9）

注：與si-NC 組比較，*< 0.05。

Note:*< 0.05 vs si-NC group.

圖 2 干擾 lncRNA NR2F2-AS1 表達(dá)對膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞凋亡的影響（A：凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)；B：細(xì)胞凋亡流式圖）

Figure 2 Effect of interfering the expression of NR2F2-AS1 on apoptosis of glioma U251 (A: Expression of apoptosis-related proteins; B: Flow charts of apoptosis)

表 3 干擾 lncRNA NR2F2-AS1 表達(dá)對膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞凋亡的影響（，n = 9）

注：與 si-NC 組比較，*< 0.05。

Note:*< 0.05vssi-NC group.

圖 3 miR-129-5p 過表達(dá)對膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞增殖和凋亡的影響（A：增殖、凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)；B：細(xì)胞凋亡流式圖）

Figure 3 Effects of miR-129-5p over-expression on proliferation and apoptosis of glioma U251 cells (A: Expression of proteins related to proliferation and apoptosis; B: Flow charts of apoptosis)

表 4 過表達(dá) miR-129-5p 對膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞增殖和凋亡的影響（，n = 9）

注：與 miR-NC 組比較，*< 0.05。

Note:*0.05vsmiR-NC group.

2.5 lncRNA NR2F2-AS1 靶向調(diào)控 miR-129-5p 的表達(dá)

LncBase 預(yù)測結(jié)果顯示，lncRNA NR2F2-AS1的序列中含有與 miR-129-5p 互補(bǔ)的序列，見圖 4。雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，過表達(dá)miR-129-5p 組野生型 WT-NR2F2-AS1 的螢火蟲熒光素酶相對活性顯著下降（0.05），而突變型 MUT-NR2F2-AS1 的螢火蟲熒光素酶相對活性無明顯變化，見表 5。qRT-PCR 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，過表達(dá) NR2F2-AS1 可顯著下調(diào) miR-129-5p 含量（< 0.05）；干擾 NR2F2-AS1 表達(dá)顯著上調(diào) miR-129-5p 表達(dá)量（< 0.05），見表 6。說明 lncRNA NR2F2-AS1 靶向負(fù)調(diào)控 miR-129-5p 的表達(dá)。

圖 4 NR2F2-AS1 的序列中含有與 miR-129-5p 互補(bǔ)的核苷酸序列

Figure 4 NR2F2-AS1 contains nucleotide sequences complementary to miR-129-5p

表 5 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)（，n = 9）

注：與 miR-NC 組比較，*< 0.05。

Note:*< 0.05vsmiR-NC group.

表 6 NR2F2-AS1 和 miR-129-5p 在膠質(zhì)瘤U251 細(xì)胞中的調(diào)控關(guān)系（，n = 9）

注：與 pcDNA 組比較，#0.05；與 si-NC 組比較，&0.05。

Note:#< 0.05vspcDNA group;&< 0.05vssi-NC group.

2.6 抑制 miR-129-5p 表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾 NR2F2-AS1 表達(dá)對膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞增殖和凋亡的作用

為確認(rèn) lncRNA NR2F2-AS1 通過調(diào)控 miR-129-5p 發(fā)揮對 U251 細(xì)胞的增殖和凋亡的影響作用，在干擾 NR2F2-AS1 的同時(shí)抑制 miR-129-5p 轉(zhuǎn)錄。結(jié)果表明，干擾NR2F2-AS1 同時(shí)抑制 miR-129-5p 轉(zhuǎn)錄后，U251 細(xì)胞中miR-129-5p 水平下降（< 0.05），細(xì)胞在 24、48 和 72 h 時(shí)細(xì)胞490顯著升高（< 0.05），細(xì)胞凋亡率降低（< 0.05），CyclinD1 和 Bcl-2 含量升高（< 0.05），p21 和 Bax 含量下降（< 0.05），見圖 5 和表 7。說明抑制 miR-129-5p 表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾 NR2F2-AS1 表達(dá)對 U251 細(xì)胞增殖、凋亡的作用。

3 討論

大量研究表明，lncRNA 在惡性膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞系異常表達(dá)，可能對膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展等惡性表型具有重要意義[7]。LncRNA NR2F2-AS1 又稱核受體亞家族 2 組 F 成員 2反義 RNA1，其在多種腫瘤組織中表達(dá)異常[3-5]，下調(diào)其表達(dá)可抑制癌細(xì)胞的增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。NR2F2-AS1 在卵巢癌組織中表達(dá)下調(diào)，I ~ II 期卵巢癌組織中的表達(dá)水平明顯低于 III ~ IV 期，與患者的病理分期有關(guān)[8]。LncRNA NR2F2-AS1 在膠質(zhì)瘤中表達(dá)和作用尚不清楚。本研究通過檢測 20 例膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織發(fā)現(xiàn)，與正常腦組織相比，在膠質(zhì)瘤組織中NR2F2-AS1 的表達(dá)量顯著升高，干擾 NR2F2-AS1 表達(dá)可以抑制膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞增殖，誘導(dǎo) U251 細(xì)胞凋亡，說明在膠質(zhì)瘤中 lncRNA NR2F2-AS1 具有重要作用。

圖 5 抑制 miR-129-5p 表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾 lncRNA NR2F2-AS1 表達(dá)對膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞增殖和凋亡的作用（A：增殖、凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)；B：細(xì)胞凋亡流式圖）

Figure 5 Inhibition of miR-129-5p reversed the effects of interfering NR2F2-AS1 on the proliferation and apoptosis in glioma U251 cells (A: Expression of proteins related to proliferation and apoptosis; B: Flow charts of apoptosis)

分組GroupsmiR-129-5pOD490凋亡率（%）Apoptosis rate (%)CyclinD1 蛋白CyclinD1 proteinp21 蛋白p21 proteinBcl-2 蛋白Bcl-2 proteinBax 蛋白Bax protein 24 h48 h72 h si-NC1.01 ± 0.080.36 ± 0.030.68 ± 0.060.97 ± 0.096.87 ± 0.690.66 ± 0.060.30 ± 0.030.72 ± 0.070.21 ± 0.03 si-NR2F2-AS12.51 ± 0.25*0.32 ± 0.03*0.41 ± 0.04*0.57 ± 0.05*20.65 ± 2.14*0.27 ± 0.03*0.76 ± 0.06*0.31 ± 0.03*0.63 ± 0.05* si-NR2F2-AS1 +anti-miR-NC2.54 ± 0.240.31 ± 0.030.38 ± 0.030.54 ± 0.0521.48 ± 2.210.26 ± 0.030.77 ± 0.070.28 ± 0.030.62 ± 0.06 si-NR2F2-AS1 +anti-miR-129-5p1.43 ± 0.14#0.35 ± 0.04#0.61 ± 0.05#0.84 ± 0.07#12.79 ± 1.34#0.54 ± 0.05#0.42 ± 0.04#0.61 ± 0.06#0.33 ± 0.03# F147.1604.74491.25587.600147.341181.481186.845167.068202.443 P 0.0000.007 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

注：與 si-NC 組比較，*0.05；與 si-NR2F2-AS1 + anti-miR-NC 組比較，#0.05。

Note:*0.05vssi-NC group;#0.05vssi-NR2F2-AS1 + anti-miR-NC group.

本研究通過 LncBase 預(yù)測發(fā)現(xiàn)，NR2F2-AS1 的序列中含有與 miR-129-5p 互補(bǔ)的核苷酸序列，預(yù)示 NR2F2-AS1 與 miR-129-5p 之間可能存在結(jié)合位點(diǎn)或調(diào)控關(guān)系。miR-129-5p是 miR-129 的主要功能型成熟產(chǎn)物，參與調(diào)控多種腫瘤的增殖、凋亡、侵襲遷移等生物學(xué)過程，并在炎癥反應(yīng)、血管再生和神經(jīng)發(fā)育等過程中起調(diào)控作用[9]。miR-129-5p 在非小細(xì)胞肺癌[10]、前列腺癌[11]、胰腺癌[12]、胃癌[13]、乳腺癌[14]等腫瘤組織和細(xì)胞中低表達(dá)，過表達(dá) miR-129-5p 可抑制腫瘤增殖、遷移、侵襲和促進(jìn)細(xì)胞凋亡。miR-129-5p 在多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）中表達(dá)下調(diào)，通過靶向 Wnt5a 阻斷 PKC/ERK/NF-κB 和 JNK 通路抑制 GBM 細(xì)胞增殖、侵襲、遷移、血管生成、神經(jīng)球形成和阻斷對替莫唑胺的抵抗[15]。miR-129-5p 在膠質(zhì)瘤中低表達(dá)，與膠質(zhì)瘤分級呈負(fù)相關(guān)，過表達(dá) miR-129-5p 可靶向 DNMT3A 抑制細(xì)胞的增殖，阻滯 G1 期細(xì)胞周期[16]；miR-129-5p 還可靶向 FNDC3B 抑制 GBM 細(xì)胞活性、增殖、遷移和侵襲等細(xì)胞過程[17]。本研究結(jié)果表明，與正常腦組織相比，miR-129-5p 在膠質(zhì)瘤組織中水平下降，過表達(dá) miR-129-5p 可抑制膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，與前述研究結(jié)論[15-17]一致。

雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)和 qRT-PCR 結(jié)果表明，lncRNA NR2F2-AS1 靶向負(fù)調(diào)控miR-129-5p 的表達(dá)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，抑制 miR-129-5p 表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾 NR2F2-AS1 表達(dá)對 U251 細(xì)胞增殖、凋亡的作用，說明兩者在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中具有調(diào)控關(guān)系。

綜上，本研究闡述了在膠質(zhì)瘤組織中，lncRNA NR2F2-AS1 上調(diào)，miR-129-5p 下調(diào)；lncRNA NR2F2-AS1 在膠質(zhì)瘤 U251 細(xì)胞中靶向 miR-129-5p 調(diào)控 U251 細(xì)胞增殖和凋亡，lncRNA NR2F2-AS1 和 miR-129-5p 是膠質(zhì)瘤的潛在分子靶點(diǎn)，對膠質(zhì)瘤的基礎(chǔ)和臨床研究具有重要意義。

[1] Gusyatiner O, Hegi ME. Glioma epigenetics: from subclassification to novel treatment options. Semin Cancer Biol, 2018, 51:50-58.

[2] Dang Y, Wei X, Xue L, et al. Long non-coding RNA in glioma: target miRNA and signaling pathways. Clin Lab, 2018, 64(6):887-894.

[3] Fu X, Wang D, Shu T, et al. LncRNA NR2F2-AS1 positively regulates CDK4 to promote cancer cell proliferation in prostate carcinoma. Aging Male, 2019, 28:1-7.

[4] Li F, Jiang Z, Shao X, et al. Downregulation of lncRNA NR2F2 antisense RNA 1 induces G1 arrest of colorectal cancer cells by downregulating cyclin-dependent kinase 6. Dig Dis Sci, 2020, 65(2): 464-469.

[5] Zhang S, Zhang X, Sun Q, et al. LncRNA NR2F2-AS1 promotes tumourigenesis through modulating BMI1 expression by targeting miR-320b in non-small cell lung cancer. J Cell Mol Med, 2019, 23(3):2001-2011.

[6] Diao Y, Jin B, Huang L, et al. MiR-129-5p inhibits glioma cell progression in vitro and in vivo by targeting TGIF2. J Cell Mol Med, 2018, 22(4):2357-2367.

[7] Peng Z, Liu C, Wu M. New insights into long noncoding RNAs and their roles in glioma. Mol Cancer, 2018, 17(1):61.

[8] Ni H, Niu LL, Jing LK, et al. Expression of long non-coding RNA NR2F2-AS1 in human epithelial ovarian cancer. Tumor, 2018, 38(6):581-589. (in Chinese)

尼華, 牛蕾蕾, 景蘭凱, 等. 長鏈非編碼RNA NR2F2-AS1在人上皮性卵巢癌中的表達(dá). 腫瘤, 2018, 38(6):581-589.

[9] Wang YH, Jiang XX. Research progress in biological function of microRNA-129. Milit Med Sci, 2018, 42(5):384-388. (in Chinese)

王玉涵, 江小霞. microRNA-129生物學(xué)功能的研究進(jìn)展. 軍事醫(yī)學(xué), 2018, 42(5):384-388.

[10] Li G, Xie J, Wang J. Tumor suppressor function of miR-129-5p in lung cancer. Oncol Lett, 2019, 17(6):5777-5783.

[11] Gao G, Xiu D, Yang B, et al. miR-129-5p inhibits prostate cancer proliferation via targeting ETV1. Onco Targets Ther, 2019, 12:3531- 3544.

[12] Qiu Z, Wang X, Shi Y, et al. miR-129-5p suppresses proliferation, migration, and induces apoptosis in pancreatic cancer cells by targeting PBX3. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai), 2019, 51(10): 997-1007.

[13] Wang Q, Yu J. MiR-129-5p suppresses gastric cancer cell invasion and proliferation by inhibiting COL1A1. Biochem Cell Biol, 2018, 96(1): 19-25.

[14] Meng R, Fang J, Yu Y, et al. miR-129-5p suppresses breast cancer proliferation by targeting CBX4. Neoplasma, 2018, 65(4):572-578.

[15] Zeng A, Yin J, Li Y, et al. miR-129-5p targets Wnt5a to block PKC/ERK/NF-κB and JNK pathways in glioblastoma. Cell Death Dis, 2018, 9(3):394.

[16] Gu X, Gong H, Shen L, et al. MicroRNA-129-5p inhibits human glioma cell proliferation and induces cell cycle arrest by directly targeting DNMT3A. Am J Transl Res, 2018, 10(9):2834-2847.

[17] Xu H, Hu Y, Qiu W. Potential mechanisms of microRNA-129-5p in inhibiting cell processes including viability, proliferation, migration and invasiveness of glioblastoma cells U87 through targeting FNDC3B. Biomed Pharmacother, 2017, 87:405-411.

LncRNA NR2F2-AS1 regulates proliferation and apoptosis of the glioma cells by targeting miR-129-5p

ZHANG Da-peng, YANG Yan-hui

Department of Neurosurgery, Xinxiang Central Hospital, Henan 453000, China (ZHANG Da-peng); Department of Ultrasound, Huixian People′s Hospital, Henan 453600, China (YANG Yan-hui)

To investigate the expression of lncRNA NR2F2-AS1 and miR-129-5p in gliomas and their effects on the proliferation and apoptosis of U251 cells.

Expression levels of lncRNA NR2F2-AS1 and miR-129-5p were measured by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). The proliferation and apoptosis of U251 cells were determined by MTT assay and flow cytometry, respectively. Expression of CyclinD1, p21, Bax and Bcl-2 were detected by Western blot. Dual-luciferase reporting assay system was performed to confirm the targeted relationship between lncRNA NR2F2-AS1 and miR-129-5p.

Compared with normal brain tissue, the level of lncRNA NR2F2-AS1 in glioma tissues was increased significantly (< 0.05), and the level of miR-129-5p was decreased remarkably (< 0.05). Interfering with the expression of NR2F2-AS1 and over-expression of miR-129-5p inhibited the proliferation and promoted the apoptosis of glioma U251 cells, and reduced the expression levels of CyclinD1 and Bcl-2 in the cells (< 0.05), while increased the content of p21 and Bax (< 0.05). LncRNA NR2F2-AS1 targets and negatively regulates the expression of miR-129-5p. Inhibition of miR-129-5p reversed the effects of interfering NR2F2-AS1 on the proliferation and apoptosis of U251 cells.

Interfering lncRNA NR2F2-AS1 inhibits the proliferation and induces apoptosis of glioma U251 cells by targeting and promoting the expression of miR-129-5p. LncRNA NR2F2-AS1 may be a molecular target of glioma.

Glioma; U251 cells; NR2F2-AS1; miR-129-5p; Proliferation; Apoptosis

·協(xié)會(huì)之窗·

兩家會(huì)員單位通過牛血清生產(chǎn)質(zhì)量達(dá)標(biāo)自律檢查

經(jīng)過材料審核，牛血清產(chǎn)品質(zhì)量控制檢查組的現(xiàn)場檢查與中國食品藥品檢定研究院三批次樣品抽檢，協(xié)會(huì)兩家會(huì)員單位通過牛血清生產(chǎn)質(zhì)量達(dá)標(biāo)自律檢查。

通過單位公示如下：

1．蘭州民海生物工程有限公司

證書編號：2019N001

證書有效期：2019 年 10 月– 2024 年 9 月

2．內(nèi)蒙古維克生生物技術(shù)股份有限公司

證書編號：2020N001

證書有效期：2020 年 1 月– 2024 年 12 月

ZHANG Da-peng, Email: zhangyanjiao695@126.com

10.3969/j.issn.1673-713X.2020.03.009

張大鵬，Email：zdp1204@126.com

2019-10-22