陳弟詩，陳斌，周莉媛，鄧飛，邵靚，丁夢蝶

（四川省動物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041）

豬偽狂犬?。≒R）是由豬偽狂犬病病毒（PRV）引起的一種高度接觸性傳染病。PR 對各階段豬均危害嚴(yán)重，特別是2011 年開始［1］，PRV出現(xiàn)變異、毒力返強(qiáng)等新情況，導(dǎo)致大量PRV 陰性場轉(zhuǎn)陽、育肥豬致死率突升，在國內(nèi)迅速蔓延流行，給養(yǎng)豬業(yè)造成新一輪巨大的經(jīng)濟(jì)損失。2017 年我國首次確診PRV 跨物種感染人［2］，潛在危害非常嚴(yán)峻。《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012～2020 年）》將豬偽狂犬病納入16 種優(yōu)先防治的國內(nèi)動物疫病，并要求達(dá)到規(guī)劃設(shè)定的考核標(biāo)準(zhǔn)，要求到2020 年全國所有種豬場實(shí)現(xiàn)PR凈化。

四川省是全國生豬產(chǎn)銷大省，“十三五”國家7個生豬生產(chǎn)重點(diǎn)發(fā)展省份之一，生豬存欄量、出欄量、豬肉產(chǎn)量位居全國第一。在當(dāng)前非洲豬瘟形勢下，控制好規(guī)?；i場特別是原種豬場的PRV能有效減少豬只免疫抑制，降低非瘟和其他疫病感染風(fēng)險，對加快全省乃至全國生豬產(chǎn)能恢復(fù)和保障市場供應(yīng)具有促進(jìn)作用。近年來四川省鮮有偽狂犬流行病學(xué)調(diào)查報道，為掌握現(xiàn)有防控體系下四川省種豬場PRV的流行情況，本研究結(jié)合2015～2019 年農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧獸醫(yī)局種畜禽場主要疫病監(jiān)測工作，對全省4 個重點(diǎn)原種豬場開展了PRV 流行病學(xué)跟蹤調(diào)查，對不同豬群PRV 野毒感染情況和抗體水平進(jìn)行了持續(xù)監(jiān)測和分析。

1 材料與方法

1.1 樣品采集 2015～2019 年，每年度在四川省樂山、綿陽、南充3個地區(qū)的4個重點(diǎn)原種豬場采集豬只扁桃體及對應(yīng)血清樣品40份/場。樣品原則上來源于不少于3 棟豬舍的豬只，其中種公豬5 頭，經(jīng)產(chǎn)母豬25 頭（1～2 胎5 頭，3～4 胎10頭，5～6 胎10 頭），后備母豬10 頭（40～60 kg 5頭，90～110 kg 5頭）。同時隨機(jī)采集種公豬精液樣品5份/場，進(jìn)行偽狂犬野毒gE抗體、偽狂犬gB抗體以及野毒病原的監(jiān)測（表1）。5 年共檢測血清樣品800 份，扁桃體樣品800 份，精液樣品100份，總計(jì)1 700份。

1.2 PRV 檢測方法 豬偽狂犬病毒（gE 基因）實(shí)時熒光PCR檢測試劑盒，購自北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司；豬偽狂犬野毒gE抗體ELISA檢測試劑盒，購自美國IDEXX 公司；豬偽狂犬gB 抗體ELISA 檢測試劑盒，購自荷蘭BioChek 公司。操作程序和判斷標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 PRV 病原檢測結(jié)果 檢測結(jié)果顯示：2015～2019 年，4 個重點(diǎn)原種豬場的800 份扁桃體樣品均未檢出PRV 野毒；100 份種公豬精液樣品也未檢出PRV野毒。

2.2 不同年份PRV 血清學(xué)檢測結(jié)果 2015～2019 年在4 個重點(diǎn)原種豬場共采集豬血清樣品800份，結(jié)果得出：5年間PRV gE（野毒）抗體總陽性率為0，場陽性率為0；PRV gB抗體總陽性率為97.95%，陽性率在93.1%～100%之間，S/P 值在2.75～3.51 之間，變異系數(shù)在43.89%～56.49%之間（見表1和圖1）。

2.3 不同原種豬場不同年份PRV血清學(xué)檢測結(jié)果 4 個重點(diǎn)原種豬場在2015～2019 年間PRV gE（野毒）抗體陽性率均為0，但不同豬場不同年份的gB 抗體陽性率有一定差異。其中，C 場和D場5 年間gB 抗體陽性率均達(dá)100%；而A 場gB 抗體陽性率2015 年為97.5%，2016 年為90%；B 場gB 抗體陽性率2015 年為95%，2016 年為82.5%，2017 年為90%；2018 和2019 年4 個豬場的gB 抗體陽性率均達(dá)100%（見表2）。

2.4 不同豬群PRV 血清學(xué)檢測結(jié)果 將4 個原種豬場5年間采集的800份血清樣品按豬場生產(chǎn)環(huán)節(jié)和不同階段分為公豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬（1～2 胎次）、經(jīng)產(chǎn)母豬（3～4 胎次）、經(jīng)產(chǎn)母豬（5～6胎次）5個豬群，檢測得知：5個豬群PRV gE（野毒）抗體率均為0；gB抗體陽性率分別為99%、91.50%、100%、100%、100%，S/P 平均值分別為2.97、2.56、3.48、3.21、3.36，變異系數(shù)為43.81%～61.31%。結(jié)果顯示，后備母豬群的PRV gB 抗體陽性率最低，變異系數(shù)最大，gB 抗體水平（S/P 平均值）從高到低依次為經(jīng)產(chǎn)母豬（1～2胎次）＞經(jīng)產(chǎn)母豬（5～6 胎次）＞經(jīng)產(chǎn)母豬（3～4 胎次）＞公豬＞后備母豬（見表3和圖2）。

表1 2015～2019年四川省4個重點(diǎn)原種豬場PRV gE（野毒）陽性率、gB抗體陽性率及抗體水平

圖1 2015～2019年四川省4個重點(diǎn)原種豬場不同年份的PRV gB抗體陽性率和抗體水平（S/P值）

表2 4個原種豬場不同年份的PRV gE（野毒）陽性率和gB抗體陽性率

表3 4個重點(diǎn)原種豬場不同豬群的PRV gE（野毒）陽性率、gB抗體陽性率及抗體水平

圖2 2015～2019年四川省4個重點(diǎn)原種豬場不同豬群的PRVgB抗體陽性率和抗體水平（S/P值）

3 討論與結(jié)論

3.1 PRV gE/gB ELISA 抗體檢測和PCR 病原檢測是目前監(jiān)測PRV 的主要手段。gE 抗體檢測用于區(qū)分疫苗接種和野毒感染，但需排除母源抗體干擾和感染早期抗體尚未轉(zhuǎn)陽等因素影響。gB抗體檢測用于評價抗體情況，但不能區(qū)分疫苗和野毒抗體。不同廠家的gB 抗體檢測試劑盒因研發(fā)目的不同，設(shè)定的陽性判界也不同，檢出結(jié)果的意義也不相同，有些重點(diǎn)用于PRV已凈化場的監(jiān)測預(yù)警，有些重點(diǎn)用于免疫場的免疫效果評價。用于免疫評價的試劑盒由于廠家不同所測得的gB 抗體水平與免疫保護(hù)力的相關(guān)性也有較大差異，若需更準(zhǔn)確地了解免疫保護(hù)力，還應(yīng)進(jìn)行血清中和抗體檢測。本研究選用的gB ELISA試劑盒主要用于免疫效果評價且結(jié)果與免疫保護(hù)力密切相關(guān)。雖然gE 抗體需排除母源抗體干擾和感染早期抗體尚未轉(zhuǎn)陽等影響因素，但PCR結(jié)果可排除這些影響。gB 抗體雖不能區(qū)分疫苗和野毒抗體，但所調(diào)查的4 個原種豬場均無野毒感染。通過gE/gB ELISA 和PCR 方法相互印證，本研究所測得的gE 抗體能真實(shí)反映被調(diào)查豬場的PRV感染情況，gB抗體亦能較為真實(shí)地反映其免疫水平和免疫保護(hù)力。

3.2 2015～2019 年5 年間共采集4 個原種豬場800 份扁桃體樣品和100 份公豬精液樣品，通過PRV gE 實(shí)時熒光定量PCR 檢測均未檢出陽性，同時扁桃體樣品對應(yīng)的800 份血清樣品通過PRV gE（野毒）抗體ELISA檢測也均為陰性，表明這4 個重點(diǎn)原種豬場均未發(fā)現(xiàn)偽狂犬野毒感染、潛伏感染和持續(xù)帶毒現(xiàn)象，特別是種公豬無野毒感染和帶毒情況，這對從種源上控制PRV，有效降低其他豬群感染具有重要意義。

3.3 本次所調(diào)查的4 個重點(diǎn)原種豬場均使用PRV gE 基因缺失活疫苗毒株Bartha-K61 進(jìn)行免疫，成年豬群每年均普免3 次。從不同年份PRV gB 抗體分析結(jié)果來看，雖然2015～2017 年陽性率在93.1%～98.1%，但均遠(yuǎn)高于群體免疫合格率70%的要求，2018～2019 年陽性率均達(dá)100%。從不同原種豬場不同年份的PRV gB 抗體結(jié)果來分析，雖然A場2015～2016年的陽性率在97.5%～90%波動，B 場2015～2017 年的陽性率在95%～90%波動，但4個場5年間的陽性率均遠(yuǎn)高于群體免疫合格率（70%）。從不同豬群的PRV gB 抗體結(jié)果來分析，后備母豬群的PRV gB 抗體陽性率最低，變異系數(shù)最大，可能與采樣日齡有關(guān)，后備母豬可從10 周齡算至32 周齡，而采樣未具體規(guī)定日齡，可能采集到了免疫空白期的豬只；經(jīng)產(chǎn)母豬群雖然3 個不同胎次間的gB 抗體水平有一定差異，但陽性率均達(dá)100%。表明本次調(diào)查的4個重點(diǎn)原種豬場的PRV 免疫情況總體上較為理想，從側(cè)面反映了持續(xù)的監(jiān)測可以有效提升豬場的疫病防控水平。

3.4 根據(jù)中國動物疫控中心監(jiān)測統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，我國重點(diǎn)原種豬場2014～2018年豬偽狂犬病感染的場陽性率為33%（33/100）～30.5%（29/95）［3］，個體陽性率為23.26%（928/3 990）～17.99%（678/3 769），可見我國偽狂犬病的防控形勢仍十分嚴(yán)峻。而本次調(diào)查的4 個重點(diǎn)原種豬場在2015 年至2019 年均未發(fā)現(xiàn)豬偽狂犬野毒感染帶毒情況，表明四川省在原種豬場PRV防控中取得了較好成效。四川省自2014 年開始就按照國家要求推動重點(diǎn)規(guī)模化養(yǎng)殖場主要動物疫病的凈化工作［4］，目前已通過1個偽狂犬凈化示范場和2個創(chuàng)建場的評審認(rèn)可，原種場豬偽狂犬病的凈化已形成行業(yè)共識，凈化工作也初見成效。近年來，四川省重點(diǎn)原種豬場的PRV防控工作取得顯著進(jìn)展，但從全國情況來看，PRV防控仍不能掉以輕心，特別在當(dāng)前非洲豬瘟形勢下，控制好種豬的PRV能有效降低非洲豬瘟和其他疫病的感染風(fēng)險，也可降低養(yǎng)殖及獸醫(yī)從業(yè)者的感染風(fēng)險，保障公共衛(wèi)生安全。本研究通過持續(xù)的流行病學(xué)跟蹤調(diào)查，及時掌握了四川省原種豬場PRV感染和免疫情況，為分級分類科學(xué)指導(dǎo)PRV防控和凈化提供了數(shù)據(jù)支撐。