崔小林, 王宏民, 張 靜, 張仙紅, 鄭海霞,*

(1. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 山西太谷 030801; 2. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)經(jīng)濟(jì)管理學(xué)院, 山西太谷 030801)

綠豆象Callosobruchuschinensis屬鞘翅目(Coleoptera)豆象科(Bruchidae)瘤背豆象屬Callosobruchus，是重要的倉(cāng)儲(chǔ)害蟲(chóng)之一，主要以幼蟲(chóng)蛀食綠豆Vignaradiata、豌豆Pisumsativum、扁豆Lablabpurpureus等植物的種子(Cuietal., 2019)。綠豆象分布廣泛，在我國(guó)大部分地區(qū)均有發(fā)生。由于該蟲(chóng)隱蔽性強(qiáng)，可重復(fù)為害其他豆粒，對(duì)豆科作物的產(chǎn)量與品質(zhì)造成了嚴(yán)重的威脅。其中對(duì)綠豆的為害最為嚴(yán)重，倉(cāng)內(nèi)綠豆的蛀蝕率可以高達(dá)69%(成小芳等, 2017)。目前對(duì)綠豆象的研究主要包括綠豆象的防治方法(徐長(zhǎng)明, 1992; 楊長(zhǎng)舉等, 1994; 陳新等, 2014)，綠豆象抗性基因的標(biāo)記及其衰老的分子機(jī)制(Tanaka, 1993; Chenetal., 2007)，綠豆象成蟲(chóng)觸角感器掃描電鏡觀察(楊萌萌, 2016)，豆類(lèi)品種以及溫度等對(duì)綠豆象生長(zhǎng)發(fā)育的影響(王燕等, 2010; 成小芳等, 2017; 王宏民等, 2017b)，綠豆豆莢揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)綠豆象產(chǎn)卵選擇性的影響(王宏民等, 2017a)，以及綠豆象觸角轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及嗅覺(jué)相關(guān)基因的分析(鄭海霞等, 2018)等。綠豆象幼蟲(chóng)主要鉆蛀豆粒，因此對(duì)其生物學(xué)、生態(tài)學(xué)及防治等方面的研究難度較大。

幼蟲(chóng)準(zhǔn)確分齡是開(kāi)展生物學(xué)及防控研究的基礎(chǔ)(Esperketal., 2007; Chenetal., 2013)。對(duì)于具有鉆蛀性的昆蟲(chóng)，無(wú)法通過(guò)直接觀察蛻皮情況劃分蟲(chóng)齡。依據(jù)戴氏法則，幼蟲(chóng)某一部位的長(zhǎng)、寬度隨著齡期增長(zhǎng)呈一定的幾何級(jí)數(shù)量關(guān)系(Dyar, 1890)。很多學(xué)者對(duì)鉆蛀性昆蟲(chóng)的幼蟲(chóng)蟲(chóng)齡進(jìn)行了研究(王小藝等, 2005; 張海濱等, 2011; 李志文等, 2015; 張燕如等, 2018)，目前，對(duì)于綠豆象的分齡指標(biāo)還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

昆蟲(chóng)的頭部是取食和感覺(jué)中心，其上分布有許多化學(xué)感受器，昆蟲(chóng)依靠這些化學(xué)感受器對(duì)外界的化學(xué)刺激和機(jī)械作用進(jìn)行感知，從而完成取食、求偶、交配、產(chǎn)卵及躲避天敵等一系列活動(dòng)(van Loon, 1996)。研究表明，不同種類(lèi)的昆蟲(chóng)化學(xué)感受器類(lèi)型、數(shù)量及分布差異很大(St?dleretal., 1995)。許多學(xué)者對(duì)幼蟲(chóng)頭部感器進(jìn)行了研究(張蒙等, 2014; 周平等, 2015; 孟海林等, 2017; 張方梅等, 2019)，但關(guān)于綠豆象幼蟲(chóng)感器仍未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

本研究以綠豆象幼蟲(chóng)為研究對(duì)象，選擇其體長(zhǎng)、頭殼寬及上顎寬作為指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，劃分幼蟲(chóng)蟲(chóng)齡，同時(shí)利用掃描電鏡對(duì)末齡幼蟲(chóng)的頭部形態(tài)進(jìn)行觀察，旨在找出判定綠豆象幼蟲(chóng)齡數(shù)的最佳形態(tài)指標(biāo)，準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)其發(fā)生時(shí)間，了解其發(fā)生規(guī)律，以便及時(shí)采取有效的防治策略，為研究其生物學(xué)、行為學(xué)及綜合防治提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試蟲(chóng)源

本實(shí)驗(yàn)所選試蟲(chóng)為山西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院昆蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)長(zhǎng)期飼養(yǎng)(飼養(yǎng)條件：溫度26±1℃，相對(duì)濕度75%～80%，光周期16L∶8D)的綠豆象。

1.2 幼蟲(chóng)樣本收集

在飼養(yǎng)條件下，將新羽化的綠豆象放入裝有新鮮綠豆的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)并觀察產(chǎn)卵情況，待卵孵化后，每天取出15粒綠豆，剖開(kāi)綠豆，取出幼蟲(chóng)，直到所取幼蟲(chóng)化蛹，累計(jì)取27 d。用75%酒精殺死幼蟲(chóng)，將蟲(chóng)體平展并及時(shí)測(cè)量(測(cè)量過(guò)程中損壞的幼蟲(chóng)不計(jì)入測(cè)量總數(shù)內(nèi))。

1.3 幼蟲(chóng)分齡指標(biāo)及測(cè)量方法

參考李志文等(2015)、楊美紅等(2012)和周平等(2015)選取綠豆象幼蟲(chóng)的體長(zhǎng)、頭殼寬及上顎寬作為其形態(tài)分齡指標(biāo)。測(cè)量時(shí)用Nikon SMZ745T體視鏡，測(cè)量指標(biāo)如圖1所示，及時(shí)記錄幼蟲(chóng)體長(zhǎng)、頭殼寬及上顎寬。同時(shí)對(duì)體長(zhǎng)與頭殼寬比值進(jìn)行了分析，每個(gè)齡期的幼蟲(chóng)隨機(jī)選5頭樣本，取各個(gè)指標(biāo)的平均值，再用平均值計(jì)算體長(zhǎng)與頭殼寬之比，進(jìn)行3組重復(fù)。

圖1 綠豆象幼蟲(chóng)各測(cè)量指標(biāo)Fig. 1 Measurements of Callosobruchus chinensis larvaeA: 幼蟲(chóng)頭部Larval head; B: 幼蟲(chóng)Larva. a: 體長(zhǎng)Body length; b: 頭殼寬Head capsule width; c: 上顎寬Mandible width.

1.4 幼蟲(chóng)頭部形態(tài)與感器掃描電鏡觀察

將選取的健康的綠豆象末齡幼蟲(chóng)放入經(jīng)過(guò)4℃預(yù)冷的2.5%戊二醛中4℃固定24～48 h；將固定好的幼蟲(chóng)取出，用新配制的磷酸緩沖液在超聲波震蕩儀中反復(fù)清洗，以去除其表面雜質(zhì)，便于后期的觀察；然后分別用70%, 80%, 85%, 90%, 95%和100%的乙醇溶液對(duì)樣品進(jìn)行梯度脫水，每次脫水15 min，每種濃度進(jìn)行3次，在每次脫水后用超聲波清洗15 s(在乙醇溶液濃度為90%, 95%和100%時(shí)不進(jìn)行此項(xiàng)操作)；將脫水過(guò)后的綠豆象幼蟲(chóng)用干燥器進(jìn)行烘干，將烘干后的頭部樣品用雙面導(dǎo)電膠依次固定在樣品臺(tái)上；隨后將樣品放置在日立E-1010離子濺射儀中進(jìn)行離子濺射噴金鍍膜；最后使用S-4800掃描電鏡(Hitachi Ltd., Tokyo, 日本)對(duì)其進(jìn)行觀察拍照。觀察個(gè)體數(shù)4頭。

1.5 感器鑒定與命名

感器鑒定與命名參照Z(yǔ)acharuk和Shields (1991)的方法，同時(shí)參考近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)于鞘翅目幼蟲(chóng)觸角及口器超微結(jié)構(gòu)的研究結(jié)果(Alekseevetal., 2006; Eilersetal., 2012)。

1.6 數(shù)據(jù)分析

將所測(cè)得的數(shù)據(jù)運(yùn)用Excel 2010進(jìn)行預(yù)處理，利用IBM SPSS24.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用Origin9.1將幼蟲(chóng)體長(zhǎng)、頭殼寬和上顎寬值由小到大制作成頻次分布直方圖，據(jù)此初步劃分蟲(chóng)齡。根據(jù)測(cè)量值分別計(jì)算綠豆象各齡幼蟲(chóng)3項(xiàng)分齡指標(biāo)的變幅、平均值、標(biāo)準(zhǔn)誤和變異系數(shù)，同時(shí)對(duì)體長(zhǎng)與頭殼寬的比值進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan氏新復(fù)極差法檢驗(yàn)差異性。根據(jù)Crosby生長(zhǎng)法則計(jì)算Brooks指數(shù)和Crosby指數(shù)，對(duì)已獲得的3項(xiàng)指標(biāo)測(cè)量數(shù)據(jù)與相應(yīng)的齡數(shù)進(jìn)行回歸分析，比較各指標(biāo)分齡的合理性，進(jìn)而選擇最佳分齡指標(biāo)。利用ImageJ軟件測(cè)量各類(lèi)感受器的長(zhǎng)度。

Brooks指數(shù)=Xn/Xn-1，其中Xn和Xn-1分別表示第n齡和n-1齡幼蟲(chóng)各個(gè)測(cè)量指標(biāo)的平均值；Crosby指數(shù)=(bn-bn-1)/bn-1，其中bn和bn-1分別表示第n和n-1個(gè)的Brooks指數(shù)；變異系數(shù)C.V(%)=標(biāo)準(zhǔn)差/均值×100%。

2 結(jié)果

2.1綠豆象幼蟲(chóng)的分齡

根據(jù)對(duì)所選綠豆象幼蟲(chóng)的體長(zhǎng)、頭殼寬及上顎寬的測(cè)量值進(jìn)行頻次分布分析，以一個(gè)頻次分布集中區(qū)域代表幼蟲(chóng)的一個(gè)齡期。綠豆象的這3項(xiàng)形態(tài)指標(biāo)均具有4個(gè)明顯的峰值(圖2)，據(jù)此推斷綠豆象幼蟲(chóng)為4個(gè)蟲(chóng)齡。結(jié)果提示幼蟲(chóng)體長(zhǎng)、頭殼寬及上顎寬適合作為綠豆象的幼蟲(chóng)分齡指標(biāo)。

2.2 綠豆象幼蟲(chóng)最佳分齡指標(biāo)

綠豆象幼蟲(chóng)體長(zhǎng)、頭殼寬和上顎寬3項(xiàng)分齡指標(biāo)的各峰之間并無(wú)間斷，相鄰齡期之間存在交叉重疊現(xiàn)象(表1)。根據(jù)測(cè)量值分別計(jì)算綠豆象各齡幼蟲(chóng)這3項(xiàng)分齡指標(biāo)的變幅、平均值、標(biāo)準(zhǔn)誤、變異系數(shù)、Brooks指數(shù)和Crosby指數(shù)，結(jié)果如表1所示。綠豆象幼蟲(chóng)各項(xiàng)分齡指標(biāo)的變異系數(shù)均偏低，且Crosby指數(shù)均小于10%，表明將綠豆象幼蟲(chóng)劃分為4個(gè)蟲(chóng)齡是合理的。且頭殼寬的Crosby指數(shù)均小于體長(zhǎng)和上顎寬的Crosby指數(shù)，所以可將頭殼寬作為最佳分齡指標(biāo)。

2.3 綠豆象體長(zhǎng)與頭殼寬比值分析

通過(guò)計(jì)算不同齡期幼蟲(chóng)的體長(zhǎng)與頭殼寬的比值(圖3)可以看出：隨著綠豆象幼蟲(chóng)蟲(chóng)齡的增加，各齡幼蟲(chóng)的體長(zhǎng)與頭殼寬的比值不同，1, 2, 3和4齡幼蟲(chóng)體長(zhǎng)與頭殼寬比值分別為3.44, 3.41, 3.54和3.45。方差分析表明，1, 2與4齡幼蟲(chóng)的體長(zhǎng)與頭殼寬比值差異不顯著(P>0.05)，但顯著低于3齡幼蟲(chóng)(P<0.05)。結(jié)果說(shuō)明體長(zhǎng)與頭殼寬比值不適合作為分齡指標(biāo)。

2.4 綠豆象幼蟲(chóng)齡數(shù)的確定及擬合效果

對(duì)3項(xiàng)分齡指標(biāo)和齡期進(jìn)行線(xiàn)性關(guān)系和指數(shù)關(guān)系分析，并進(jìn)行曲線(xiàn)擬合，結(jié)果表明，綠豆象幼蟲(chóng)的3項(xiàng)分齡指標(biāo)的線(xiàn)性關(guān)系和指數(shù)關(guān)系與齡期存在極顯著的相關(guān)關(guān)系(表2)；其中3項(xiàng)分齡指標(biāo)與齡期之間的三次線(xiàn)性擬合模型的回歸系數(shù)最大，二次線(xiàn)性擬合模型的回歸系數(shù)次之，直線(xiàn)擬合模型的回歸系數(shù)再次之，指數(shù)擬合模型的回歸系數(shù)相比最低；同時(shí)，幼蟲(chóng)頭殼寬與體長(zhǎng)測(cè)量值的對(duì)數(shù)值與幼蟲(chóng)齡期的相關(guān)系數(shù)要優(yōu)于上顎寬測(cè)量值的對(duì)數(shù)值與幼蟲(chóng)齡期的相關(guān)系數(shù)，結(jié)合表1的分析結(jié)果，可將頭殼寬作為劃分綠豆象幼蟲(chóng)齡期的最佳指標(biāo)。幼蟲(chóng)體長(zhǎng)和上顎寬可作為輔助指標(biāo)，進(jìn)行驗(yàn)證。

圖2 綠豆象幼蟲(chóng)體長(zhǎng)(A)、頭殼寬(B)和上顎寬(C)頻次分布直方圖Fig. 2 Frequency histograms of body length (A), head capsule width (B) and mandible width (C) ofCallosobruchus chinensis larvae

表1 綠豆象幼蟲(chóng)3項(xiàng)分齡指標(biāo)測(cè)量值及統(tǒng)計(jì)分析Table 1 Measurements and statistics for three indexes of instar division of Callosobruchus chinensis larvae

表中同一指標(biāo)均值±標(biāo)準(zhǔn)誤后不同字母表示不同齡期間同一指標(biāo)經(jīng)LSD多重比較檢驗(yàn)在0.05水平上差異顯著。Different letters following means±SEwithin the same variable show significant differences in the same morphological variable between larval instars based on Fisher’s LSD test at the 5% level.

圖3 綠豆象幼蟲(chóng)體長(zhǎng)與頭殼寬的比值Fig. 3 The ratio of body length to head capsule widthof Callosobruchus chinensis larvae1: 1齡幼蟲(chóng)1st instar larva; 2: 2齡幼蟲(chóng)2nd instar larva; 3: 3齡幼蟲(chóng)3rd instar larva; 4: 4齡幼蟲(chóng)4th instar larva. 圖中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，柱上小寫(xiě)字母表示不同齡期間差異顯著(P<0.05, Duncan氏檢驗(yàn))。Data in the figure are mean±SE. Different small letters above bars indicate significant difference among different larval instars (P<0.05, Duncan’s test).

對(duì)綠豆象幼蟲(chóng)分齡指標(biāo)和齡數(shù)進(jìn)行曲線(xiàn)擬合，結(jié)果顯示，二次模型和三次模型(R>0.950,P<0.001)對(duì)3項(xiàng)分齡指標(biāo)擬合效果最好(圖4)，復(fù)合函數(shù)、增長(zhǎng)函數(shù)和指數(shù)函數(shù)(R>0.930,P<0.001)的擬合效果較好，可進(jìn)一步驗(yàn)證綠豆象幼蟲(chóng)分為4齡是正確的。

2.5 綠豆象末齡幼蟲(chóng)頭部形態(tài)

綠豆象末齡幼蟲(chóng)頭部左右對(duì)稱(chēng)，呈圓臺(tái)狀，頭殼上分布有一些毛形感器；口器為咀嚼式口器，由上唇、上顎、下顎、下唇、下顎須和下唇須組成；觸角為單節(jié)，形狀粗短，位于頭部前外側(cè)，著生于口器旁邊，基部在觸角窩內(nèi)；有一對(duì)單眼位于觸角側(cè)下方(圖5: A, B, C)。

2.6 綠豆象幼蟲(chóng)頭部感器

綠豆象幼蟲(chóng)頭部共有7種感器，分別是錐形感器、毛形感器、刺形感器、瓶形感器、壇形感器、栓錐形感器及板形感器，主要分布于觸角、下顎須、上唇和上顎。

2.6.1幼蟲(chóng)觸角感器：綠豆象末齡幼蟲(chóng)觸角末梢著生有Ⅰ型錐形感器、Ⅰ型毛形感器和刺形感器，側(cè)面有刺形感器，靠近觸角窩有一個(gè)瓶形感器(圖5: D)。Ⅰ型錐形感器椎體扁寬短小，基部粗壯，頂端較鈍；Ⅰ型毛形感器端部徑直前伸，自然彎曲；刺形感器傾斜或者直立于觸角表面，末端尖銳；瓶形感器呈葫蘆狀，在觸角表面形成一個(gè)凸起。

2.6.2幼蟲(chóng)下顎須感器：幼蟲(chóng)下顎須外側(cè)面有1個(gè)板形感器，著生于細(xì)長(zhǎng)穴中，周?chē)袑掃叄瑸槔L(zhǎng)細(xì)直形；下顎須基部有1個(gè)栓錐形感器，其底座為一圓形腔；在板形感器前方有1個(gè)壇形感器，呈圓環(huán)狀，中間有一微小凸起(圖5: E)。下顎須末梢有Ⅰ型錐形感器和Ⅱ型錐形感器共13個(gè)，Ⅱ型錐形感器呈圓柱狀，從基部到頂端直徑為明顯變化。

表2 綠豆象幼蟲(chóng)3種形態(tài)結(jié)構(gòu)測(cè)量值回歸方程及回歸系數(shù)Table 2 Regression equation and coefficient of three morphological variables of Callosobruchus chinensis

圖4 綠豆象幼蟲(chóng)體長(zhǎng)(A)、頭殼寬(B)、上顎寬(C)與齡數(shù)之間的關(guān)系擬合結(jié)果Fig. 4 Regression relationship between number of larval instars and body length (A), head capsule width (B)or mandible width (C) of Callosobruchus chinensis larvae1: 1齡幼蟲(chóng)1st instar larva; 2: 2齡幼蟲(chóng)2nd instar larva; 3: 3齡幼蟲(chóng)3rd instar larva; 4: 4齡幼蟲(chóng)4th instar larva.

圖5 綠豆象末齡幼蟲(chóng)頭部的掃描電鏡圖Fig. 5 Scanning electron microscope photographs of the head of the final instar larva of Callosobruchus chinensisA: 頭部腹面圖Head in ventral view; B: 頭部正面圖Head in front view; C: 頭部側(cè)面圖Head in lateral view; D: 觸角Antenna; E: 下顎須Maxillary palpus; F: 上唇末端毛形感器Sensillum trichodeum on the terminal end of labrum. Anf: 觸角窩Antennal fossa; Ant: 觸角Antenna; Cly: 唇基Clypeus; Lai: 下唇Labium; Lar: 上唇Labrum; Md: 上顎Mandible; Mp: 下顎須Maxillary palpus; Oce: 單眼Ocellus; SA: 壇形感器Sensillum ampullaceum; SB: 錐形感器Sensillum basiconicum; SC: 刺形感器 Sensillum chaeticum; SL: 瓶形感器Sensillum lageniform; SP: 板形感器Sensillum placodeum; SS: 栓錐形感器Sensillum styloconicum; ST: 毛形感器Sensillum trichodeum.

2.6.3上唇及上顎感器：幼蟲(chóng)的唇基有輕微骨化，橫向延長(zhǎng)，在唇基兩側(cè)各有一個(gè)Ⅱ型毛形感器，其端部呈彎鉤狀，中間有一個(gè)壇形感器，上唇部分呈倒三角形，末端布滿(mǎn)毛形感器(圖5: F)。幼蟲(chóng)上顎嚴(yán)重骨化，上面有錐狀咀嚼表面，每個(gè)咀嚼面上都有Ⅱ型毛形感器。

3 討論

綠豆象為鉆蛀性害蟲(chóng)，生活方式隱蔽，對(duì)其幼蟲(chóng)齡數(shù)準(zhǔn)確判定較難。本研究通過(guò)測(cè)定綠豆象幼蟲(chóng)的體長(zhǎng)、頭殼寬和上顎寬值，并對(duì)所測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，確定了綠豆象幼蟲(chóng)分為4齡。這與陸惠生(1990)在南寧室內(nèi)常溫條件下觀察到的綠豆象幼蟲(chóng)為4齡的結(jié)果一致，但不同于黃建國(guó)(1980)在鄭州室內(nèi)常溫觀察結(jié)果5齡，造成這樣的結(jié)果可能與地區(qū)、樣本數(shù)及當(dāng)時(shí)幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)環(huán)境有關(guān)。同時(shí)這些研究也說(shuō)明綠豆象作為一種重要的倉(cāng)儲(chǔ)害蟲(chóng)，其生長(zhǎng)發(fā)育的主要影響因素是溫度。幼蟲(chóng)的體長(zhǎng)、頭殼寬和上顎寬可能受環(huán)境影響有所差異，如溫度、濕度和營(yíng)養(yǎng)條件等，可將體長(zhǎng)與頭殼寬的比值作為輔助參考進(jìn)行分齡。張潤(rùn)志等(1999)鑒別麥雙尾蚜Diuraphisnoxia的齡期時(shí)，認(rèn)為絕對(duì)長(zhǎng)度受營(yíng)養(yǎng)等環(huán)境條件的影響而有差異，從而通過(guò)計(jì)算一些定性特征長(zhǎng)度的比值來(lái)鑒別齡期；楊萍(2005)等認(rèn)為枯葉蛺蝶Killimainachis的體長(zhǎng)與頭殼寬的比值可用來(lái)衡量幼蟲(chóng)生長(zhǎng)狀況的好壞，比值大且隨著幼蟲(chóng)生長(zhǎng)增長(zhǎng)加快的個(gè)體生長(zhǎng)良好，反之幼蟲(chóng)個(gè)體生長(zhǎng)狀況較差。

表3 綠豆象末齡幼蟲(chóng)頭部感受器的分布、類(lèi)型及長(zhǎng)度Table 3 The distribution, type and length of sensilla on the headof the final instar larvae of Callosobruchus chinensis

表中數(shù)據(jù)為平均值±SE(n=4). Data in the table are mean±SE(n=4).

昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)蟲(chóng)體的生長(zhǎng)具有一定規(guī)律性，大多數(shù)昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)的體長(zhǎng)是連續(xù)增長(zhǎng)的，而身體骨化程度較高的部分伴隨周期性蛻皮而呈跳躍式增長(zhǎng)(Loerch and Cameron, 1983)，因此骨化部位常用來(lái)作為幼蟲(chóng)分齡的指標(biāo)(Daly, 1985)，尤其是頭殼寬，在許多鉆蛀性昆蟲(chóng)的分齡研究中作為最佳分齡指標(biāo)(Panzavolta, 2007)。鱗翅目中如楊美紅等(2012)在測(cè)定榆木蠹蛾Holcocerusvicarius幼蟲(chóng)齡數(shù)時(shí)，測(cè)量了其頭殼寬、體長(zhǎng)、體寬、前胸背板寬、上顎長(zhǎng)和上顎寬，確定頭殼寬為最佳分齡指標(biāo)；李召波等(2014)通過(guò)測(cè)定二點(diǎn)委夜蛾Athetislepigone幼蟲(chóng)頭殼寬、體長(zhǎng)和體重，發(fā)現(xiàn)頭殼寬可作為該幼蟲(chóng)的分齡指標(biāo)，體長(zhǎng)和體重則不合適；周斌等(2015)在測(cè)定降香黃檀食葉害蟲(chóng)棕斑澳黃毒蛾Orvascasubnotata的幼蟲(chóng)蟲(chóng)齡時(shí)，測(cè)定了其頭寬、前胸毛瘤寬和體長(zhǎng)，確定了頭寬為其最佳分齡指標(biāo)。鞘翅目中如李志文等(2015)對(duì)油茶象Curculiochinensis幼蟲(chóng)蟲(chóng)齡的劃分進(jìn)行研究時(shí)，發(fā)現(xiàn)其頭殼寬、頭殼長(zhǎng)和上顎寬可作為蟲(chóng)齡分齡指標(biāo)，且頭殼寬為最佳分齡指標(biāo)；趙莉等(2001)通過(guò)測(cè)定蓼龜象甲R(shí)hinoncuspericarpius幼蟲(chóng)的頭殼寬來(lái)劃分其幼蟲(chóng)蟲(chóng)齡。本研究結(jié)果也表明，頭殼寬是綠豆象幼蟲(chóng)的最佳分齡指標(biāo)。

陳永年和潘桐(1988)認(rèn)為昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)及其他表皮結(jié)構(gòu)的增長(zhǎng)與幼蟲(chóng)蟲(chóng)齡之間有兩種關(guān)系，一種是其對(duì)數(shù)值與蟲(chóng)齡呈直線(xiàn)關(guān)系，另一種是其對(duì)數(shù)值與蟲(chóng)齡呈修改指數(shù)曲線(xiàn)關(guān)系；鄧僑等(2015)在駱駝斯氏副柔線(xiàn)蟲(chóng)病傳播媒介西方角蠅Haematobiairritans和截脈角蠅H.titillans的幼蟲(chóng)齡期劃分中也驗(yàn)證了兩種角蠅幼蟲(chóng)的骨化結(jié)構(gòu)測(cè)量值的對(duì)數(shù)值與幼蟲(chóng)齡期數(shù)存在著極顯著的相關(guān)性。綠豆象幼蟲(chóng)各項(xiàng)指標(biāo)的模型擬合中，復(fù)合模型、增長(zhǎng)模型和指數(shù)模型的擬合性都比較好，這與已有相關(guān)報(bào)道一致。

昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)體表感器依據(jù)其形態(tài)可分為毛形感器、刺形感器和錐形感器等多種類(lèi)型；依據(jù)其功能可分為溫度-濕度感受器、化學(xué)感受器、機(jī)械感受器等。綠豆象末齡幼蟲(chóng)頭部感器主要分布在觸角、下顎須、上唇和上顎，類(lèi)型有錐形感器、毛形感器、刺形感器、瓶形感器、板形感器、栓錐形感器及壇形感器共7種。這些感器在一些昆蟲(chóng)的幼蟲(chóng)觸角及口器部分中已有發(fā)現(xiàn)，但形態(tài)不盡相同，孟海林等(2017)發(fā)現(xiàn)篩胸梳爪扣甲Melamotuscribricollis的觸角分布有刺形感器、錐形感器、鉤形感器和圓盤(pán)形感器，下顎須上分布有錐形感器、腔錐形感器和壇形感器，下唇須上分布有錐形感器、腔錐形感器、壇形感器、毛形感器、乳突形感器、凹槽形感器和啞鈴形感器；徐麗麗(2016)發(fā)現(xiàn)溝脛天牛亞科(Lamiinae)7種天牛(光肩星天牛Anoplophoraglabripennis、星天牛A.chinensis、松墨天牛Monochamusalternatus、藍(lán)墨天牛M.guerryi、桑天牛Aprionarugicollis、銹色粒肩天牛A.swainsoni和云斑白條天牛Batoceralineolata)幼蟲(chóng)觸角感器有末梢錐狀感器、錐形感器及深窩感器，下顎須和下唇須上觀察到末梢錐狀感器、板形感器及刺形感器；李霜(2017)研究發(fā)現(xiàn)連草直胸跳甲Agasicleshygrophila幼蟲(chóng)觸角的感器有腔錐形感器、錐形感器、栓錐形感器和B?hm氏鬃毛，下顎須主要有錐形感器和花瓣形感器，下唇須主要有指形感器和錐形感器。

本研究所用綠豆象幼蟲(chóng)均為室內(nèi)恒定條件人工飼養(yǎng)獲得，所以幼蟲(chóng)齡期可能與自然條件下齡期存在一定的差異，昆蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育受多種因素的影響，如溫度、濕度、食物、種群等，這些因素對(duì)綠豆象幼蟲(chóng)蟲(chóng)齡的劃分是否產(chǎn)生影響，本研究方法是否適用于所有環(huán)境條件下的綠豆象幼蟲(chóng)齡期的鑒別還有待于進(jìn)一步研究；綠豆象幼蟲(chóng)頭部感器種類(lèi)較豐富，這些感受器的具體功能及在取食危害過(guò)程中的作用等，還需更多電生理學(xué)及解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果作為證據(jù)。