李曉玲, 陳 立, 方守國(guó)

(1. 長(zhǎng)江大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 湖北荊州 434025; 2. 中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所, 農(nóng)業(yè)蟲(chóng)害鼠害綜合治理研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 北京100101)

紅火蟻Solenopsisinvicta是一種社會(huì)性昆蟲(chóng)，在土壤中建立巢穴，巢穴高度可達(dá)30～40 cm (Vinson, 1997)。蟻后產(chǎn)卵、哺育幼蟲(chóng)、化蛹、羽化、貯存糧食及種群活動(dòng)等行為均發(fā)生在地下巢穴中。蟻巢不僅保護(hù)蟻群不受入侵者的侵害，還提供了一個(gè)對(duì)蟻群生存至關(guān)重要的微氣候調(diào)節(jié)系統(tǒng)(H?lldobler and Wilson, 1990)。螞蟻的筑巢、覓食活動(dòng)能造成土壤結(jié)構(gòu)改變和養(yǎng)分積累，進(jìn)而改變土壤的物理性質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)狀況(Lafleuretal., 2005)。除了土壤的物理性質(zhì)如滲透和濾出特性的改變(Greenetal., 1998)，紅火蟻的建巢活動(dòng)還會(huì)改變土壤的化學(xué)性質(zhì)，如元素富集(Herzogetal., 1976)。蟻巢是螞蟻活動(dòng)的中心場(chǎng)所，蟻群活動(dòng)也可以將自身的一些化學(xué)物質(zhì)帶入巢內(nèi)土壤中：一方面紅火蟻會(huì)主動(dòng)將代謝產(chǎn)物排泄到蟻巢土壤中，另一方面紅火蟻和土壤的頻繁接觸也會(huì)使體表化合物等次生代謝物被動(dòng)地進(jìn)入蟻巢土壤中。例如，Vander Meer和Lofgren (1988) 在紅火蟻巢穴土壤中發(fā)現(xiàn)了紅火蟻表皮烴類化合物。

Chen等(2009)利用正己烷浸提紅火蟻工蟻，用GC-MS鑒定紅火蟻毒液生物堿的主要成分是2-甲基-6-烷基哌啶生物堿混合物：2-甲基-6-十三碳烯基-6-哌啶(C13∶1)，2-甲基-6-十三烷基-6-哌啶(C13∶0)，2-甲基-6-十五碳烯基-6-哌啶(C15∶1)，2-甲基-6-十五烷基-6-哌啶(C15∶0)，2-甲基-6-十七碳烯基-6-哌啶(C17∶1)以及2-甲基-6-十七烷基-6-哌啶(C17∶0)。一頭紅火蟻工蟻的毒囊中含有約10～15 μg的毒液，所以每個(gè)蟻巢都擁有大量的毒液生物堿(Storeyetal., 1991)。紅火蟻利用毒液進(jìn)行防御和殺死獵物(Vander Meeretal., 1980)。紅火蟻極具攻擊性，一旦不小心觸碰其巢穴，就會(huì)有大批紅火蟻出來(lái)進(jìn)行攻擊。在攻擊過(guò)程中，紅火蟻會(huì)釋放出大量的毒液，每頭工蟻每次通過(guò)毒針釋放大約0.66 nL毒液，約占其毒液總含量的3.1% (Haight and Tschinkel, 2003)。紅火蟻棲息于真菌、細(xì)菌等微生物較豐富的巢穴環(huán)境中(Torsvik and Ovreas, 2002)，易受多種真菌和細(xì)菌性病原體的侵染(Allen and Buren, 1974; Evans, 1982)。為了抵御病原菌浸染，紅火蟻和其他社會(huì)性昆蟲(chóng)一樣，會(huì)在24 h內(nèi)將包括螞蟻尸體在內(nèi)的雜物清除出巢穴(Wilson, 1971)。這樣感染真菌的尸體在產(chǎn)孢前被清除，就能有效地阻止分生孢子在蟻巢內(nèi)的傳播。在實(shí)驗(yàn)室給紅火蟻種群接種白僵菌后，工蟻會(huì)在真菌孢子形成之前將螞蟻尸體集中到蟻巢的一個(gè)角落(Storeyetal., 1991)。并且工蟻還用沙子覆蓋尸體，從而限制了分生孢子的擴(kuò)散。除了行為反應(yīng)外，紅火蟻還會(huì)產(chǎn)生具有顯著抗菌活性的毒液生物堿(Blumetal., 1958; Jouvenazetal., 1972; Blum, 1988)。紅火蟻會(huì)在巢穴內(nèi)表面分泌毒液生物堿，對(duì)其生活環(huán)境和幼蟲(chóng)體表等進(jìn)行消毒(Obin and Vander Meer, 1985)；通過(guò)腹部快速振動(dòng)向入侵者噴射毒液滴(Obin and Vander Meer, 1985; Storeyetal., 1991)。所以蟻巢土壤和螞蟻身上可能存在高濃度的生物堿，并發(fā)揮抗菌、抑菌作用。

關(guān)于土壤中生物堿類化合物提取方法的研究比較多，比如用四氫呋喃∶水∶乙腈∶乙酸(50∶30∶20∶1, v/v)混合溶劑提取土壤中的α-茄堿(Jensenetal., 2007)；用正己烷∶丙酮 (3∶1, v/v) 混合溶劑提取土壤中的咔唑類污染物(Mumboetal., 2015)；用含硫酸鎂和氯化鈉的乙腈提取土壤中的阿托品和莨菪堿(Bothetal., 2017)；用甲醇∶甲醇(85∶15, v/v)分步提取土壤中的吡咯西啶類生物堿(Hama and Strobel, 2019)；用1.5 mol/L氫氧化鈉溶液堿化土壤后，接著用氯化正丁酯提取土壤中的馬錢子堿(Starretal., 1995, 1996)；先用1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)整乙醇的pH值到8～9，再用堿性乙醇提取土壤中的苦參堿(郝佳等, 2016)等。土壤pH值影響土壤對(duì)生物堿的吸附能力，比如隨著土壤pH值升高，吸附馬錢子堿的能力增強(qiáng)(Kookanaetal., 1997)。紅火蟻毒液呈弱堿性，而我國(guó)南方土壤主要呈酸性(楊志元, 2016)，毒液生物堿與土壤中的酸性物質(zhì)結(jié)合形成不溶于有機(jī)溶劑的鹽，致使無(wú)法直接用有機(jī)溶劑提取土壤中的生物堿。三乙胺的堿性強(qiáng)于毒液生物堿，可優(yōu)先與酸性物質(zhì)反應(yīng)。利用三乙胺排除酸性物質(zhì)的影響后，就可以用有機(jī)溶劑提取紅火蟻巢穴土中的毒液生物堿。

本研究探討紅火蟻巢穴土壤中的毒液生物堿的提取方法，測(cè)定紅火蟻蟻巢毒液生物堿的含量，研究結(jié)果將有助于后期從微生境角度分析紅火蟻入侵對(duì)土壤生態(tài)環(huán)境的影響，揭示入侵物種對(duì)新入侵地土壤微環(huán)境的適應(yīng)機(jī)制等方面的工作。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1土壤樣品：采自廣州市華南農(nóng)業(yè)大學(xué)東校區(qū)附近草坪和廣州市黃浦區(qū)葡萄園附近草坪的紅火蟻蟻巢的土壤。蟻巢土壤采集方法：隨機(jī)選取4個(gè)紅火蟻蟻巢(各蟻巢之間相距至少5 m)，分別挖取蟻巢深度約15 cm處的土壤各約200 g，放置在蟻巢附近，待螞蟻爬回蟻巢，土壤樣品自然風(fēng)干后，帶回實(shí)驗(yàn)室。在制樣板上碾壓土壤顆粒，過(guò)2 mm孔徑篩，得到直徑<2 mm的蟻巢土壤樣品，用自封袋封裝，備注詳細(xì)采集信息后，保存于4℃冰箱中。按上述方法采集蟻巢周邊3 m處的土壤作為空白對(duì)照，并用于毒液添加回收實(shí)驗(yàn)。

1.1.2主要儀器：萬(wàn)分之一電子天平(AR224CN)、隔膜真空泵(N820.3FT.18)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(R-3HB)、美國(guó)安捷倫公司Agilent Technologies氣相色譜儀7890A(GC)、7890A-5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)、超聲震蕩儀(KQ-100E)。

1.1.3主要試劑：HPLC級(jí)正己烷(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、三乙胺(均為分析純，北京市通廣精細(xì)化工公司)。

1.2 紅火蟻毒液生物堿的獲取和添加毒液生物堿的土壤樣品的制備

稱取5.0 g紅火蟻工蟻冷凍于-20℃冰箱，1 h后取出，用20 mL正己烷浸泡48 h，取出浸提液，加適量無(wú)水硫酸鈉干燥12 h后，用氮?dú)鉂饪s至5 mL，用硅膠柱層析法分離生物堿(Chen and Fadamiro, 2009)。柱層析分離所收集的流分用Agilent 7890A氣相色譜儀進(jìn)行成分分析，最后將收集到的生物堿流分合并，濃縮抽干洗脫溶劑即得紅火蟻毒液生物堿樣品。用毛細(xì)管取極少量毒液生物堿，用正己烷溶解后進(jìn)行GC-FID分析，以檢測(cè)其純度。稱取2.0 g蟻巢周邊土壤樣品于16 mL玻璃樣品瓶中，加入40 μL紅火蟻毒液生物堿樣品，震蕩混勻，使毒液與土壤充分混勻，即完成添加毒液生物堿的土壤樣品制備。

1.3 GC-FID和GC-MS分析

GC-FID分析：檢測(cè)器：FID(火焰離子化檢測(cè)器)；色譜柱：HP-5MS毛細(xì)管柱，規(guī)格30 m×0.32 mm×0.25 μm；進(jìn)樣量：2 μL，無(wú)分流進(jìn)樣；進(jìn)樣口溫度270 ℃，檢測(cè)器溫度280℃。柱溫箱升溫程序：起始溫度50℃，保持1 min，以5℃/min的速率升至100℃，保持0 min，然后以10℃/min升至240℃，保持10 min。

GC-MS分析：參照Liu等(2017)利用GC-MS鑒定紅火蟻毒液生物堿和土壤樣品中的生物堿。GC-MS的色譜柱、柱溫箱升溫程序和進(jìn)樣條件同GC-FID分析。MS的電離方式為EI，電離能量為70 eV，離子源溫度為230℃，質(zhì)量掃描范圍50～500 amu。載氣為氦氣，流速為1 mL/min。

1.4 土壤樣品中生物堿提取方法的優(yōu)化

1.4.1毒液生物堿抽濾提取法：將加入提取溶劑的待測(cè)樣品常溫下浸提8 h后，超聲震蕩15 min；將超聲后的樣品用真空泵抽濾得到第1次回收提取液A；將濾渣再次加入等量的溶劑按上述方法提取，并重復(fù)3次，依次得到第2次回收提取液B，第3次回收提取液C，第4次回收提取液D；將上述4種提取液分別用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干，加入色譜級(jí)正己烷定容至1 mL，并過(guò)0.45 μm有機(jī)濾膜至1.5 mL樣品瓶中，用于GC-FID分析。

1.4.2提取溶劑篩選：選擇以下5種極性不同的溶劑進(jìn)行比較，正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮和甲醇。取4 mL溶劑加入到1.2節(jié)中的土壤樣品中，同時(shí)分別向樣品中添加1 mL三乙胺，利用1.4.1節(jié)方法抽濾提取樣品中的毒液生物堿。計(jì)算不同溶劑處理的毒液總生物堿的回收率，篩選最佳提取溶劑。每種溶劑處理設(shè)4個(gè)重復(fù)。

1.4.3三乙胺添加方法：取4 mL正己烷加入到1.2節(jié)中的土壤樣品中，同時(shí)分別向樣品中添加0.125, 0.25, 0.5, 1和2 mL三乙胺，利用1.4.1節(jié)方法抽濾提取樣品中的毒液生物堿。以合成的順式2-甲基-6-十一烷基哌啶(cis-C11)為標(biāo)準(zhǔn)品用外標(biāo)法(黃敏興等, 2019)定量計(jì)算土壤樣品中的生物堿含量。計(jì)算不同體積的三乙胺處理的毒液生物堿的回收率，篩選出三乙胺的最佳添加體積。實(shí)驗(yàn)重復(fù)4次。

1.5 紅火蟻蟻巢土生物堿測(cè)定方法

稱取10.0 g蟻巢土壤樣品于50 mL離心管中，加入20 mL正己烷和5 mL三乙胺，采用1.4.1節(jié)中提取方法提取毒液生物堿，用于GC-FID分析。用外標(biāo)法進(jìn)行定量生物堿含量。用合成的cis-C11作為標(biāo)準(zhǔn)品，稀釋成3.125～400 ng/μL共8個(gè)濃度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)品的濃度(X)與色譜峰面積(Y)通過(guò)線性回歸分析建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出土壤樣品中的生物堿濃度。每個(gè)蟻巢土壤樣品重復(fù)4次。

1.6 數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2007及SPSS 20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，并進(jìn)行One-way ANOVA統(tǒng)計(jì)分析，以Tukey氏HSD進(jìn)行顯著水平檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 生物堿標(biāo)準(zhǔn)曲線和紅火蟻工蟻毒液生物堿成分鑒定

基于生物堿標(biāo)準(zhǔn)品濃度(X)與色譜峰面積(Y)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，通過(guò)線性回歸建立的生物堿標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=11.476X+8.6009,R2=0.9999(圖1)，說(shuō)明3.125～400 ng/μL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系非常好。

紅火蟻工蟻體內(nèi)毒液生物堿提取的氣相色譜圖顯示(圖2)，紅火蟻工蟻毒液生物堿的主要成分為trans-C13∶1 (峰2)、trans-C13 (峰3)、trans-C15∶1(峰4)和trans-C15 (峰5)，次要成分為trans-C11 (峰1)。選取其中4種主要成分用于定量分析。

圖1 cis-C11標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 1 The standard curve of cis-C11

圖2 紅火蟻工蟻毒液生物堿氣相色譜圖Fig. 2 Gas chromatogram of venom alkaloids of workers of Solenopsis invicta1: trans-C11; 2: trans-C13∶1; 3: trans-C13; 4: trans-C15∶1; 5: trans-C15.

2.2 生物堿提取方法優(yōu)化

2.2.1不同有機(jī)溶劑對(duì)土壤毒液生物堿的提取效率：正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇等5種不同極性的有機(jī)溶劑作為提取溶劑，并添加1 mL三乙胺到土壤樣品中，采用抽濾法提取毒液生物堿。正己烷的提取效率最高，生物堿的回收率為65.50%±3.55%;丙酮的提取效率最低,生物堿的回收率為49.73%±3.32%；但不同溶劑處理生物堿回收率在0.05水平上無(wú)顯著性差異(F4,15=1.407,P=0.279)(圖3)。

2.2.2三乙胺的添加量對(duì)土壤毒液生物堿的提取回收率的影響：選取正己烷作為提取溶劑，4種毒液生物堿的第1次提取回收率隨著三乙胺添加量的增加而提高。當(dāng)加入三乙胺的量為1 mL時(shí)，4種生物堿的提取回收率達(dá)到最大，繼續(xù)增加三乙胺的添加量到2 mL，提取回收率無(wú)顯著性變化(P>0.05)(圖4: A)。

將4次提取所得的提取回收率相加，得到總提取回收率。trans-C13∶1,trans-C13和trans-C15∶1這3種生物堿的總提取回收率沒(méi)有隨著三乙胺添加量的增加而發(fā)生顯著變化，它們的總提取回收率都集中在55%～70%之間。trans-C15的總提取回收率在0.125 mL時(shí)最低，約為52%；而當(dāng)三乙胺的添加量為0.25 mL及以上時(shí)，總提取回收率達(dá)到95%～120%之間(圖4: B)。

將4種生物堿的含量相加，得到總生物堿的含量。總生物堿的第1次提取回收率隨三乙胺量的增加而增加。當(dāng)三乙胺為1 mL時(shí)，總生物堿第一次提取回收率均可達(dá)62%～69%。因此可以選取4 mL正己烷+1 mL三乙胺來(lái)提取2 g土壤中的毒液生物堿，且只需要進(jìn)行1～2次提取即可提取到大部分生物堿(表1)。

2.3 蟻巢土壤中生物堿含量

紅火蟻蟻巢生物堿種類主要為trans-C13∶1,trans-C13,trans-C15∶1和trans-C15。在4巢土樣中，trans-C15∶1含量顯著高于其他3種生物堿(P<0.05)，含量為10.13±0.51 μg/g；trans-C13∶1的含量次之，為6.24±0.33 μg/g；trans-C13和trans-C15含量最低，分別為3.06±0.20 μg/g和2.85±0.36 μg/g，兩者之間沒(méi)有顯著差異(P>0.05)(圖5)。蟻巢土壤中的總生物堿含量為22.28±1.13 μg/g。

圖3 不同溶劑對(duì)總生物堿回收率的影響Fig. 3 Effect of different solvents on recovery rate of alkaloids圖中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，柱上不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05， Tukey氏HSD檢驗(yàn));圖4和5同。Data in the figure are mean±SE. Different lowercase letters above bars indicate significant difference (P<0.05, Tukey’s HSD test). The same for Figs. 4 and 5.

圖4 三乙胺添加量對(duì)4種生物堿第1次提取回收率(A)和總回收率(B)的影響Fig. 4 Effect of additive amount of triethylamine on the recovery rate of the first extraction (A)and total recovery rate (B) of four alkaloids

表1 4次三乙胺抽濾提取的總生物堿回收率(%)Table 1 Recovery rate (%) of total alkaloids with four triethylamine extractions

表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤;同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母分別表示差異顯著(P<0.05, Tukey氏HSD檢驗(yàn))。Data in the table are mean±SE. Different lowercase letters following the data in the same column indicate significant differences (P<0.05, Tukey’s HSD test).

圖5 紅火蟻巢穴土壤中4種主要生物堿的含量Fig. 5 Contents of four major alkaloids in the soil of Solenopsis invicta nest

3 討論

生物堿的提取方法主要有超聲提取法、雙水相萃取法、加速溶劑提取法、半仿生提取法等(張林等, 2017)。我國(guó)南方土壤主要呈酸性，而紅火蟻毒液生物堿的主要成分呈弱堿性。在添加回收實(shí)驗(yàn)時(shí)，由于添加的毒液生物堿可能與土壤中的腐殖酸等酸性物質(zhì)結(jié)合，生成不易溶于有機(jī)溶劑的鹽，導(dǎo)致生物堿提取效率低甚至提取不出來(lái)，因此需要在提取溶劑中加入三乙胺。三乙胺的堿性強(qiáng)于毒液生物堿，可以優(yōu)先與土壤中的酸性物質(zhì)反應(yīng)，使土壤中的毒液生物堿呈游離態(tài)，很容易用有機(jī)溶劑提取出來(lái)。我們?cè)诒容^4次提取的回收率時(shí)發(fā)現(xiàn)，第1次提取回收率隨著三乙胺添加量的增加而提高；當(dāng)三乙胺的添加量達(dá)到1 mL時(shí)，通過(guò)1次提取就可回收大多數(shù)的生物堿。因此，當(dāng)三乙胺與有機(jī)溶劑體積比為1∶4時(shí)，通過(guò)1～2次提取即可提取到土壤中的大部分生物堿。正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇等5種不同極性的有機(jī)溶劑作為提取溶劑時(shí)，提取效果相差不大，說(shuō)明這5種溶劑都可以用作提取巢穴土壤中生物堿的提取溶劑。但是，丙酮和甲醇的極性、溶解性都比較強(qiáng)，導(dǎo)致土壤中的其他雜質(zhì)的提取率也比較高，不利于生物堿成分的純化，而且用丙酮作為溶劑易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象。

本研究結(jié)果表明,在紅火蟻巢穴土壤中，毒液生物堿trans-C13∶1和trans-C15∶1的含量顯著高于其他兩種生物堿，4次提取實(shí)驗(yàn)測(cè)得的總生物堿含量大概為22 μg/g;因添加回收實(shí)驗(yàn)所得的總生物堿的回收率最高為71.51%，所以蟻巢土壤中總生物堿含量理論值大概為31 μg/g。在采集巢穴土壤樣品過(guò)程中，不可避免地破壞蟻巢，引起大量工蟻的防御反應(yīng)，有些工蟻可能會(huì)釋放毒液到土壤中，使得所測(cè)巢穴土壤生物堿含量要高于實(shí)際含量。所以綜合提取效率和工蟻防御反應(yīng)這兩方面的影響，我們測(cè)定的蟻巢土壤生物堿含量可能非常接近其真實(shí)值。

紅火蟻生物堿具有廣泛的殺菌活性，稀釋50倍的生物堿能有效地抑制化膿性微球菌Micrococcuspyogenes、化膿性鏈球菌Streptococcuspyogenes、大腸桿菌Escherichiacoli、干酪乳桿菌Lactobacilluscasei等多種真菌(Blumetal., 1958)。從紅火蟻毒液分離出的哌啶和脫氫哌啶類生物堿對(duì)終極腐霉Pythiumultimum的菌絲生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，也能抑制其孢子囊的萌發(fā)，其中哌啶生物堿的抑菌EC50為17.0 μg/mL，抑制孢子萌發(fā)EC50為12.3 μg/mL (Lietal., 2012)。毒液中的哌啶和脫氫哌啶類生物堿還能抑制番茄細(xì)菌性潰瘍病菌Clavibactermichiganensissubsp.michiganensis的生長(zhǎng)，其中哌啶生物堿的抑菌EC50為31.5 μg/mL，且在75.3 μg/mL的濃度下對(duì)該菌有完全抑制作用(Lietal., 2013)。合成的哌啶生物堿成分在低濃度下具有抑制多種細(xì)菌生長(zhǎng)的能力(Urbani and Kannowsk, 1974)；對(duì)金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus的殺菌濃度為4～12 μg/mL，對(duì)大腸桿菌E.coli的殺菌濃度為20～40 μg/mL (Jouvenazetal., 1972)。合成的脫氫哌啶生物堿成分2-甲基-6-十八烷基-Δ1,6-哌啶具有體外抗真菌活性，對(duì)新生隱球菌Cryptococcusneoforman的最低抑制濃度為6.6 μg/mL，對(duì)白色念珠菌Candidaalbicans的最低抑制濃度為12.4 μg/mL(Yanetal., 2017)。很顯然，所測(cè)得的蟻巢土壤生物堿含量在抑菌活性濃度范圍內(nèi)。

螞蟻對(duì)土壤微生物群落的影響及螞蟻與真菌間的關(guān)系已成為社會(huì)昆蟲(chóng)學(xué)家、生態(tài)學(xué)家的研究熱點(diǎn)。螞蟻巢穴內(nèi)微生物多樣性的研究均顯示，蟻巢土壤微生物的豐富度及多樣性均高于巢外對(duì)照土壤(Dauber and Wolters, 2000; Zettleretal., 2002; Boultonetal., 2003; Bairdetal., 2007)。紅火蟻巢穴中的毒液生物堿可能會(huì)參與調(diào)節(jié)蟻巢土壤微生物的豐富度和多樣性水平。巢穴土壤中的微生物體系具有重要的化學(xué)轉(zhuǎn)化作用，反過(guò)來(lái)又影響螞蟻的種群活動(dòng)。所以可以斷言，紅火蟻巢穴土壤中的毒液生物堿對(duì)紅火蟻在新的生境中的定殖和入侵有重要的促進(jìn)作用。