祁偉亮，王 萍，王炬超，陳卓緣，李 蘇，鄒婷婷，楊建榮，任迎虹

(成都師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，四川 成都 611130)

桑樹(MorusalbaL.)屬?？粕僦参?，在我國具有豐富的種質(zhì)資源，我國是世界上最大的桑樹種植國和繭絲生產(chǎn)國[1]。四川蠶桑產(chǎn)業(yè)歷史悠久，亦是四川省重點發(fā)展的 “十大” 農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)之一[2]。桑葉自古也被譽為“神仙葉”，在《神農(nóng)本草經(jīng)》、《本草綱目》等古籍皆有記載，因其含有 γ- 氨基丁酸(γ- Aminobutyric acid, GABA)、l - 脫氧野尻霉素(DNJ)、生物堿、黃酮類及多糖等活性因子，因而具有很好的補血、益肝通氣、疏風(fēng)散熱、降壓利尿、降脂降糖、安神益腦等功效[3-4]。GABA作為一種非蛋白質(zhì)氨基酸，1949年被 Stewated 等[5]首次從馬鈴薯莖塊發(fā)現(xiàn)，隨后科學(xué)家對GABA的研究發(fā)現(xiàn)，動植物和微生物中皆有存在。同時在藻類、蘚類、蕨類、真菌、細菌，有花植物的葉、開花器官、果仁等均報道有GABA的分布，但是在桑葉中GABA含量居高[6-7]。王娜等[8]等人對廣7365 、會澤7號、陜7506 、寧夏2號、湖桑32號五個桑樹品種的不同葉位GABA含量進行分析表明，桑樹不同品種及葉位的GABA含量存在明顯差異[9]。

四川桑種質(zhì)資源豐富，桑資源的利用仍局限于蠶桑養(yǎng)殖，未能充分有效利用桑的藥食兩用價值，實現(xiàn)桑資源的深度開發(fā)。本研究利用HPLC法對12個桑品種不同部位的GABA含量進行定量分析，為桑葉資源的高效利用提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 材料

供試桑品種由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所和四川省涼山州德昌蠶桑辦提供，分別為品種 1：kong - jup，品種 2：大白棋，品種 3：大葉野生子，品種 4：果桑，品種 5：荷葉白1號，品種 6：湖桑 32，品種 7：加紅2號，品種 8：九龍拐，品種 9：陵川9號，品種 10：乳桑，品種 11：陽山桑，品種 12：云桑一號。

分別采取不同桑品種上葉位(第 1、2、3 葉)、中間葉位(第 6、7、8 葉)、下葉位(倒數(shù)第 2、3、4 葉)的葉片。參考史正琴等[10]的方法測定 GABA，HPLC 條件為色譜柱：反 C18 (4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動相中乙腈與 0.1% 乙酸的體積比為 55：45，柱溫 30℃，流速 1mL/min，檢測波長 254nm，進樣量 10 μL。

1.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法

測定試驗數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值，采用Excel和SPSS軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 GABA含量檢測的線性回歸方程和HPLC圖譜

用FMOC-Cl對GABA標(biāo)準(zhǔn)樣品進行柱前衍生反應(yīng)，GABA含量標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為 Y=11528.9 X-126402(R2=0.9988)，其線性取值范圍為0～200 μg/g。史正琴等[10]測得GABA液相色譜的保留時間約為4.35 min時間，本研究采用類似方法測得標(biāo)準(zhǔn)品和桑葉樣品中GABA的保留時間約為5.17 min，有明顯色譜吸收峰，與史正琴等[10]的研究基本一致，因此可采用此法測定桑葉樣品中GABA的含量(圖1)。

2.2 不同桑品種上葉位GABA 含量分析

本研究對12個桑品種的上葉位GABA含量進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，結(jié)果表明：不同桑樹品種之間的上葉位GABA含量存在顯著性差異(p<0.05)，變幅為3.05～5.52 mg/g。其中大葉野生子GABA含量高達5.52 mg/g，顯著高于其他品種，相比于大白棋高出2.47mg/g(圖 2)。

2.3 不同桑品種中葉位GABA含量比較

本研究對 12 個桑品種的中葉位GABA含量進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，結(jié)果表明：不同桑樹品種之間的上葉位GABA含量存在顯著性差異(p<0.05)，變幅為 2.28 ～ 5.28 mg/g，大葉野生子中葉位GABA含量為最高，大白棋GABA含量為最低，兩者相比較，大葉野生子中葉位的GABA含量約為大白棋的2.32倍(圖3)。12個桑品種中葉位GABA的含量從高到低依次為大葉野生子>乳桑>云桑一號>陽山桑>kong-jup>九龍拐>荷葉白1號>加紅2號>湖桑32>果桑>陵川9號>大白棋。

圖1 GABA 標(biāo)準(zhǔn)品(a)和桑葉樣品(b)HPLC 圖

圖2 不同桑品種上葉位 GABA 含量測定

2.4 不同桑品種下葉位GABA含量比較

本研究對12個桑品種的下葉位GABA含量進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，結(jié)果表明：不同桑樹品種之間的上葉位GABA含量存在顯著性差異(p<0.05)，變幅為2.05～4.81 mg/g，其中大葉野生子的GABA含量，顯著高于其余品種，為4.81 mg/g，是其余各品種的1.75～2.47倍。陵川9號和果桑在下葉位含量最低，兩者間無顯著差異(圖4)。下葉位各品種GABA含量從高到低的順序依次為大葉野生子>陽山桑>荷葉白1號>九龍拐>乳桑>湖桑32>Kong-jup>加紅2號>云桑一號>大白棋>陵川9號>果桑。

圖3 不同桑品種中葉位 GABA 含量測定

圖4 不同桑品種下葉位 GABA 含量測定

3 討論

本研究對12個桑品種上、中、下，三個葉位的GABA含量進行測定。結(jié)果表明，不同桑樹品種及葉位之間的GABA含量均存在顯著性差異(p<0.05)，并且從上葉位到下葉位，GABA含量呈下降趨勢。這與孫國霞等[11]和陳恒文等[12]的研究一致。推測當(dāng)植物體內(nèi)的 L-谷氨酸不能轉(zhuǎn)化成為谷氨酰胺時，蛋白質(zhì)的水解作用有所增強，植物細胞對于谷氨酰胺的需求減少， L-谷氨酸將轉(zhuǎn)變成GABA形成氮暫時貯存狀態(tài)，在氨基酸和蛋白質(zhì)合成時加以利用。而頂稍作為植物生長最旺盛的部位之一，著生的芽和嫩葉代謝旺盛，對于氨基酸和蛋白質(zhì)的需求量、代謝量較大。這可能是上葉位GABA含量高于中、下葉位的主要原因。