曲 娜，劉 迪，2**，王 皓，王靜文，劉玉冰，徐鐵金，胡 雪

[1.延邊大學農(nóng)學院，吉林 延吉 133002；2.延邊大學農(nóng)學院食（藥）用真菌研究所，吉林 延吉 133002]

珊 瑚 狀 猴 頭 菌 [Hericium coralloides（Scop.）Pers.]，其屬于擔子菌亞門（Basidiomycetes） 傘菌綱（Agaricomycetes） 紅 菇 目（Russulales） 猴 頭 菌 科（Hericiaceae） 猴頭菌屬（Hericium）[1]。珊瑚狀猴頭菌含有多種人體必須氨基酸、不飽和脂肪酸、以及維生素等，是十分美味的珍稀食（藥）用菌[2]。圖力古爾等[3]在2010年對長白山野生珊瑚狀猴頭菌完成了馴化栽培；張鵬等[4]對珊瑚狀猴頭菌子實體進行了研究；針對長白山區(qū)珊瑚狀猴頭菌的生態(tài)栽培技術(shù)，吳秀玲等[5]進行了研究。隨著社會的發(fā)展，越來越多的人注重食品保健，市場上也更需要珊瑚狀猴頭菌這樣的藥食兼用菌，國內(nèi)學者對珊瑚狀猴頭菌的多糖進行了大量的研究[6-11]。由于野生珊瑚狀猴頭菌有性繁殖時間過長，而無性繁殖約20 d左右，因此篩選珊瑚狀猴頭菌的最佳培養(yǎng)基配方具有重要的研究意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

菌種：猴頭1號，延邊大學農(nóng)學院食（藥）用真菌研究所保藏菌種。

1.2 基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方

葡萄糖 20 g·L-1、蛋白胨 2 g·L-1、MgSO40.5 g·L-1、瓊脂 20 g·L-1。

2 因素分析

2.1 不同碳源對珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長的影響

在培養(yǎng)基 （蛋白胨 2 g·L-1、MgSO40.5 g·L-1、瓊脂20 g·L-1）中，分別將20 g·L-1的葡萄糖、淀粉、蔗糖、乳糖以及甘露醇作為碳源。另設(shè)1組對照組（CK），其中不添加任何碳源，每個處理重復(fù)5次。采取平板培養(yǎng)法，每個培養(yǎng)皿倒入35 mL培養(yǎng)液。將大小約為0.5 mm長勢良好的菌塊用打孔器接種于平板中央，并于25℃恒溫箱中進行暗培養(yǎng)。菌絲生長后，用十字交叉法測定菌落直徑并記錄菌落生長速度、菌絲長勢、干重和邊緣等特征。采取Excel以及SPSS 22.0整理和分析數(shù)據(jù)。

2.2 不同氮源對珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長的影響

在培養(yǎng)基 （葡萄糖 20 g·L-1、MgSO40.5 g·L-1、瓊脂20 g·L-1）中，分別將2 g·L-1的酪蛋白胨、酵母膏、氯化銨、硝酸銨、硝酸鉀作為氮源。另設(shè)1組對照組（CK），其中不添加任何氮源，其余試驗方法，測定項目及數(shù)據(jù)分析同2.1。

2.3 不同無機鹽對珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長的影響

在培養(yǎng)基 （葡萄糖 20 g·L-1、蛋白胨 2 g·L-1、瓊脂20 g·L-1）中，分別添加0.5 g·L-1的MgSO4、CaSO4、ZnSO4和MnSO4的無機鹽，另設(shè)1組對照組（CK），其中不添加任何無機鹽。其他試驗方法，測定項目及數(shù)據(jù)分析同2.1。

2.4 正交試驗

采用L9（33）正交設(shè)計設(shè)定試驗因素與水平見表1，從單因素分析中的最佳碳源、氮源、無機鹽中選取各因素之間的最佳組合，便于選取最適珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長的培養(yǎng)基配方。其余試驗方法、步驟、測定項目同2.1。

表1 正交試驗因素與水平Tab.1 Factors and levels in orthogonal test

3 結(jié)果與分析

3.1 不同碳源對珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長的影響

不同碳源對菌絲體生長的影響見表2。

表2 不同碳源對珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長的影響Tab.2 Effects of different carbon sources on mycelia growth of Hericium coralloides

從表2可以看出，珊瑚狀猴頭菌菌絲體在不同碳源中均可生長，在以葡萄糖為碳源時，菌絲生長勢最優(yōu)且干重最重，為1.7 mg，菌絲生長速度最快。綜上所述，適合珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長的最佳碳源為葡萄糖，其次為甘露醇。

3.2 不同氮源對珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長的影響

不同氮源對菌絲體生長的影響見表3。

表3 不同氮源對珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長的影響Tab.3 Effects of different nitrogen sources on mycelia growth of Hericium coralloides

從表3可看出，珊瑚狀猴頭菌在以酵母膏為氮源時，菌絲生長勢最優(yōu)且干重最重，為23.6 mg，明顯高于其余處理，但菌絲長速與酪蛋白胨并無明顯差異。綜上所述，最適合珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長的氮源為酵母膏，其次為酪蛋白胨。

3.3 不同無機鹽對珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長的影響不同無機鹽對菌絲體生長的影響見表4。

從表4可看出，珊瑚狀猴頭菌菌絲體在以CaSO4為無機鹽時，菌絲體生長速度及生長勢最佳，菌絲體粗壯，菌絲邊緣整齊，干重最重，為1.7 mg。綜上所述，最適合珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長的無機鹽為CaSO4，其次是MgSO4。

表5 L9（33）正交試驗結(jié)果Tab.5Results of L9（33）orthogonal test

3.4 正交試驗

L9（33）正交試驗結(jié)果與極差分析見表5。

如表5所示，A、B、C因素的極差值分別為1.14、0.67、0.95，所以對菌絲體干重的影響程度為葡萄糖＞CaSO4＞酵母膏。因此影響菌絲干重的重要因素是葡萄糖。A3B2C1是珊瑚狀猴頭菌菌絲生長和發(fā)育的最佳組合，即培養(yǎng)基最佳比例為葡萄糖25 g·L-1、酵母膏 2.5 g·L-1、CaSO40.3 g·L-1、瓊脂 20 g·L-1。

4 結(jié)論

通過正交試驗研究表明，珊瑚狀猴頭菌菌絲生長的最佳培養(yǎng)基配為葡萄糖25 g·L-1、酵母膏2.5 g·L-1、CaSO40.3 g·L-1、瓊脂 20 g·L-1。

通過單因子方差明確了影響菌絲干重的3個因素，最適宜猴頭菌菌絲生長的碳源、氮源、無機鹽分別為葡萄糖、酵母膏、硫酸鈣。