高冬

摘 要：采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)研究提取溫度、提取次數(shù)、提取時(shí)間以及料水比對蛹蟲草中蟲草素含量測定的影響，得出較優(yōu)的前處理?xiàng)l件。結(jié)果表明，最佳前處理?xiàng)l件為：提取溫度100 ℃，提取次數(shù)2次，料水比為1∶100，提取時(shí)間120 min。

關(guān)鍵詞：蛹蟲草;蟲草素;高效液相色譜

Abstract：The orthogonal test design was used to study the influence of extraction temperature， extraction times， extraction time and the ratio of material to water on the determination of cordycepin content in Cordyceps militaris. The results showed that the best pretreatment conditions were： extraction temperature 100 ℃， extraction times 2 times， material water ratio 1∶100， extraction time 120 minutes.

Key words：Cordyceps Militaris; Cordycepin; High performance liquid chromatography

蛹蟲草，又稱北蟲草，是一種子囊菌，通過異宗配合進(jìn)行有性生殖，是一種具有有效抗癌活性的天然產(chǎn)物[1]，并于2009年通過國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會批準(zhǔn)為新資源食品[2]。隨著人們對蛹蟲草了解的不斷深入，對人工蛹蟲草栽培技術(shù)的不斷優(yōu)化，蛹蟲草的營養(yǎng)價(jià)值得到了越來越多人的認(rèn)可和青睞。蟲草素是具有抗菌活性的一種核苷類物質(zhì)，也是蛹蟲草價(jià)值的重要量化指標(biāo)之一，因此便捷、準(zhǔn)確的前處理?xiàng)l件對檢測蟲草素具有重要意義。目前已有不少學(xué)者做過相關(guān)試驗(yàn)，因原料或設(shè)備等原因沒有進(jìn)行整體比較，本文在前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)，綜合分析溫度、提取次數(shù)、時(shí)間和料水比的最佳條件。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 菌株

蛹蟲草來自沈陽師范大學(xué)特種菌業(yè)研究。

1.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品

蟲草素標(biāo)準(zhǔn)品購自美國sigma公司（產(chǎn)品純度大于99%）。

1.2 儀器

高效液相色譜儀（配VWD檢測器），Agilent公司（型號1260）;超聲波清洗器，Prima公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

配制蟲草素標(biāo)準(zhǔn)溶液（美國sigma公司）濃度分別為10、20、30、50 μg·mL-1和100 μg·mL-1，按照1.3.4的條件進(jìn)行測試，并以蟲草素濃度為橫坐標(biāo)，吸收峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[3]。

1.3.2 樣品測定方法

將粉碎并過篩后的蛹蟲草粉末加入蒸餾水，并超聲提取后冷卻至室溫，定容之后經(jīng)4 000 r·min-1離心10 min，并取上層清液過0.22 μm水相濾膜，濾液待上機(jī)測定。

1.3.3 正交因素水平設(shè)計(jì)

正交試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)如表1所示。

1.3.4 液相色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18柱，4.6 mm×150 mm，5 μm;流動(dòng)相：甲醇+水=25+75;流速：1.0 mL·min-1;柱溫：30 ℃;波長：260 nm;進(jìn)樣量：10 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

10、20、30、50 μg·mL-1和100 μg·mL-1系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示，可得峰面積Y與蟲草素的濃度X之間的曲線關(guān)系為Y=64.135 535 9X-50.999 217。

可根據(jù)圖1所示標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算不同前處理?xiàng)l件下提取出的樣品中的蟲草素。

2.2 結(jié)果的比較

按照表1的因素水平開展正交試驗(yàn)，并根據(jù)圖1中的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算單位樣品中的蟲草素含量，所得結(jié)果如表2所示。

由表2知，4種因素對蟲草素含量結(jié)果的影響程度依次是D>C>A>B，4種因素的最優(yōu)組合應(yīng)為A3B2C2D3，即提取溫度100 ℃，提取次數(shù)2次，料水比為1∶100，提取時(shí)間120 min，此組合參數(shù)不在正交試驗(yàn)之列，采用此組合條件做驗(yàn)證試驗(yàn)，得到蟲草素含量為3 735 mg·kg-1，大于正交試驗(yàn)表中的任一組合，為最優(yōu)組合。

3 結(jié)論

本研究采用4因素3水平正交試驗(yàn)對蟲草素含量測定方法的前處理進(jìn)行了優(yōu)化，確定最優(yōu)條件為提取溫度100 ℃，提取次數(shù)2次，料水比為1∶100，提取時(shí)間120 min。

參考文獻(xiàn)：

[1]中華人民共和國國家衛(wèi)生部.關(guān)于批準(zhǔn)蛹蟲草為新資源食品的公告（2009年第3號）[EB/OL].（2009-03-16）[2020-03-04]. http：//www.gov.cn/gzdt/2009-03/18/content_1262018.htm.

[2]劉彥威，劉 娜，劉利強(qiáng).冬蟲夏草有效成分的研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2004，25（3）：15-17.

[3]馬麥艷，張相鋒，焦子偉.蛹蟲草主要成分蟲草素、腺苷提取方法對比[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2019，739（5）：228-230，234..