喬宇航 ，高春華，袁子民*，王 靜，朱春璐，郭 鑫，謝鑫榮

（1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600；2.錦州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 錦州 121001）

白芷具有解表散寒，祛風(fēng)止痛等功效，主要用于感冒頭痛、瘡瘍腫痛等癥狀。其古代記載有酒浸、酒蒸、酒炒、醋制、鹽水炒等多種炮制方法[1]，但現(xiàn)代很少應(yīng)用。酒燉白芷為2015 版《中國(guó)藥典》一部收載的成方制劑都梁丸處方中的君藥[2]，該制劑臨床主要用于風(fēng)寒瘀血阻滯脈絡(luò)所致的頭痛治療?，F(xiàn)代研究表明白芷主要含有香豆素、揮發(fā)油等活性成分，且均有鎮(zhèn)痛作用[3-5]。白芷酒燉炮制過(guò)程中由于長(zhǎng)時(shí)間受熱及輔料的作用，可能對(duì)其活性成分產(chǎn)生影響，課題組前期已對(duì)香豆素類成分進(jìn)行了研究[6-7]，因此，本文主要采用HS-SPME-GC-MS 技術(shù)對(duì)白芷酒燉前后的揮發(fā)性成分進(jìn)行研究，以期為都梁丸的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及白芷酒燉炮制機(jī)理的深入研究提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

安捷倫氣相質(zhì)譜儀Agilent6890/5973 GC-MS（Hewlett-Packard 公司）；手動(dòng)固相微萃取（SPME）進(jìn)樣裝置（德國(guó) IKA 公司）；頂空瓶（15 mL）；65 μm PDMS/DVB 萃取纖維頭（Supelco 公司）；白芷（祁白芷）購(gòu)于河北安國(guó)，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)李峰教授鑒定為傘形科植物白芷Angelicae Dahuricae Radix（Fisch.ex Hoffm.） Benth.et Hook.f.的干燥根；黃酒（鎮(zhèn)江恒順酒業(yè)有限公司，批號(hào)：20171102）；酒燉白芷[8]（自制，黃酒加入量為20%，燜潤(rùn)時(shí)間為0.5 h，隔水蒸制時(shí)間為5 h，干燥，即得）。

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定條件

2.1.1 氣相色譜與質(zhì)譜條件 GC 條件：初始溫度為50 ℃，以10 ℃/min 升溫至230 ℃。HP-5MS 石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm），進(jìn)樣口溫度230 ℃，載氣為99.99% He，載氣流速：0.8 mL/min；不分流進(jìn)樣。

MS 條件：EI 源；離子源溫度230 ℃，電離能量70eV；四級(jí)桿溫度150 ℃；倍增管電壓1.2kV；掃描質(zhì)量范圍35～550 m/z。

2.1.2 頂空進(jìn)樣微萃取條件 頂空固相微萃取的最佳條件為：取生白芷樣品粉末（過(guò)5 號(hào)篩）約1.0 g，精密稱定，置15 mL 頂空瓶中，插入裝有65 μm PDMS/DVB萃取纖維頭的手動(dòng)進(jìn)樣器，60 ℃下預(yù)平衡10 min，萃取20 min 取出，立即插入色譜儀進(jìn)樣口（溫度230 ℃）；解吸5 min。黃酒、酒燉白芷實(shí)驗(yàn)條件同上。

2.2 重復(fù)性試驗(yàn) 按2.1.1 項(xiàng)條件操作，重復(fù)進(jìn)樣分析6 次，以白芷生品、白芷酒燉品揮發(fā)性成分的總峰面積為考察指標(biāo)，在相同積分條件下，計(jì)算其RSD 均＜2.0%，表明該方法重復(fù)性良好，適用于白芷酒燉前后揮發(fā)性成分的分析。

3 結(jié)果

通過(guò)化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理并通過(guò)峰面積歸一化法對(duì)白芷生品與酒燉品的總離子流圖中各組分的相對(duì)百分含量進(jìn)行計(jì)算，然后使用Nist 05 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù)對(duì)各峰的質(zhì)譜圖進(jìn)行檢索，確定各個(gè)組分。在白芷生品、酒制品分別分離出53 和32 種成分，分別鑒定出36 和26 種成分。根據(jù)HS-SPME-GC-MS 結(jié)果，從白芷生品中初步檢測(cè)出53 個(gè)峰，鑒定出36 個(gè)成分；從白芷酒燉中檢測(cè)出32 個(gè)峰，鑒定出26 個(gè)成分。酒燉后增加12 種成分，消失了22 種成分，二者共有成分14 種，含量升高的有6 種，含量降低8 種。其中單萜類化合物（C10H16）有14 種（生白芷10 種，酒燉白芷7 種，共有3 種），倍半萜類化合物（C15H24）有8 種（生白芷8 種，酒燉白芷4 種，共有4 種）。生白芷與酒白芷共有揮發(fā)性成分14種，分別為β-月桂烯、α-水芹烯、γ-松油烯、δ-欖香烯、α-愈創(chuàng)木烯、石竹烯等。

3.1 白芷生品揮發(fā)性成分總離子流 見(jiàn)圖1。

圖1 白芷生品揮發(fā)性成分總離子流圖

3.2 白芷酒燉品揮發(fā)性成分總離子流 見(jiàn)圖2。

圖2 白芷酒燉品揮發(fā)性成分總離子流圖

3.3 白芷酒燉前后主要揮發(fā)性成分及相對(duì)含量 見(jiàn)表1。

表1 白芷酒燉前后主要揮發(fā)性成分及相對(duì)含量

表1 白芷酒燉前后主要揮發(fā)性成分及相對(duì)含量（續(xù)）

3.4 α-蒎烯、β-水芹烯、莰烯可能的轉(zhuǎn)化 見(jiàn)圖3。

圖3 α-蒎烯、β-水芹烯、莰烯可能的轉(zhuǎn)化圖

4 討論

由于白芷中揮發(fā)油含量較低，酒燉后揮發(fā)性成分損失較多，將樣品采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油需樣品量較大，因此本實(shí)驗(yàn)采用頂空固相微萃取技術(shù)萃取揮發(fā)性成分，無(wú)需溶劑、需樣量較少、測(cè)定時(shí)間短、選擇性高，利于對(duì)低含量樣品的快速分析。實(shí)驗(yàn)中對(duì)頂空萃取溫度（40、50、60、70、80 ℃）進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)溫度超過(guò)60 ℃后揮發(fā)油成分的數(shù)量及歸一化總面積均明顯降低，故選擇60 ℃作為頂空萃取溫度；在對(duì)三種萃取頭（65 μm PDMS/DVB、75 μm CAR/PDMS、100 μm PDMS）選擇研究中發(fā)現(xiàn)65 μm PDMS/DVB 萃取纖維頭吸附性能強(qiáng)；對(duì)萃取時(shí)間（10、15、20、25、30 min）的研究中發(fā)現(xiàn)，總峰面積20 min后基本達(dá)到平衡，故萃取時(shí)間確定為20 min。

本實(shí)驗(yàn)同時(shí)對(duì)輔料黃酒進(jìn)行了揮發(fā)性成分的測(cè)定，結(jié)果黃酒中主要含有苯乙醇、糠醛、丁二酸二乙酯、2，6-二叔丁基苯酚及少量α-蒎烯等，但酒燉白芷中新增加的12 種成分，并不全部來(lái)源于黃酒。其成分的消失及種類、含量變化，可能與白芷酒燉過(guò)程中受熱及輔料黃酒的作用及成分轉(zhuǎn)化有關(guān)。如酒燉白芷中新增成分含量最高的α-蒎烯，除來(lái)源于黃酒外，還可能由生品中3-蒈烯轉(zhuǎn)化生成，推測(cè)在黃酒酸性及受熱作用下3-蒈烯可能異構(gòu)化D-檸檬烯又可能繼續(xù)轉(zhuǎn)化為α-蒎烯，α-蒎烯還可能繼續(xù)轉(zhuǎn)化為莰烯[9-10]；含量較高的β-水芹烯可能由β-蒎烯及正己醇受熱轉(zhuǎn)化生成[11]。轉(zhuǎn)化過(guò)程見(jiàn)圖3。上述成分的變化是否是藥效作用改變及“酒制升提”炮制作用的關(guān)鍵，還需結(jié)合非揮發(fā)性成分及藥效作用進(jìn)一步深入研究。