軒云，儲全根，儲俊，程婕，劉小雙，蔡正銀

安徽中醫(yī)藥大學，合肥230038

急性酒精中毒是由短時間內攝入大量乙醇導致中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟、心腦血管等出現(xiàn)損傷的病理狀態(tài)[1]。大量飲酒后，乙醇在體內可直接擴散進入血液，隨血液流向各個組織器官，在身體和大腦中積聚，在最初的興奮后引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制，導致一系列生理上的變化和不適。乙醇進入人體后，主要由胃和腸道等消化系統(tǒng)吸收，再經(jīng)血液循環(huán)至肝臟代謝，除少部分隨呼吸、汗液、經(jīng)腎臟代謝為尿的形式排出體外，其余90%～98%的乙醇在肝臟代謝[2]，因此肝臟是乙醇損傷最嚴重的器官。葛花解酲湯是中醫(yī)解酒名方，具有消酒祛濕、理氣健脾的功效。我們的前期研究顯示，葛花解酲湯能夠降低急性酒精中毒動物模型血液中的乙醇含量，并提高乙醇脫氫酶(ADH)活性[3]。2018～2019年，我們在葛花解酲湯的基礎上進行加減，組成加減葛花解酲湯，觀察其對急性酒精中毒小鼠肝組織ADH、乙醛脫氫酶(ALDH)及肝功能ALT、AST活性的影響，探討加減葛花解酲湯對急性酒精性肝損傷的保護作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 清潔級健康昆明種雄性小鼠40只，體質量18～22 g，由安徽醫(yī)科大學實驗動物中心提供。動物自由攝食和飲水，以標準飼料喂養(yǎng)，適應性飼養(yǎng)3d后進行試驗，實驗前禁食禁水12 h。本實驗遵守安徽中醫(yī)藥大學實驗動物倫理委員會的倫理要求。

1.1.2 加減葛花解酲湯的制備 中藥材葛花、枳椇子、縮砂仁、白豆蔻、白茯苓、橘皮、澤瀉、白術、人參、干姜、木香、青皮購自安徽中醫(yī)藥大學國醫(yī)堂門診部。加入10倍量清水浸泡2 h，煮沸1 h，濾過；藥渣再用8倍量清水煮沸1 h，濾過。合并二次濾液，用旋轉蒸發(fā)儀將濾液濃縮成含生藥1 g/mL的藥液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 試劑與儀器 ADH、ALDH、ALT、AST測試盒購自南京建成生物工程研究所。無水乙醇購自國藥集團化學試劑有限公司。主要儀器有臺式高速離心機、電熱恒溫水槽、高壓蒸汽滅器、電子天平、酶標儀。

1.2 模型制備與給藥 將小鼠隨機分為對照組、模型組及加減葛花解酲湯低、中、高劑量組，每組各8只。按照文獻[4]方法制作急性酒精中毒模型，模型組給予56度紅星二鍋頭白酒(北京紅星股份有限公司)16 mL/kg灌胃；加減葛花解酲湯低、中、高劑量組先給予0.5、1、2 g/mL加減葛花解酲湯20 mL/kg灌胃，30 min后再給予16 mL/kg白酒灌胃；對照組給予等量蒸餾水灌胃。

1.3 血液中乙醇含量檢測 灌胃0.5 h后，摘除小鼠的眼球取血，分離血清，采用氣相色譜法測定乙醇含量。

1.4 肝組織中ADH、ALDH、ALT、AST活性檢測 灌胃0.5 h后，每組取8只小鼠，麻醉，取肝組織，冰上勻漿，離心，取上清液，按照檢測試劑盒的說明測定乙醇代謝相關酶ADH、ALDH和肝功能指標ALT、AST活性。ADH活性測定采用紫外比色法，ALDH活性測定采用比色法，ALT、AST活性測定采用賴氏法。

2 結果

2.1 各組血液中乙醇含量比較 模型組及加減葛花解酲湯低、中、高劑量組血液中乙醇含量分別為(4.33±2.10)、(2.66±1.13)、(2.03±0.65)、(1.87±0.61)μL/mL。與模型組比較，加減葛花解酲湯低、中、高劑量組血液中乙醇含量均下降(P均<0.05)，且高劑量組低于中、低劑量組，中劑量組低于低劑量組(P均<0.05)。

2.2 各組肝組織ADH、ALDH、ALT、AST活性比較 與對照組比較，模型組ADH、ALDH、ALT、AST活性均降低(P均<0.05)。與模型組比較，加減葛花解酲湯低、中劑量組ADH活性升高(P均<0.05)，高劑量組ADH活性無明顯變化(P>0.05)；低、中、高劑量組ALDH、ALT、AST活性均升高(P<0.05或<0.01)。見表1。

3 討論

中醫(yī)對于急性酒精中毒的命名較多，《黃帝內經(jīng)·靈樞》提出的“酒?！?、《金匱要略》中提出的“酒疸”、《華佗神醫(yī)秘傳》中提出的“酒毒”均屬于急性酒精中毒。其病機為酒濁擾心、引動肝風，治則為解酒毒、清熱祛濕[5]。葛花解酲湯是解酒名方，出自金元醫(yī)家李杲的《脾胃論》。本研究所用的加減葛花解酲湯，是在葛花解酲湯的基礎上，去除不屬于藥食兩用的中藥神曲、豬苓，加上屬于藥食兩用并具有“敗酒味”作用的枳椇子而成。以葛花和枳椇子為君藥，葛花甘辛涼，使?jié)駨募”矶ⅲ讞鹤痈仕峄?，養(yǎng)陰生津，解酒毒；縮砂仁、白豆蔻醒脾和中，開胃消食；白茯苓淡滲利濕，驅酒濕之邪從小便出；干姜溫中和胃；人參、白術健脾燥濕；澤瀉淡滲利水滲濕；木香、青皮理氣化滯；橘皮調和諸藥藥性。諸藥合用，共奏化酒祛濕，健脾和胃之效。本研究結果顯示，與模型組比較，加減葛花解酲湯低、中、高劑量組血液乙醇含量均明顯降低，以高劑量組效果最為明顯。這說明加減葛花解酲湯預處理能夠降低急性酒精中毒小鼠血液中的乙醇含量，具有解酒作用。

表1 各組肝組織ADH、ALDH、ALT、AST活性比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

乙醇代謝的主要途徑是通過脫氫酶系統(tǒng)，即ADH和ALDH[6]。ADH使乙醇氧化成乙醛，后者在ALDH作用下變成乙酸，然后乙酸進入血循環(huán)，代謝為二氧化碳、水和能量[7]。由于ADH活性的變化可影響血液中乙醇含量，當組織器官中的ADH活性下降或受到抑制時，組織對乙醇的攝取率提高，從而加重乙醇對腦、肝臟等器官的危害[8，9]。本研究結果顯示，模型組肝組織中ADH、ALDH活性均較對照組降低，表明急性酒精中毒可以抑制小鼠肝組織中ADH、ALDH的活性，從而影響乙醇的代謝。與模型組比較，加減葛花解酲湯低、中劑量組ADH活性升高，不同劑量組ALDH活性均升高，表明加減葛花解酲湯能明顯提高急性酒精中毒小鼠肝組織中ADH、ALDH活性，促進乙醇代謝。

正常肝內轉氨酶含量約為血中的100倍，當肝臟實質性損害時，只要有1%的肝細胞壞死，就可使轉氨酶的血清活性增加1倍，肝細胞內的轉氨酶也可以順濃度差而釋放入血[10]。因此轉氨酶含量是肝細胞損害的敏感標志，也是乙醇所致肝損傷最敏感的指標之一。當急性酒精中毒造成肝損傷時，ALT、AST活性升高，使細胞膜的通透性增加，導致細胞內的ALT、AST向血清中釋放，從而造成血中ALT、AST含量升高。本研究結果表明，模型組ALT、AST活性較對照組降低，表明肝細胞受到損傷，ALT、AST從肝細胞中釋放入血，肝組織中的ALT、AST含量相對減少；與模型組比較，加減葛花解酲湯低、中、高劑量組肝組織中ALT、AST活性均明顯升高，表明加減葛花解酲湯預處理可提高急性酒精中毒小鼠肝組織中ALT、AST活性，減輕肝損傷程度。其機制可能是通過調節(jié)ALT和AST在細胞膜上的運輸通道，改善細胞膜通透性，抑制細胞內的ALT、AST向血清釋放。另有研究認為，攝入體內的乙醇大部分是在肝臟經(jīng)ADH和ALDH的酶活分解后，分別成為乙醛和乙酸，而攝入過量乙醇會抑制體內乙醇分解反應和氨基酸轉氨基反應，影響氨基酸代謝中的關鍵轉氨酶ALT、AST活性[11，12]。

綜上所述，加減葛花解酲湯能夠降低急性酒精中毒小鼠血液中的乙醇含量，具有解酒作用；其機制可能是通過提高肝臟中乙醇代謝通路的ADH、ALDH活性促進乙醇代謝，從而減輕肝損傷，具有較好的肝臟保護作用。