周生葆　宋亞會(huì)　劉桂香　劉言娟

摘要? ? 本研究建立了分散液液微萃取-高效液相色譜法測(cè)定枸杞中溴氰菊酯和氰戊菊酯農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法，對(duì)萃取劑與分散劑的種類、萃取劑與分散劑的體積比、pH值、離子強(qiáng)度、萃取時(shí)間等影響因素進(jìn)行了考察。結(jié)果表明，以甲醇為分散劑、三氯甲烷為萃取劑、萃取劑與分散劑的體積比為1∶4、pH值為7、萃取時(shí)間3 min、NaCl含量為2%時(shí)對(duì)枸杞中溴氰菊酯和氰戊菊酯萃取效果最佳。氰戊菊酯和溴氰菊酯分別在0.13～26.00 μg/mL（r=0.999 2）和0.17～34.00 μg/mL（r=0.999 8）濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.25%～5.80%。

關(guān)鍵詞? ? 枸杞;分散液液微萃取;高效液相色譜法;農(nóng)藥殘留;溴氰菊酯;氰戊菊酯

中圖分類號(hào)? ? O657.72;TS255.7? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼? ? A

文章編號(hào)? ?1007-5739（2020）09-0104-02? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）

Abstract? ? A method for the determination of deltamethrin and fenvalerate pesticide residues in Lycium barbarum was established by dispersive liquid-liquid microextraction and high performance liquid chromatography.The influencing factors such as the types of extractant and dispersant，volume ratio of extractant and dispersant，pH value，ionic strength and extraction time were investigated.The results showed that when methanol was used as dispersant，trichloromethane as extractant，the volume ratio of extractant and dispersant was 1∶4，pH value was 7，the extraction time was 3 min，and the NaCl content was 2%，it had the best extraction effect for deltamethrin and fenvalerate in Lycium barbarum.Fenvalerate and deltamethrin had a good linear relationship in the concentration range of 0.13～26.00 μg/mL（r=0.999 2）and 0.17～34.00 μg/mL（r=0.999 8），respectively，and the relative standard deviation was 5.25%～5.80%.

Key words? ? Lycium barbarum;dispersive liquid-liquid microextraction;high performance liquid chromatography;pesticide residue;deltameth-rin;fenvalerate

擬除蟲菊酯類農(nóng)藥是通過改變自然除蟲菊酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)而衍生出的一類仿生殺蟲劑，具有高效、性質(zhì)穩(wěn)定、廣譜、使用濃度低、低毒、觸殺作用強(qiáng)等特點(diǎn)，鑒于該類農(nóng)藥的諸多優(yōu)點(diǎn)，其已逐漸取代有機(jī)氯、有機(jī)磷等農(nóng)藥而被廣泛使用。但是，此類農(nóng)藥屬于酯類，可透過皮膚黏膜、通過呼吸道等途徑進(jìn)入人體，可引起人體神經(jīng)系統(tǒng)及皮膚類疾病。隨著擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的大量使用，該類農(nóng)藥的神經(jīng)毒性及致突變等潛在毒性逐漸表現(xiàn)出來，而且隨著氟原子、氰基、非酯基團(tuán)等的加入，其毒性被大大增強(qiáng)，由此產(chǎn)生的健康風(fēng)險(xiǎn)和制約中藥材出口等問題受到人們的廣泛關(guān)注[1-3]。

枸杞是一種藥食同源植物，枸杞果具有明目、提高免疫力、降三高、促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)等多種功效，其根、莖、葉、籽等也都具有很好的營(yíng)養(yǎng)保健和藥用價(jià)值[4]。近年來，隨著人們對(duì)養(yǎng)生保健的重視，具有藥食同源保健功能的枸杞市場(chǎng)需求量越來越大。但是，枸杞在種植過程中易受病蟲害影響，種植戶便大量使用各類農(nóng)藥，不合理施藥會(huì)造成嚴(yán)重的農(nóng)藥殘留，從而影響枸杞的質(zhì)量和安全性。因此，建立農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法對(duì)于保障消費(fèi)者的健康權(quán)益及促進(jìn)我國(guó)中藥的發(fā)展具有重要意義。

分散液液微萃?。―ispersive liquid-liquid microextracti-on，DLLME）具有設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、環(huán)境友好、溶劑消耗少等優(yōu)點(diǎn)，且能與高效液相色譜、氣相色譜等多種儀器聯(lián)用，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于中藥材、食品、飲料、環(huán)境等的分析檢測(cè)中[5-6]。本研究以分散液液微萃取為樣品前處理方法，與高效液相色譜聯(lián)用對(duì)市售枸杞中的溴氰菊酯和氰戊菊酯進(jìn)行檢測(cè)。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)儀器：KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;HQ-60-I漩渦混合器（Beijing North TZ-Biotech Develop，Co. Ltd）;LG16-B高速離心機(jī)（北京雷勃爾離心機(jī)有限公司）;SPT12324A全自動(dòng)氮空吹掃濃縮儀（北京斯珀特科技有限公司）;1260型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）;ME104E電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）;Milli-Q超純水系統(tǒng)（德國(guó)默克密理博公司）。

試驗(yàn)藥劑：100 μg/mL溴氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）;100 μg/mL氰戊菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）;乙腈（色譜純，南京化學(xué)試劑有限公司）;甲醇（色譜純，南京化學(xué)試劑有限公司）;丙酮（分析純，南京化學(xué)試劑有限公司）;二氯甲烷（分析純，天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司）;三氯甲烷（分析純，南京化學(xué)試劑有限公司）;四氯化碳（分析純，天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司）;1，2-二氯乙烷（分析純，南京化學(xué)試劑有限公司）;試驗(yàn)中所用的水均為二次蒸餾水。

試驗(yàn)藥材：枸杞樣品，產(chǎn)地寧夏。

1.2? ? 試驗(yàn)方法

1.2.1? ? 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置。分別準(zhǔn)確量取濃度為100 μg/mL的溴氰菊酯和氰戊菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液各0.80 mL，置于10.00 mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容至刻度，配制成濃度為8.0 μg/mL的貯備液，于0℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2? ? 供試樣品溶液的制備。將枸杞樣品冷凍干燥后置于粉碎機(jī)中粉碎，過60目篩，備用。準(zhǔn)確稱取枸杞粉末1.0 g，置于 50 mL具塞錐形瓶中，加入乙腈20.0 mL，超聲提取40 min，過濾，收集濾液，4 ℃冰箱保存，備用。

1.2.3? ? 分散液液微萃取。精密移取100.0 μL的枸杞樣品提取液于1.5 mL聚四氟乙烯具塞尖底離心管中，加入2%NaCl溶液900.0 μL混勻，快速注入甲醇175.0 μL，再注入三氯甲烷45.0 μL，樣品溶液、分散劑與萃取劑三者形成乳濁液，渦旋振蕩后靜置一定時(shí)間，3 200 r/min離心3 min。取出下層三氯甲烷相置于1.5 mL聚四氟乙烯具塞尖底離心管中，氮?dú)獯蹈桑眉状?0.0 μL復(fù)溶，取10 μL進(jìn)行HPLC分析。

1.2.4? ? 高效液相色譜條件。色譜柱為依利特HypersilODS2（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流動(dòng)相組成為乙腈（A）+去離子水（B）;采用梯度洗脫方式，梯度洗脫條件為0～14 min，74%～96%（A）;檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm;流動(dòng)相流速為1.0 mL/min;柱溫為25 ℃;進(jìn)樣量為10.0 μL。采用色譜峰保留時(shí)間定性。

2? ? 結(jié)果與分析

2.1? ? DLLME條件優(yōu)化

2.1.1? ? 萃取溶劑選擇。萃取劑對(duì)DLLME的萃取效果有顯著的影響，合適的萃取劑取決于目標(biāo)物的物理化學(xué)性質(zhì)。萃取劑應(yīng)該具備密度大于樣品溶液、良好的色譜行為、對(duì)目標(biāo)物有很好的萃取能力、與分散劑有良好的混溶性等特性[7]。本研究以甲醇為分散劑考察了二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、1，2-二氯乙烷4種萃取劑對(duì)擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的萃取能力。由圖1可知，三氯甲烷對(duì)枸杞中氰戊菊酯和溴氰菊酯的萃取效果均最好。因此，本試驗(yàn)選擇三氯甲烷作為萃取劑進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

2.1.2? ? 分散劑選擇。分散劑對(duì)萃取率也有重要的影響，其在DLLME中起著連接萃取劑與樣品溶液的關(guān)鍵作用：溶解在分散劑中的萃取劑會(huì)因分散劑體積的擴(kuò)張而被釋放出來，當(dāng)分散劑隨著擴(kuò)張溶于樣品溶液時(shí)，萃取劑會(huì)部分析出，而萃取劑不會(huì)溶解于樣品溶液，所以被分散成微小液滴的萃取劑會(huì)與樣品溶液形成膠束狀態(tài)[8]。本研究以三氯甲烷為萃取劑，考察以乙腈、甲醇、丙酮3種溶劑為分散劑時(shí)對(duì)枸杞中氰戊菊酯和溴氰菊酯萃取率的影響。由圖2可知，甲醇為分散劑時(shí)，對(duì)枸杞中2種擬除蟲菊酯類殘留農(nóng)藥的萃取效果均最好，故本研究選擇甲醇作為分散劑進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

2.1.3? ? 萃取劑與分散劑體積比選擇。分散劑與萃取劑的用量會(huì)影響DLLME的富集倍數(shù)[9]。本研究固定分散劑與萃取劑的總體積為220 μL不變，考察分散劑與萃取劑的體積比分別為1∶1、2∶1、4∶1、10∶1、20∶1時(shí)對(duì)枸杞加標(biāo)樣品中氰戊菊酯和溴氰菊酯萃取效果的影響。分散劑與萃取劑以不同的體積比分別對(duì)相同的枸杞加標(biāo)樣品進(jìn)行DLLME試驗(yàn)，萃取相均用氮?dú)獯蹈?，用甲?0.0 μL復(fù)溶，取10 μL進(jìn)行HPLC分析。由圖3可知，當(dāng)分散劑∶萃取劑=4∶1時(shí)，DLLME對(duì)2個(gè)目標(biāo)物的萃取效果最佳。因此，以分散劑與萃取劑的比例為4∶1進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

2.1.4? ? 萃取時(shí)間選擇。DLLME過程中，目標(biāo)物在兩相間實(shí)現(xiàn)傳質(zhì)平衡需要一定的時(shí)間，萃取時(shí)間太短，在目標(biāo)物還未完全轉(zhuǎn)入萃取相時(shí)就停止試驗(yàn)，會(huì)導(dǎo)致萃取不完全、萃取率低，但萃取時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)影響試驗(yàn)的效率，所以選擇合適的萃取時(shí)間對(duì)于DLLME非常重要[10]。本研究考察了萃取時(shí)間分別為1、3、5、7 min時(shí)對(duì)氰戊菊酯和溴氰菊酯萃取率的影響。由圖4可知，當(dāng)萃取時(shí)間小于3 min時(shí)，萃取率隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增大;當(dāng)超過3 min時(shí)，氰戊菊酯的萃取率降低，溴氰菊酯的萃取率基本不變。故選擇3 min為最佳萃取時(shí)間。

2.1.5? ? pH值選擇。樣品溶液的pH值會(huì)影響分析物的存在狀態(tài)，使其處于分子或離子狀態(tài)，從而影響萃取率[11]。已有文獻(xiàn)報(bào)道，氰戊菊酯對(duì)熱、潮濕穩(wěn)定，在酸性介質(zhì)中相對(duì)穩(wěn)定，但在堿性介質(zhì)中會(huì)迅速水解;溴氰菊酯對(duì)光和酸較為穩(wěn)定，但在堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定[12]。因此，本研究選擇pH值為7.0進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

2.1.6? ? 離子強(qiáng)度選擇。溶液的離子強(qiáng)度能影響目標(biāo)物在水溶液中的溶解度，進(jìn)而會(huì)影響萃取效果。本研究考察了NaCl含量分別為0%、1%、2%、3%和4%時(shí)對(duì)氰戊菊酯和溴氰菊酯萃取效果的影響。由圖5可知，當(dāng)NaCl含量為2%時(shí)，對(duì)氰戊菊酯和溴氰菊酯的萃取效果最佳。故選擇2%為最佳鹽濃度進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

2.2? ? 方法學(xué)驗(yàn)證

配制一系列不同濃度的氰戊菊酯和溴氰菊酯溶液，在最優(yōu)試驗(yàn)條件下進(jìn)行DLLME試驗(yàn)，同時(shí)對(duì)方法的線性范圍、檢出限、定量限和富集倍數(shù)等進(jìn)行了考察，結(jié)果如表1所示。氰戊菊酯和溴氰菊酯分別在0.13～26.00 μg/mL和0.17～34.00 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程分別為Y=23.566x-1.063 0（r=0.999 2）和Y=26.206x-0.409 4（r=0.999 8），相關(guān)系數(shù)均達(dá)到0.999以上。分別以信噪比的3 倍和10倍計(jì)算檢出限和定量限，氰戊菊酯的檢出限和定量限分別是0.04 μg/mL和0.13 μg/mL，溴氰菊酯的檢出限和定量限分別是0.05 μg/mL和0.17 μg/mL。方法的精密度用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）表示，分別為5.80%（氰戊菊酯）和5.25%（溴氰菊酯）。

2.3? ? 實(shí)際樣品測(cè)定結(jié)果

本研究利用上述方法對(duì)市售枸杞樣品進(jìn)行分析測(cè)定，實(shí)際樣品中未檢測(cè)出2種農(nóng)藥殘留。

3? ? 結(jié)論

本研究建立了以分散液液微萃取技術(shù)作為樣品前處理的方法，與高效液相色譜相結(jié)合，對(duì)枸杞中氰戊菊酯和溴氰菊酯2種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留進(jìn)行富集檢測(cè)。萃取劑為三氯甲烷，分散劑為甲醇，方法操作簡(jiǎn)便，有機(jī)溶劑使用量少，對(duì)環(huán)境友好，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可用于枸杞中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的測(cè)定。

4? ? 參考文獻(xiàn)

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