王 成，胡乃華，余琳媛，龔莉虹，代旭陽，李蕓霞

(成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，教育部中藥材標(biāo)準(zhǔn)化重點實驗室，中藥資源系統(tǒng)研究與 開發(fā)利用省部共建國家重點實驗室培育基地，成都 611137)

隨著全球人民生活水平的提高和飲食習(xí)慣的改變，高脂血癥(hyperlipidemia，HLP)已逐漸成為嚴重危害全人類身體健康的“第一殺手”，且發(fā)病率呈逐年上升趨勢[1]。目前，HLP及其并發(fā)癥占據(jù)了全球死亡率的50%[2]。在中醫(yī)古籍中，雖然沒有對“高脂血癥”這病癥的明確記載，但早在秦漢時期的《黃帝內(nèi)經(jīng)》中已有“脂者”、“油脂”、“脂膜”等關(guān)于脂的相關(guān)論述，且還用“膏人”、“肥人”等詞來形容血漿脂質(zhì)過高的人[3]。古代中醫(yī)認為，HLP發(fā)生的原因是五臟六腑的氣化、運輸、疏泄、宣發(fā)等生理功能失調(diào)，致使體內(nèi)津液集聚，痰濕化生，流注經(jīng)脈，滲入血中[4]。在現(xiàn)代醫(yī)藥領(lǐng)域，HLP又稱為脂質(zhì)代謝紊亂，是血液中任何或所有血脂和/或脂蛋白水平異常升高，是一種最常見的血脂異常形式。有研究表明，HLP是導(dǎo)致脂肪肝、動脈粥樣硬化、冠心病、糖尿病、腦梗死等多種疾病的首要病因[5]。

相比于降脂作用快速確切的西藥，我國傳統(tǒng)中藥治療HLP有著獨特的優(yōu)勢和廣闊的發(fā)展前景。據(jù)不完全統(tǒng)計，目前已知的具有降血脂功效的中草藥有100多種，中醫(yī)臨床上用于治療HLP的中成藥有200余種[6]，由此可見，運用我國中醫(yī)藥理論對改善和治療HLP有著廣闊的前景。但是，因降脂單味中藥、復(fù)方和中成藥等具有分類龐雜、種類繁多和成分復(fù)雜的特點，依靠單一的降脂模型和研究技術(shù)很難對發(fā)揮作用的有效化學(xué)成分及具體降血脂的機制進行全方面、深層次的研究。HLP的預(yù)防和治療已成為亟待解決的難題之一，高脂模型對于脂代謝性疾病以及HLP繼發(fā)的心腦血管性疾病的研究具有重大意義[7]。因此，建立一個完美的、理想的高脂模型是篩選降脂中藥和研究HLP中醫(yī)發(fā)病機理的關(guān)鍵因素之一。目前國內(nèi)外已建立了多種高脂模型，主要分為高脂細胞模型、高脂哺乳動物模型和高脂斑馬魚模型三種。本文就針對當(dāng)今常用的三種高脂模型進行歸納總結(jié)，為今后進一步探索HLP的發(fā)病機制和篩選有效的降脂中藥提供一定的選擇依據(jù)。

1 高脂細胞模型

1.1 HepG2細胞模型

人源性肝癌細胞系(human hepatocellular liver carcinoma cell line，HepG2)因其具有生長周期短、高分化性、分化穩(wěn)定性和長生不老性等特點，被廣泛應(yīng)用于抗氧化、降脂保肝、抗肝癌和抗脂肪變性等研究[8]。又因其保留了完整的與人類生物代謝相關(guān)的酶，可以正常表達與脂質(zhì)代謝相關(guān)的mRNA轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平，目前也被廣泛用來評價中藥的降脂活性。

郝正亮等[9]利用1.0×10-5mol/L的磷酸三苯酯(triphenyl phosphate，TPP)誘導(dǎo)HepG2細胞，TPP作用于HepG2細胞24 h后用脂質(zhì)分析試劑盒和油紅O脂肪染色對其進行驗證。結(jié)果顯示，經(jīng)TPP作用后，顯著升高甘油三酯(triglyceride，TG)的含量，增加細胞中脂滴的堆積面積，成功誘導(dǎo)高脂HepG2細胞模型。還有研究表明[10]，氧化性低密度脂蛋白(oxidation low density lipoprotein，Ox-LDL)可以通過升高載脂蛋白AI(apolipoprotein AI，apoAI)和降低載脂蛋白B(apolipoprotein B，apoB)的表達而快速使HepG2細胞在48 h建立成高膽固醇模型，與正常組相比，模型組細胞內(nèi)的裂解總膽固醇(total cholesterol，TC)、裂解游離膽固醇(free cholesterol，F(xiàn)C)、上清TC和上清FC均有顯著性差異，表明成功建立高膽固醇HepG2細胞模型。此外，李玉平等[11]對Ox-LDL誘導(dǎo)的高膽固醇HepG2細胞模型的最佳濃度和最佳誘導(dǎo)時間進行了摸索。結(jié)果表明，50 mg/mL的Ox-LDL誘導(dǎo)HepG2細胞48 h是造高膽固醇模型的最佳條件。但是，由于Ox-LDL毒性較大，容易對細胞造成凋亡等不可逆轉(zhuǎn)的損傷[12]，目前人們更多的選擇游離脂肪酸中含量最多的油酸來誘導(dǎo)HepG2細胞脂肪堆積模型。在油酸的干預(yù)下，HepG2細胞中SREBP-1c過度表達，p-AMPK蛋白受到抑制，致使細胞內(nèi)TC和TG顯著性增加[13]，成功建立HepG2細胞脂肪堆積模型。

1.2 L02細胞模型

因HepG2細胞來源于人肝胚胎腫瘤細胞，與正常人肝細胞有一定的差異，將其用于建立降脂中藥篩選模型存在較大的分歧。與此同時，另一傳代株人正常肝細胞進入人們的視野。L02細胞是一種來自于正常人胚胎肝組織且能夠貼壁生長的一種細胞，能完全模擬人類脂質(zhì)代謝過程。因此，用其復(fù)制的高脂細胞模型較HepG2細胞更具可行性和說服性。

殷錦錦等[14]探討使用游離脂肪酸(free fatty acids，F(xiàn)FA，棕櫚酸和油酸混合物)來建立L02細胞脂肪變性模型。方法是往1640培養(yǎng)基中添加FFA共同培養(yǎng)L02細胞24 h，后采用油紅O染色對細胞內(nèi)脂滴形態(tài)進行觀察，同時檢測TG、丙二醛(malondialdehyde，MDA)以及細胞凋亡率來鑒定模型是否成功。結(jié)果顯示，高脂模型組細胞內(nèi)有大量脂滴形成，TG顯著性升高，MDA含量和細胞凋亡率均沒有明顯增高，成功誘導(dǎo)高脂L02細胞模型。還有學(xué)者對FFA里油酸和棕櫚酸的比例及其它最佳條件進行了系統(tǒng)性研究。Gómez-Lechón等[15]經(jīng)全面研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)FFA中油酸和棕櫚酸的比例為2∶1時，最適合用來建立高脂L02細胞模型。但是，隨著對FFA的深入研究，一些學(xué)者發(fā)現(xiàn)FFA是一種毒性特別強的二性分子，容易引起生物膜的損傷[16]，后來有學(xué)者建議用毒性更小的脂肪乳劑來建立高脂L02細胞模型。此外，袁勇等[17]還探索出當(dāng)造模液中脂肪乳劑為1.0 mL/L，造模時間為48 h時，是建立L02細胞非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)模型的最佳條件，適用于更深入和更全面的探索HLP和NAFLD的發(fā)病機制，篩選出防治HLP和NAFLD的有效中藥。

1.3 3T3-L1細胞模型

3T3-L1前脂肪細胞是G.J.Todaro從17～19 d Swiss系小鼠胚胎里3T3細胞中分離得到。用該細胞進行脂質(zhì)代謝方面的研究時，需要利用適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)劑對其進行刺激，使其定向分化成充滿脂滴的脂肪細胞才能進行下一步的實驗探索。誘導(dǎo)分化前3T3-L1前脂肪細胞間質(zhì)稀少，體積小，呈梭形，包漿中不含有TG的油滴[18]。誘導(dǎo)分化后則變成成熟的脂肪細胞，貼壁完好，楞角分明，大量的TG脂滴積聚于細胞核的周圍。3T3-L1脂肪細胞是目前國際上公認的可用于研究HLP、肥胖以及篩選降脂中藥和抗肥胖藥物的細胞模型[19]。

肥胖是一個全球性的健康問題，它被認為是HLP、高血壓和動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)等心血管疾病發(fā)生的危險因素。有研究發(fā)現(xiàn)，與脂質(zhì)代謝相關(guān)的基因為肥胖等代謝綜合征的藥物治療提供了豐富的潛在靶點，Roh等[20]通過在DMEM培養(yǎng)基中加入誘導(dǎo)劑(10μg/mL胰島素，2.5μmol/L地塞米松和0.5 mmol/L 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤)，誘導(dǎo)3T3-L1細胞分化成脂肪細胞，成功篩選出具有抗肥胖活性的植物提取物。此外，Lee等[21]在含有高葡萄糖、10%胎牛血清和青霉素/鏈霉素等的DMEM培養(yǎng)基中，加雞尾酒培養(yǎng)3T3-L1細胞48 h，也使其成功誘導(dǎo)分化成脂肪細胞。

此外，還有一些細胞也可以用來建立高脂細胞模型。如1954年從非惡性的人體組織中建立的具有無限傳代特點的人肝Changliver細胞、小鼠巨噬RAW264.7細胞株、來自大鼠肝的肝BRL細胞、人單核/巨噬細胞株THP-1、奶牛肝細胞和草魚肝細胞等。

常用高脂細胞建模方法的比較見表1。

2 高脂哺乳動物模型

2.1 大鼠

因具有成本低、易于飼養(yǎng)、抗病力強、實驗操作簡單和模型穩(wěn)定性好等優(yōu)點，大鼠已成為目前國內(nèi)外研究人體脂質(zhì)代謝使用率最高的一種動物。此外，大鼠所含血液豐富，一次采血即可對多項指標(biāo)進行檢測，可以較好的對脂質(zhì)的吸收、合成和分解等代謝過程進行深入研究。

目前，在誘導(dǎo)大鼠形成高脂模型來進行血脂代謝紊亂的實驗中，喂養(yǎng)高脂飼料或高脂高膽固醇飼料是普遍選取的方法。Moselhy等[22]在普通飼料中添加了2%的膽固醇和0.4%的膽酸鈉制作成高脂高膽固醇飼料，用于評價麥角甾醇聯(lián)合煙酸對高脂飲食(high fat diet，HFD)大鼠的潛在降脂和降膽固醇作用。結(jié)果顯示，HFD組大鼠TC、TG、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDLc)、極低密度脂蛋白膽固醇(very low density lipoprotein cholesterol，VLDL-c)以及致動脈粥樣因子水平均明顯高于正常組，高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-c)水平低于正常組。麥角甾醇或煙酸的灌胃組，TC、TG、LDL-c均比模型組低。研究表明煙酸和麥角甾醇可以預(yù)防高膽固醇血癥和冠心病。然而，高TC的食物對大鼠并沒有吸引力，甚至還易出現(xiàn)“厭食”的情況，以致于不能精確掌握每日進食量，進而影響實驗結(jié)果準(zhǔn)確性。因此，有的學(xué)者建議用灌胃高脂乳劑法替代高脂高膽固醇飼料飼養(yǎng)法，這樣既可以避免進食的不一致性，還可以根據(jù)實際需求增減高脂成分的含量，縮短造模時間。此外，還有學(xué)者將與脂質(zhì)代謝相關(guān)酶的活性物質(zhì)作為復(fù)制高脂模型的材料。如灌胃鉛可以顯著性抑制細胞色素P450的活性，進而影響甾醇獨立基團調(diào)控肝酶對脂質(zhì)的代謝[23]。Liu等[24]通過對大鼠進行為期75 d的醋酸鉛水溶液灌胃，成功研究了葛根素可以通過降低細胞在代謝過程中產(chǎn)生的活性氧簇，更新抗氧化酶活性，闡明葛根素對鉛誘導(dǎo)的高脂血癥和肝損傷的保護作用機制。

表1 常用高脂細胞建模方法Table 1 Common hyperlipidemia cell modeling method

2.2 小鼠

小鼠因價格便宜、易于飼養(yǎng)、造模成本低、血脂穩(wěn)定和采樣方便等優(yōu)點，也被廣泛運用于篩選降脂中藥的實驗研究中。但是，小鼠能采集的血量少，極大程度的限制了相關(guān)指標(biāo)的檢測。此外，小鼠血漿中不含血漿膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白[25](cholesteryl ester transfer protein，CETP)，對飲食中的膽固醇和高糖無反應(yīng)，很難繼續(xù)發(fā)展為AS，因此，只能單純的用于HLP研究。

近年來，C57BL小鼠和敲除了與脂蛋白代謝相關(guān)蛋白的小鼠被大量應(yīng)用于復(fù)制高脂模型。與建立高脂大鼠模型相似，建立高脂小鼠模型時，高脂飼料喂養(yǎng)法和灌胃法也是常用方法。此外，自從第一個轉(zhuǎn)基因小鼠制備成功，轉(zhuǎn)基因動物模型也被廣泛用于HLP和AS的研究。長期用高脂飼料喂養(yǎng)轉(zhuǎn)基因C57BL/6J小鼠，可導(dǎo)致血脂異常、肥胖和2型糖尿病等疾病[26]。Saravanan等[27]連續(xù)用高脂飼料(脂肪含量35.8%)對C57BL/6J小鼠進行為期70 d的造模飼養(yǎng)，利用此模型評估一種單萜酚類化合物百里酚對高脂血癥、2型糖尿病的作用。結(jié)果表明，40 mg/kg的百里酚具有良好的抗高脂血癥、高血糖的作用，可保護C57BL/6J小鼠免受HFD的侵襲。還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)連續(xù)28 d給小鼠灌胃1，3-二氯丙醇，可以通過調(diào)節(jié)腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)信號通路來誘發(fā)HLP。Lu等[28]通過此種方法成功復(fù)制高脂小鼠模型，且還發(fā)現(xiàn)HDL-c的降低程度與1，3-二氯丙醇呈一定的劑量依耐性。載脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)是一種多態(tài)性蛋白，能調(diào)節(jié)脂代謝有關(guān)酶的活性，參與脂蛋白的轉(zhuǎn)化和代謝過程。ApoE主要存在于乳糜顆粒、極低密度脂蛋白(very low density lipoprotein，VLDL)和部分HDL中，對ApoE基因多態(tài)性的研究也是目前醫(yī)學(xué)研究的熱點之一。ApoE變異或者缺失，會導(dǎo)致血脂代謝紊亂和AS等疾病。Patterson等[29]利用基因靶向技術(shù)，制備了ApoE-/-轉(zhuǎn)基因小鼠，用于研究瑞舒伐他汀對ApoE基因缺失小鼠高脂血癥深靜脈血栓的影響。與正常小鼠相比，ApoE-/-小鼠的TC升高4倍，TG升高2倍。在正常飲食下，即可形成高膽固醇血癥，在高脂高膽固醇飲食下，可加速AS的病變發(fā)生。由此可見，利用基因靶向技術(shù)所制備的轉(zhuǎn)基因小鼠可大大節(jié)約造模時間。

2.3 家兔

家兔的脂蛋白代謝與人類相似，血漿中具有豐富的CETP，不具有肝ApoB mRNA編輯活性[30]，對外源性膽固醇吸收率高，血中脂質(zhì)清除率低，是研究人類脂質(zhì)代謝和AS最常用的動物模型，同時也是最早被用于復(fù)制HLP和AS模型的動物。又因家兔肝脂酶活性較低，不需要格外添加任何誘導(dǎo)劑，單純飼喂高膽固醇飼料即可快速發(fā)展成HLP和AS，其TC在一個月可升高11.8倍，在兩個月可升高17.7倍[31]。因此，家兔提供了一個獨特的系統(tǒng)來研究膳食膽固醇對高膽固醇血癥、AS和肝功能障礙的影響[32]。

相比于大鼠和小鼠，家兔對高膽固醇食物顯得尤為敏感。大多數(shù)HLP和AS兔模型都是通過高脂飼料喂養(yǎng)所得到。Heikal等[33]采用HFD(含1%膽固醇)對雄性新西蘭家兔喂養(yǎng)8周，成功造成高血脂家兔模型，用于研究非布索坦的抗高脂血癥的作用及作用機制?；蚯贸秊檠芯恐|(zhì)代謝提供了另一種制備兔模型的方法，但即便如此，ApoE-/-兔仍需要飼喂高膽固醇飼料才能誘導(dǎo)高脂血癥。最近Lu等[34]使用CRISPR/Cas9系統(tǒng)錨定低密度脂蛋白受體(low density lipoprotein receptor，LDLR)外顯子7，試圖產(chǎn)生一種可自發(fā)形成HLP的LDLR-KO兔。結(jié)果顯示，LDLR-KO兔在正常的飲食下均可自發(fā)性誘導(dǎo)高膽固醇血癥和AS。提示LDLR-KO家兔可以作為研究高膽固醇血和AS的模型，用于模擬人類原發(fā)性高膽固醇血癥，使心腦血管病的研究更加精確。

2.4 豚鼠

有研究表明[35]，豚鼠的脂蛋白代謝與人類的代謝有顯著的相似之處。與人類一樣，豚鼠也是少數(shù)幾種LDL-c含量最高的物種之一。其相似主要體現(xiàn)在LDL/HDL比值高、肝中游離膽固醇濃度高于酯化膽固醇、肝膽固醇合成、酯化和分解代謝很相似等[36]。豚鼠性情溫順，采血量大，對TC的敏感性高于大鼠[37]。此外，切除卵巢的豚鼠還可以較好地模擬絕經(jīng)后女性的脂蛋白代謝[38]。

豚鼠對高脂飼料、高膽固醇飼料顯得尤為敏感，通常在普通飼料中添加少量的膽固醇便可造成高膽固醇血癥。Yang等[39]采用高脂飼料(添加5%的豬油和0.3%的膽固醇)飼喂豚鼠，14周后測定血脂、ApoB100、MDA、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、一氧化氮含量。對主動脈粥樣硬化病變進行組織學(xué)檢查，結(jié)果顯示，模型組TC、TG、LDL-c、ApoB100水平是對照組的9.45倍、6.01倍、12.72倍、14倍，模型組HDL-c相比與對照組顯著降低72%，出現(xiàn)嚴重血脂異常，且模型組MDA含量高于對照組8.2倍，SOD活性降低60.8%，并伴有組織學(xué)改變和內(nèi)皮功能障礙。由此可見，豚鼠也是一種比較理想的研究脂代謝的模型動物。

此外，用來復(fù)制高脂模型的動物還有長爪沙鼠[40]、金黃地鼠[41]、食蟹猴[42]、懸猴、鵪鶉、雞、家鴨、beagle犬、五指山小型豬和鴿子等，研究者應(yīng)根據(jù)實驗需求選擇合適的動物模型進行研究。

常用高脂哺乳動物模型的比較見表2。

3 高脂斑馬魚模型

斑馬魚是一種原產(chǎn)于南非地區(qū)的熱帶硬骨魚，因其基因組序列與人類有著87%的高度相似性[43]，體積小，胚胎透明，易于大規(guī)模飼養(yǎng)，繁殖能力強和實驗周期短，被廣泛作為高通量篩選藥物的經(jīng)典模型[44-45]。又因其血脂構(gòu)成、脂質(zhì)吸收、脂質(zhì)代謝、器官和組織與人類基本一致，近年來被大量應(yīng)用在與脂質(zhì)代謝和脂質(zhì)異常相關(guān)的疾病研究中，如HLP、糖尿病、脂肪肝、AS等，是研究單體中藥降血脂作用的理想模式生物[46]。

3.1 斑馬魚幼魚

Stoletov等[47]利用斑馬魚幼魚身體透明、器官清晰可見和能夠以高分辨率在體內(nèi)對器官和生物過程進行非侵入性的可視化的特性，對活體高膽固醇血癥斑馬魚幼魚的血管脂質(zhì)堆積、脂蛋白氧化和脂肪條紋的形成情況進行了實時的研究報道。該團隊在高膽固醇飼料中添加一種紅色的Cholesteryl BODIPY 576/589 C11活體熒光探針，用來牢固標(biāo)

記幼魚體內(nèi)的膽固醇，以便在激光共聚焦顯微鏡下對活體斑馬魚中的膽固醇走向以及在血管壁內(nèi)的沉積進行實時的動態(tài)觀察。結(jié)果顯示，誘導(dǎo)出穩(wěn)定的紅色熒光磷脂堆積、血管脂質(zhì)大量沉積、脂肪條紋形成，表明高膽固醇血癥模型成功建立。但是，由于這種活體熒光探針價格昂貴，容易猝滅，對實驗設(shè)備要求較高、結(jié)果不穩(wěn)定和重現(xiàn)性差，后來Zhou等[48]建立了一種可以快速高通量篩選降脂藥物的斑馬魚高脂模型。該團隊通過對5 dpf(days post fertilization，dpf)斑馬魚幼魚喂養(yǎng)0.1%的蛋黃粉24 h和48 h，對斑馬魚尾靜脈油紅O染色，對其在解剖立體顯微鏡下成像所得到的圖片進行定量分析，發(fā)現(xiàn)斑馬魚的腸道和血管中的脂質(zhì)會隨著時間的增加而堆積，快速建立了斑馬魚HLP模型，并且該團隊利用這模型對幾種常見的不同作用機制的降血脂藥物進行了篩選和療效評價。后來，余琳媛等[49]采用這種造模方法來篩選傳統(tǒng)降脂中藥制首烏中具有降脂保肝作用的有效化學(xué)成分。結(jié)果顯示，大黃素能顯著降低斑馬魚的死亡率，降低TG水平，可明顯改善斑馬魚幼魚肝脂質(zhì)的沉積，由此推測制首烏中具有降脂作用的主要有效成分是大黃素。

表2 常用高脂哺乳動物模型比較Table 2 Comparison of commonly used hyperlipidemia mammal models

3.2 斑馬魚成魚

由于斑馬魚幼魚HLP模型的檢測指標(biāo)大多都是通過油紅O染色和活體熒光探針來反應(yīng)，這些都是間接地反應(yīng)血脂的相對變化，不能真實地反映出機體的脂質(zhì)代謝情況，況且從斑馬魚幼魚中提取血液也是不切實際的。但是，可以通過抽取斑馬魚成魚的血漿來直接檢測血脂的變化情況[50]。韓冰等[51]用含4%膽固醇飼料去喂養(yǎng)3月大的斑馬魚成魚20 d，通過對肝進行油紅O染色和測定血清TC、TG和LDL-c含量與空白組相對比，其結(jié)果顯示高膽固醇組的血清TC、TG和LDL-c含量均有顯著性升高，肝中出現(xiàn)大量的脂肪滴累積，表明成功建立高脂斑馬魚成魚模型，為下一步研究和開發(fā)新的降血脂中藥奠定基礎(chǔ)。

高脂斑馬魚幼魚和成魚造模方法的比較見表3。

4 高脂模型在篩選降脂中藥中的作用

長期高脂高膽固醇飲食會打破機體脂質(zhì)吸收和消化之間的平衡關(guān)系，導(dǎo)致脂肪、膽固醇和復(fù)合糖類長期大量的在血管內(nèi)壁上聚集和過度沉積，導(dǎo)致動脈壁增厚變硬，血管腔變窄，致使動脈內(nèi)膜形成粥樣斑塊，影響血流速度，進而產(chǎn)生一系列更為嚴重的心血管疾病。因此，及早進行預(yù)防和篩選有效的降脂藥是降低患者心血管事件發(fā)生的有效控制手段。目前對于HLP的治療首選他汀類藥物，但是如果長期服用調(diào)血脂西藥，其以轉(zhuǎn)氨酶升高為特征的肝損害和以肌酸激酶升高為特征的橫機紋溶解等副作用會逐漸凸顯出來。因此，一些天然產(chǎn)物，特別是我國具有悠久的歷史和顯著的療效的傳統(tǒng)降脂中藥，因具有多靶點、多途徑、多環(huán)節(jié)、療效好、毒副小等的優(yōu)點，可以很好地與西藥作用的單一性相彌補而受到了格外的關(guān)注。因此，建立可用于篩選和研究降血脂中藥的脂質(zhì)代謝紊亂動物模型顯得尤為重要。

現(xiàn)代中醫(yī)認為，HLP的病因病機主要是恣食肥甘，痰濁淤阻引起。運用傳統(tǒng)中藥來預(yù)防和治療HLP，主要是依據(jù)中醫(yī)基礎(chǔ)理論中的辨證論治，故篩選和研究降脂中藥時需要根據(jù)其病因病機及證候選擇不同的實驗方法來復(fù)制高脂模型[52]。目前，已有很多學(xué)者通過不同的高脂模型篩選出具有調(diào)血脂作用的中藥。如何首烏[49]、柴胡[53]、天麻[54]、虎杖[55]、決明子[56]等，具有降血脂、降血壓、抗脂肪肝、抗AS等功效，可用于治療高血壓、HLP、AS等疾病。隨著我國醫(yī)療技術(shù)的快速發(fā)展，我國對HLP的治療不但可以從中醫(yī)的證候表征入手，還可以結(jié)合現(xiàn)代中醫(yī)藥理論知識從基因蛋白水平治療HLP。

理想的降脂模型不單單有助于篩選降脂中藥和其機制的研究，還應(yīng)該有助于HLP中醫(yī)發(fā)病機理的研究，只有明白機理才能準(zhǔn)確的選擇相應(yīng)的治法和藥物。但是，我國暫時還沒有大規(guī)模、多中心、深層次的研究，以及我國中藥成分的多樣性和中醫(yī)理論的復(fù)雜性，目前還未徹底了解其發(fā)揮療效的具體機制和HLP的中醫(yī)發(fā)病機理。因此，對于降血脂模型的建立，還需要我們不斷改進、完善和創(chuàng)新，以尋求更完美的生物模型，更加深入全面地闡明HLP的發(fā)病機理和降脂中藥的治療機制。

5 結(jié)語和展望

綜上所述，目前有多種多樣的方法來建立HLP模型，各種模型均有其優(yōu)缺點。高脂細胞模型相對于其他模型，具有實驗周期短、可控性強、成本低等優(yōu)點，但生物體終究是一個有機整體，其各個組織器官之間都存在著聯(lián)系，單純用細胞模型來研究只能說明藥物是對這種細胞的作用效果，無法代替整個有機體。而動物模型即可以用來探討降脂中藥對整個機體的作用機制，特別其斑馬魚模型還可以高效、快速的進行高通量篩選。因此，我們應(yīng)該將細胞模型與動物模型緊密結(jié)合起來，使兩種模型相互補充，共同促進對HLP發(fā)病機制及防治中藥的研究。

表3 高脂斑馬魚造模方法比較Table 3 Comparison of modeling methods for hyperlipidemia zebrafish

復(fù)制的高脂模型成功與失敗，受到了多種因素的制約。飼喂方式的不同(飼喂法和灌胃法)、高脂飼料占比的不同以及脂肪乳劑配方的不同，都會影響造模的成功率。此外，影響造模效果的因素還有動物的品系、性別和年齡等。在建立高脂動物模型時，一般多選用雄性動物。因HLP的發(fā)生與腎上腺素等激素有關(guān)，而雄性動物較雌性動物競爭更為激烈，所以雄性動物更易形成HLP。所以應(yīng)該根據(jù)具體的實驗情況，選擇合適的HLP實驗動物模型。

隨著新理論、新技術(shù)和新概念的出現(xiàn)，人們對高脂模型的要求隨之提高。研究人員在進行研究時必須謹慎，因為某些模型的脂質(zhì)代謝可能被證明與人類完全不同，因此，可能不適合研究降血脂中藥的作用機制。筆者認為，在眾多的模型中挑選出適合于研究HLP的模型時，需要結(jié)合自身實驗的目的、指標(biāo)和經(jīng)費等客觀條件，特別要著重注意以下幾點。第一，選擇建立的模型應(yīng)盡可能與人類疾病相符合；第二，盡量選用自身影響因素小的模型，實驗結(jié)果最好是可以多次重現(xiàn)，以避免實驗結(jié)果的偶然性和不精確性；第三，應(yīng)注意選擇模型的實用性、經(jīng)濟型和可操作性。筆者相信，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的研究手段，中醫(yī)藥治療HLP將會有更加廣闊的發(fā)展前景。