于洋 薛瑩 倉順東

手術(shù)是現(xiàn)階段臨床治療胰腺癌首選方案，但能進行手術(shù)切除者僅占20.0%，且術(shù)后5年生存率＜25.0%[1-2]。胰腺癌發(fā)病機制基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)，相關(guān)調(diào)控細(xì)胞因子濃度在惡性腫瘤細(xì)胞增殖期間出現(xiàn)一定程度改變，可加快癌細(xì)胞增殖速度，促進癌細(xì)胞浸潤或誘導(dǎo)分化[3-4]。熱休克蛋白A2（Heat shock protein A2，HSPA2）在精子發(fā)育、精卵結(jié)合過程中具有重要作用，近年來臨床研究發(fā)現(xiàn)其在侵襲性腫瘤中呈異常高表達(dá)狀態(tài)，可調(diào)控腫瘤增殖、侵襲等[5]。胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白（Insulin-like growth factor binding protein，IGFBP-2）表達(dá)水平異常，能激活癌細(xì)胞上游轉(zhuǎn)錄因子，加快癌細(xì)胞DNA 擴增速度[6]?；诖?，本研究探討分析HSPA2、IGFBP-2 在胰腺癌患者的表達(dá)及與臨床病理特征相關(guān)性。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取本院2015年4月至2019年4月行手術(shù)切除的胰腺癌組織標(biāo)本96例、癌旁正常胰腺組96例、胰腺良性腫瘤組織標(biāo)本88例作為研究對象。胰腺癌組織標(biāo)本，男65例，女31例，年齡52～78歲，平均年齡（63.75±4.53）歲；癌旁正常胰腺組織標(biāo)本，男63例，女33例，年齡50～75歲，平均年齡（63.91±4.85）歲；胰腺良性腫瘤組織標(biāo)本，男59例，女29例，年齡51～79歲，平均年齡（64.05±4.96）歲；3組基本資料（年齡、性別）均衡可比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①3組臨床資料完整，且知情本研究方案，自愿簽署承諾書；②胰腺癌組織標(biāo)本、癌旁正常胰腺組織標(biāo)本符合以下標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)手術(shù)、病理學(xué)、細(xì)胞學(xué)檢查證實為胰腺癌；均符合《2016 JPS臨床實踐指南：胰腺癌》中胰腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；③胰腺良性腫瘤組織標(biāo)本：均經(jīng)手術(shù)、病理學(xué)證實為胰腺良性病變；腫瘤標(biāo)志物檢測在正常范圍內(nèi)；胰腺組織距手術(shù)切緣＞1.0 cm。排除標(biāo)準(zhǔn)：①轉(zhuǎn)移性胰腺癌者；②合并自身免疫性疾病或免疫缺陷者；③肝腎等重要臟器器質(zhì)性病變者；④既往有放化療治療史者；⑤存在胰腺疾病、糖尿病家族史者；⑥精神行為異常者。

1.2 方法

所有標(biāo)本均經(jīng)甲醛（40 g/L）固定，常規(guī)石蠟包埋。應(yīng)用石蠟切片技術(shù)，甲苯-無水乙醇脫去石蠟，再利用無水乙醇、70.0%乙醇、50.0%乙醇反復(fù)洗滌切片，再加入牛奶液體等封閉抗體，封閉5 min，加入預(yù)先準(zhǔn)備的HSPA2、IGFBP-2蛋白抗體[購自艾博抗（上海）貿(mào)易有限公司]，溫箱（37℃）條件下，孵育120 min，取出后應(yīng)用磷酸鹽緩沖液（phosphate bufferedsaline，PBS）反復(fù)洗滌3次，標(biāo)本加入熒光標(biāo)記二抗抗體[購自艾博抗（上海）貿(mào)易有限公司]，溫箱（37℃）條件下，孵育30 min，再次應(yīng)用PBS 洗滌，最后采用顯色劑（購自南京凱基生物制劑公司）顯色、封片，并于顯微鏡下觀察。

1.3 陽性判斷方法

隨機選取切片中5個高倍視野，其中3分：細(xì)胞呈明顯棕褐色顆粒；2分：細(xì)胞呈棕黃色顆粒；1分：細(xì)胞呈淡黃色顆粒；0分：無染色。陽性細(xì)胞比率：1分：陽性細(xì)胞數(shù)目比率≤10.0%；2分：10.0%＜陽性細(xì)胞比率≤50.0%；3分：50.0%＜陽性細(xì)胞比率≤75.0%；4分：陽性細(xì)胞比率＞75.0%?？偡?染色深度計分×陽性細(xì)胞比率?？偡帧? 分為陽性，＜3 分為陰性。

1.5 觀察指標(biāo)

①對比3組HSPA2、IGFBP-2蛋白表達(dá)。②分析HSPA2、IGFBP-2蛋白對胰腺癌診斷價值。③對比不同臨床病理特征患者胰腺癌組織標(biāo)本中HSPA2、IGFBP-2蛋白表達(dá)。④分析HSPA2、IGFBP-2蛋白表達(dá)與胰腺癌患者臨床病理特征相關(guān)性。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進行分析，計數(shù)資料用n（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，采用Pearson和Fisher's Exact Test 進行相關(guān)性分析，采用ROC曲線分析診斷價值，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組HSPA2、IGFBP-2蛋白表達(dá)

胰腺癌組織標(biāo)本HSPA2、IGFBP-2蛋白陽性表達(dá)率高于胰腺良性腫瘤組織標(biāo)本、癌旁正常胰腺組織標(biāo)本，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1、圖1。

2.2 HSPA2、IGFBP-2蛋白對胰腺癌診斷價值

ROC曲線分析，兩者聯(lián)合診斷AUC為0.800，大于HSPA2（0.689）、IGFBP-2（0.740），診斷敏感性93.75%，診斷特異性66.30%，見表2、圖4。

2.3 不同臨床病理特征患者胰腺癌組織標(biāo)本中HSPA2、IGFBP-2蛋白表達(dá)

TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胰腺癌組織標(biāo)本中HSPA2、IGFBP-2蛋白陽性表達(dá)率高于TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表1 3組HSPA2、IGFBP-2蛋白表達(dá)[n（%）]Table1 Expression of HspA2 and IGFBP-2 in three groups[n（%）]

圖1 胰腺癌、胰腺癌癌旁正常胰腺組織及胰腺良性腫瘤病理圖（×400）Figure1 pathology of pancreatic cancer，normal pancreatic tissue beside pancreatic cancer and benign pancreatic tumor（×400）

表2 HSPA2、IGFBP-2蛋白對胰腺癌診斷價值[n（%）]Table2 diagnostic value of HspA2 and IGFBP-2 protein in pancreatic cancer[n（%）]

圖4 ROC曲線Figure4 ROC curve

2.4 HSPA2、IGFBP-2蛋白表達(dá)與胰腺癌患者臨床病理特征相關(guān)性

經(jīng)Pearson 相關(guān)系數(shù)分析，HSPA2、IGFBP-2蛋白表達(dá)與胰腺癌患者TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，與分化程度呈負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表4。

3 討論

胰腺癌早期癥狀具有隱匿性，多數(shù)患者確診時已處于中晚期，喪失手術(shù)最佳治療時機，且數(shù)據(jù)統(tǒng)計，胰腺癌治療后無瘤生存期＜2年，且治療后病死率持續(xù)性維持在45%～60%[8]。因此及時鑒別診斷胰腺癌，探究影響患者預(yù)后相關(guān)因素，對延長患者生存期具有重要意義。

Scieglinska D 等[9]研究發(fā)現(xiàn)HSPA2 在肺癌、膀胱癌、宮頸癌的組織標(biāo)本、細(xì)胞株內(nèi)呈高表達(dá)狀態(tài)，推測HSPA2 在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中可能扮演重要角色。本研究結(jié)果顯示，HSPA2 蛋白陽性表達(dá)率在胰腺癌組織標(biāo)本中過度表達(dá)。吳楊等[10]研究通過檢測對比15例胰腺癌、癌旁胰腺組織標(biāo)本，證實HSPA2 在胰腺癌組織中翻譯、轉(zhuǎn)錄水平均明顯高于癌旁胰腺組織，充分證明HSPA2 過度表達(dá)參與胰腺癌的發(fā)生、進展。文獻(xiàn)分析，胰腺癌癌細(xì)胞無限增殖過程中，需大量HSPA2 維持穩(wěn)定，且腫瘤所致應(yīng)激環(huán)境一定程度也誘導(dǎo)HSPA2 過度表達(dá)[11]。同時，相關(guān)研究顯示，HSPA2 在多種侵襲性腫瘤中呈較高水平表達(dá)，HSPA2基因沉默可大幅度降低腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲及移植瘤生長能力[12]。本研究數(shù)據(jù)表明，HSPA2 蛋白陽性表達(dá)率在TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胰腺癌組織標(biāo)本中異常表達(dá)。姜波等[13]研究通過檢測對比30例食管癌患者也發(fā)現(xiàn)，熱休克蛋白水平陽性率高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期等因素相關(guān)，可見通過檢測HSPA2 蛋白表達(dá)水平，能指導(dǎo)臨床評估病情進展。

表3 不同臨床病理特征患者胰腺癌組織標(biāo)本中HSPA2、IGFBP-2蛋白表達(dá)[n（%）]Table3 HSPA2、IGFBP-2 protein expression in pancreatic cancer tissues of patients with different clinicopathological characteristics[n（%）]

表4 HSPA2、IGFBP-2蛋白表達(dá)與胰腺癌患者臨床病理特征相關(guān)性Table4 Correlation between HspA2，IGFBP-2 protein expression and clinicopathological characteristics of pancreatic cancer patients

IGFBP-2 作為生長因子家族成員，其表達(dá)濃度改變可激活癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄cyc 等上游因子或啟動因子[14]。本研究數(shù)據(jù)表明，IGFBP-2蛋白陽性表達(dá)率在胰腺癌組織標(biāo)本中高表達(dá)水平。王悅超等[15]通過73例胰腺癌患者臨床病理特征還發(fā)現(xiàn)，IG-FBP蛋白表達(dá)陽性率平均增高＞25.0%，并在病情進展速度較快或治療后生存預(yù)后較差人群中呈增高趨勢。充分說明IGFBP-2蛋白水平在胰腺癌中過度表達(dá)，能激活癌細(xì)胞內(nèi)腫瘤相關(guān)信號通路NOTCH，提高MAPK 等信號交錯式激活風(fēng)險，影響胰腺癌患者體內(nèi)腫瘤干細(xì)胞特征的維持[16]。本研究進一步經(jīng)Pearson 相關(guān)系數(shù)分析發(fā)現(xiàn)，IGFBP-2蛋白表達(dá)與胰腺癌患者TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，與分化程度呈負(fù)相關(guān)。

綜上可知，胰腺癌組織HSPA2、IGFBP-2蛋白高表達(dá)，與TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，與分化程度呈負(fù)相關(guān)。監(jiān)測上述蛋白表達(dá)水平，可為臨床判斷病情發(fā)展、評估預(yù)后提供科學(xué)指導(dǎo)。