梅 瑜 周子雄 王繼華

(1 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所/廣東省農(nóng)作物遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 廣東廣州510640;

2 惠州象山藥王谷種養(yǎng)科技有限公司 廣東惠州516000)

崗梅是冬青科冬青屬植物梅葉冬青的根。梅葉冬青［Ilex asprella（Hook.et Arn.）Champ.ex Benth.］是落葉灌木，分布于江蘇、浙江、江西、安徽、湖北、湖南、福建、臺(tái)灣、廣東、廣西、海南等省。枝條表面散生大小似秤星的黃白色點(diǎn)狀皮孔，又名秤星樹(shù)、土甘草、山梅根、假青梅、百解茶等。葉片為卵形或卵狀橢圓形互生，葉面光亮；夏季開(kāi)花，花白色，雌雄異株；果為漿果狀核果，有棱，成熟時(shí)黑色，內(nèi)有分核4～6 粒，內(nèi)果皮骨質(zhì)。

崗梅以根、葉入藥?！度珖?guó)中草藥匯編》［1］中記載崗梅具有清熱解毒，生津止渴的功效。用于感冒，高熱煩渴，扁桃體炎，咽喉炎，氣管炎，百日咳，腸炎，痢疾，傳染性肝炎，野蕈、砒霜中毒，癰癤腫毒，葉外用治跌打損傷。崗梅為廣東、廣西地區(qū)常用中草藥，在嶺南地區(qū)使用歷史悠久。《中國(guó)藥典》［2］和《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（第一冊(cè)）［3］收載本品，藥用部位為根，根據(jù)廣東的用藥習(xí)慣，莖及根均作藥用，為涼茶主要原料。本文就崗梅的化學(xué)成分及其提取工藝、藥理藥效進(jìn)行研究，并對(duì)崗梅的鑒定方法、種苗繁育、功能基因研究等方面進(jìn)行綜述，以期為崗梅的研究和開(kāi)發(fā)利用提供參考。離方法和藥理藥效方面，已報(bào)道的崗梅的化學(xué)成分有100多種（表1），主要化學(xué)成分是三萜及其皂苷類、黃酮類、木脂素和酚酸類化合物，其中三萜皂苷類是崗梅的特征成分［4］。為了進(jìn)一步闡明崗梅體內(nèi)的化學(xué)成分，學(xué)者們對(duì)提取技術(shù)和分離方法進(jìn)行了探討。

1 崗梅化學(xué)成分的提取工藝及其藥理藥效研究

目前對(duì)崗梅研究較多的是化學(xué)成分的提取分

表1 崗梅中分離的化合物［5］

續(xù)表1 崗梅中分離的化合物［5］

續(xù)表1 崗梅中分離的化合物［42］

1.1 三萜皂苷類化合物的提取工藝及鑒定

目前發(fā)現(xiàn)的三萜及皂苷類化合物約30 種。在提取工藝方面，有學(xué)者對(duì)比了超聲法和水浴法提取崗梅根總皂苷，篩選最佳提取方法，結(jié)果超聲法優(yōu)于水浴法，不僅縮短提取時(shí)間而且皂苷含量較高［6］；另有學(xué)者認(rèn)為，乙醇回流提取工藝穩(wěn)定性較高，建議6倍量50%乙醇回流提取2次，每次1 h［7］。彭敏樺等［8］對(duì)崗梅的根、莖、葉中的皂苷含量進(jìn)行了比較，并對(duì)提取方法和含量測(cè)定方法進(jìn)行了摸索，他認(rèn)為采用50%乙醇、回流1.5 h 的方法提取較完全；并建議用分光光度法測(cè)定崗梅總皂苷的含量，此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確且重現(xiàn)性好；研究還發(fā)現(xiàn)，崗梅根、莖、葉中都含有總皂苷且含量相差不大。張一萍等［9］應(yīng)用電鏡和薄層色譜法分析比較了崗梅根、莖之間的顯微結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分的異同，結(jié)果顯示崗梅根、莖具有相似的植物組織結(jié)構(gòu)，并且含有相同類型的化學(xué)成分，與彭敏樺等［8］的研究結(jié)果相似。

化學(xué)成分鑒定方面，雷雨［10］利用多種色譜技術(shù)進(jìn)行成分分離，波譜技術(shù)結(jié)合化合物的理化性質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，從崗梅根50%及95%乙醇提取物中分離鑒定了25 個(gè)化合物，包括：皂苷類11 個(gè)（崗梅苷類）、三萜類化合物4個(gè)（坡模酸、齊墩果酸等）及其他化合物10個(gè)。王海龍［11］利用開(kāi)放硅膠柱色譜、反相柱色譜、凝膠柱色譜等多種分離方法對(duì)崗梅葉的乙醇回流提取物進(jìn)行分離，得到27 個(gè)化合物，根據(jù)化合物的理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)確定了其中16 個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，首次在崗梅種分離得到了12 種化合物。文思［4］和Huang［12］采用多種色譜分離技術(shù)結(jié)合從崗梅根提取物中分離得到多種新三萜皂苷類化合物。文思首次獲得新的δ-齊墩果酸型三萜皂苷，Huang［12］首例發(fā)現(xiàn)崗梅三萜皂苷asprellcoside B 和asprellcoside C 帶有稀有的3，4-O-木糖基殘基（3，4-O-disulfo-xy‐lopyranosyl residue）。Zhang等［13］在崗梅莖中分離出3種新的三萜皂苷，通過(guò)高分辨率電噴霧電離質(zhì)譜、紅外光譜、核磁共振光譜等方法闡明了他們的結(jié)構(gòu)特征是硫酸鹽取代了糖單元。方心睿等［14］運(yùn)用色譜學(xué)手段對(duì)崗梅根的乙醇提取物進(jìn)行分離純化和結(jié)果鑒定，結(jié)果分離得到5個(gè)三萜皂苷類化合物，鑒定為坡模酸、柚子酸、齊墩果酸B、齊墩果酸E和毛冬青皂甙。目前發(fā)現(xiàn)的三十幾個(gè)三萜類化合物中，除了齊墩果酸是β-amyrin 構(gòu)型，其余均為α-amyrin 構(gòu)型，因此崗梅是研究烏索烷型三萜皂苷生物合成的理想材料，烏索烷型三萜皂苷具有抗腫瘤和抗病毒等生物活性［15］。

1.2 酚酸類化合物的提取工藝及鑒定

沈雅婕［16］優(yōu)化了崗梅中酚酸類成分的提取工藝，確定最佳提取工藝為：乙醇濃度為54%、提取時(shí)間為88 min、溶劑用量為33 mL。對(duì)以上3 個(gè)因素進(jìn)行比較得出對(duì)崗梅總酚酸提取率的影響依次為乙醇濃度（A） ＞溶劑用量（C） ＞提取時(shí)間（B）。同時(shí)利用凝膠色譜、反相硅膠色譜、高效液相色譜、高效制備液相色譜等色譜技術(shù)建立崗梅酚酸類化合物的分離方法，并運(yùn)用現(xiàn)代波譜學(xué)的方法對(duì)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。

Du等［17］從崗梅莖水提物中分離獲得8種酚類，這些酚類均能抑制體外NO 產(chǎn)生，起到抗炎作用。通過(guò)HR-ESI-MS，IR，UV 和NMR 等光譜數(shù)據(jù)分析建立新化合物的結(jié)構(gòu)，并通過(guò)比較實(shí)驗(yàn)和ECD分析確定其絕對(duì)構(gòu)型。邢建勇［18］和杜冰曌［19］從崗梅莖水提物中獲得1 個(gè)苯丙素類和3 個(gè)苯甲酸類化合物，是首次從冬青屬中獲得；鄧桂球等［20］首次從崗梅根的乙醇提取物中分離得到咖啡酸甲酯、綠原酸、隱綠原酸、丁香醛等5個(gè)酚類化合物。以上為酚類化合物的提取和鑒定提供借鑒。

1.3 黃酮類化合物的提取工藝及鑒定

黃酮類也是學(xué)者們比較關(guān)注的一類化合物，張秋燕等［21］利用微波輔助優(yōu)化崗梅黃酮類化合物提取工藝，最佳條件為乙醇濃度90%、固液比1∶40、浸提溫度70oC、浸提時(shí)間1 h、微波功率640 W、微波時(shí)間50 s，在此條件下，崗梅黃酮類化合物的提取率為2.75%；對(duì)提取液進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)含有異黃酮、查爾酮、橙酮、兒茶素類化合物以及黃酮醇等成分；張峻菁等［22］采用響應(yīng)面法優(yōu)化崗梅總黃酮的提取工藝，獲得最佳提取條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)50%，提取溫度92oC，料液比1∶45（g∶mL）；總黃酮提取率為6.465 mg/g。以上為崗梅的提取和開(kāi)發(fā)利用提供了理論依據(jù)。

2 崗梅提取物的藥理藥效

據(jù)記載，崗梅具有清熱解毒功效，可用于治療扁桃體炎，咽喉炎，氣管炎，百日咳，腸炎，痢疾，癰癤腫毒等，葉外用治跌打損傷，可見(jiàn)其具有較好的抗炎效果。有研究證明，酚類化合物中的苯丙素類和苯甲酸類能有效抑制小鼠白血病細(xì)胞中的NO 生成［18-19］，綠原酸類具有較廣泛的抗菌作用，被視為崗梅抑菌活性的藥效物質(zhì)［20］，為崗梅抗炎藥效的闡明提供了依據(jù)。黃曉丹等［23］研究了崗梅不同部位抗炎、止咳效果，結(jié)果：崗梅根、莖、葉、根莖混合物均可顯著抑制致炎小鼠耳廓腫脹（炎癥）；根、莖、根莖混合物可顯著減少致咳小鼠的咳嗽次數(shù)，說(shuō)明崗梅根、莖、根莖混合物均具有顯著的抗炎和止咳藥效，而崗梅葉僅有抗炎作用。羅雅勁［24］和朱偉群［25］等利用小鼠耳廓腫脹法、醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增高法、大鼠足跖腫脹法、大鼠棉球肉芽腫法等4個(gè)制炎模型研究崗梅根醇提物的抗炎活性，結(jié)果表明，崗梅根醇提物對(duì)炎癥早期的滲出和后期結(jié)締組織增生均有較明顯的抑制作用；朱偉群等［26］還通過(guò)小鼠模型研究了崗梅水提物抗流感病毒效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，崗梅抗流感病毒的作用也很明顯。張秋燕［21］對(duì)提取液的抗氧化性進(jìn)行鑒定發(fā)現(xiàn)，崗梅黃酮類化合物對(duì)自由基的清除效果顯著，說(shuō)明具良好的抗氧化性。

3 崗梅藥材的真?zhèn)舞b定

目前，市場(chǎng)上一些不法商販為了獲得較高的利益，在崗梅中摻雜冬青屬的毛冬青、鐵冬青、滿樹(shù)星等。盧進(jìn)等［27］利用RP-HPLC 方法用乙腈-0.2%磷酸水溶液梯度洗脫色譜柱，從10 批崗梅藥材中確定了11 個(gè)指紋峰，建立了準(zhǔn)確可靠的HPLC指紋圖譜；張軍等［28］用同樣的洗脫方式建立了崗梅中冬青苷XXIX 的HPLC-ELSD 測(cè)定方法；鄭夏生［29］建立了崗梅藥材的TLC 鑒別方法和HPLC 指紋圖譜；顏仁梁等［30］用HPLC法測(cè)定崗梅中綠原酸的含量并建立了綠原酸的指紋峰，由于HPLC 方法靈敏度高、重復(fù)性好，能夠?yàn)閸徝匪幉牡恼鎮(zhèn)舞b別及質(zhì)量控制提供幫助。

另外，周紅［31］利用ITS2 序列也能將崗梅與枸骨葉、四季青及冬青屬的毛冬青、大葉冬青、全緣冬青、滿樹(shù)星等近緣種有效區(qū)分。

4 崗梅種苗的繁殖技術(shù)

目前，崗梅主要的繁殖技術(shù)有播種繁殖、扦插繁殖和組織培養(yǎng)。播種繁殖時(shí)種子的質(zhì)量決定了出芽率和崗梅產(chǎn)量的多寡，因此有學(xué)者對(duì)崗梅種子活力水平檢測(cè)的方法進(jìn)行了研究，為評(píng)價(jià)種子的優(yōu)劣提供了可靠的方法［32］。由于崗梅種子休眠時(shí)間較長(zhǎng)，即使在當(dāng)年7月采種立即播種也要到第二年春天才能發(fā)芽。為解決這一問(wèn)題，有學(xué)者對(duì)崗梅的開(kāi)花物候期、花粉活力、授粉方法及雌蕊柱頭可授性、種子發(fā)芽率等問(wèn)題進(jìn)行了研究［33］，對(duì)提高崗梅種子授粉質(zhì)量和種子發(fā)育狀況有重要意義。現(xiàn)階段種植戶主要用扦插來(lái)繁殖崗梅種苗，此方法的新梢萌發(fā)率也較高，被人們所推廣。吳永彬［34］等研究了不同扦插基質(zhì)、不同激素處理濃度以及不同莖粗扦插穗對(duì)崗梅扦插成活率的影響，摸索出了崗梅扦插的適合條件為：以河沙為基質(zhì)，用直徑5 mm 左右的插穗扦插，再輔以100 mg/L 的NAA效果最好。

近幾年，組培快繁技術(shù)在藥用植物繁殖中也逐漸被應(yīng)用，它能夠保持親本原有的優(yōu)良品性，但崗梅的組培技術(shù)研究相對(duì)較少，蔡時(shí)可等［35］首次報(bào)道了崗梅的組培快繁技術(shù)，以崗梅嫩枝條為外植體，10%次氯酸鈉溶液消毒15 min 后接種在芽啟蒙誘導(dǎo)培養(yǎng)基，10～15 d 后腋芽萌動(dòng)生長(zhǎng)，20 d后轉(zhuǎn)到增值培養(yǎng)基，繼代培養(yǎng)3～4 代后轉(zhuǎn)至生根培養(yǎng)基，生根率達(dá)90%以上，經(jīng)煉苗移栽后成活率可達(dá)95%?？梢?jiàn)，組織培養(yǎng)不僅時(shí)間短而且成活率較高，不受休眠期和季節(jié)的限制，還能夠保證崗梅的優(yōu)良品質(zhì)，能夠解決規(guī)范化、規(guī)?；N植對(duì)種苗的需求。時(shí)群［36］對(duì)崗梅組培快繁技術(shù)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，分析研究不同基本培養(yǎng)基、不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類和配比、培養(yǎng)條件等因素對(duì)外植體誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和愈傷組織誘導(dǎo)、分化不定芽的影響，并探索了煉苗、基質(zhì)、移栽條件對(duì)生根組培苗移栽成活率的影響，獲得崗梅再生植株，建立起一套完整、實(shí)用的崗梅組織培養(yǎng)技術(shù)體系，為開(kāi)發(fā)崗梅種苗規(guī)?；敝常诶碚摵蜕a(chǎn)上提供相關(guān)的技術(shù)參考和優(yōu)質(zhì)種苗，同時(shí)也為崗梅進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化及生產(chǎn)次生代謝藥用產(chǎn)物提供技術(shù)基礎(chǔ)。

黃玉芬［37］等對(duì)崗梅的幼苗移栽、水肥管理、病蟲(chóng)害防治等方面進(jìn)行了規(guī)范；傅昱［38］對(duì)廣東省梅州市平遠(yuǎn)縣崗梅生產(chǎn)基地上的崗梅枝枯病病原菌進(jìn)行分離，初步鑒定為小孢擬盤(pán)多毛孢菌P.microspora，為崗梅病害的防治提供了理論依據(jù)。

5 崗梅功能基因研究

有學(xué)者研究了有效成分的合成途徑以及參與有效成分合成的候選基因，并對(duì)候選基因進(jìn)行克隆和功能分析，這些研究為闡明崗梅有效成分的生物合成機(jī)制以及崗梅的種質(zhì)和品種改良奠定了基礎(chǔ)。鄭夏生［15］通過(guò)轉(zhuǎn)錄組高通量測(cè)序技術(shù)挖掘了參與崗梅烏索烷型三萜皂苷生物合成相關(guān)的酶基因，共發(fā)現(xiàn)272 條unigenes 與萜類合成有關(guān)，進(jìn)一步揭示了這些基因與同源基因間的進(jìn)化關(guān)系及合成途徑，鑒定了2個(gè)香樹(shù)酯醇合酶，為生物合成崗梅中烏索烷型三萜皂苷提供借鑒。另有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，CYP450基因大多與崗梅的三萜類和皂苷類等次生代謝產(chǎn)物合成有關(guān)，溫羚玲［39］利用轉(zhuǎn)錄組技術(shù)，通過(guò)于已知基因的同源比對(duì)等生物信息學(xué)分析方法對(duì)轉(zhuǎn)錄組的注釋結(jié)果進(jìn)一步分析，發(fā)現(xiàn)了18 條P450 與三萜皂苷的生物合成途徑有關(guān)。對(duì)黃酮生物合成相關(guān)酶基因進(jìn)行挖掘，有2個(gè)編碼查爾酮合成酶（CHS）的基因被注釋為毛冬青特有基因，4 個(gè)編碼黃酮醇合成酶（FLS）基因被注釋為崗梅特有基因。羅秀秀［40］篩選出了4 個(gè)參與崗梅三萜皂苷生物合成的細(xì)胞色素P450 單加氧酶（CYPs）基因。生物信息學(xué)和基因技術(shù)的應(yīng)用，為崗梅有效成分的生物合成機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。林青［41］等從崗梅葉片中獲得了2 個(gè)磺酸基轉(zhuǎn)移酶基因IaST1和IaST2，通過(guò)誘導(dǎo)表達(dá)和純化，首次在崗梅中成功克隆了ST基因，為后續(xù)研究ST基因在崗梅三萜磺化中的功能和作用奠定了基礎(chǔ)。

6 展望

綜上所述，崗梅生藥學(xué)研究較透徹，化學(xué)成分和藥理藥效研究較多，大多集中在黃酮類和三萜皂苷類。在通過(guò)分子生物技術(shù)鑒定崗梅及其混偽品的研究較少，這需要在今后的工作中逐漸完善。另外，崗梅不僅可以藥用，還可以作為風(fēng)景林下群落優(yōu)勢(shì)種群被應(yīng)用［42］，因此對(duì)種苗的需求也是較多的。崗梅扦插繁殖速度慢、種苗參差不齊，在崗梅資源日益減少、供不應(yīng)求的當(dāng)下，對(duì)種苗的需求十分迫切，需加強(qiáng)組培技術(shù)的研究，為崗梅產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和單復(fù)方制劑的研究提供充足的原材料，使大眾受益。