王傳禹，嚴(yán)紅亞，張汝，王紅琴，李鴻俊，楊灼雄

(1.云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，云南 昆明 650224；2.玉溪市畜牧站，云南 玉溪 653100)

近年來，隨著云南省養(yǎng)禽業(yè)的不斷發(fā)展和雛禽的不斷引進(jìn)，新的家禽疾病不斷出現(xiàn)，禽病的發(fā)生與流行更為錯(cuò)綜復(fù)雜，給禽病的防制帶來了困難[1]。重要病毒性疾病禽流感(H5、H7、H9)和新城疫的疫病防控形勢越來越突出，給養(yǎng)禽業(yè)造成的損失越來越大。目前，預(yù)防雞群禽流感(H5、H7、H9)、新城疫均采用疫苗免疫的方法。但在實(shí)際生產(chǎn)中，雞場免疫失敗的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，免疫程序是否科學(xué)對機(jī)體抗體的產(chǎn)生和維持有重要的影響[2]。試驗(yàn)針對云南省某企業(yè)培育的地方雞“茶花雞2號”兩批商品雞群進(jìn)行了重要病毒性疾病禽流感和新城疫的全程血清抗體的跟蹤檢測，根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際情況分析主要原因，制定合理的禽流感(H5、H7、H9)和新城疫防控免疫程序，為云南省優(yōu)質(zhì)地方雞養(yǎng)殖提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

一次性96孔V型反應(yīng)板、pH 7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)、1%紅細(xì)胞懸液。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)抗原

新城疫(NDV)，LaSota株；禽流感H5N1，Re-8株；禽流感H7N9，Re-1株；禽流感H9N2，F(xiàn)株。均購自哈爾濱維科生物公司。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)動(dòng)物

“茶花雞2號”A、B兩批次雞群按擬定的新城疫、禽流感免疫程序免疫。5～7日齡新-支二聯(lián)凍干苗1羽份點(diǎn)眼或滴鼻；14～15日齡禽流感H5+H7油乳劑疫苗頸部皮下注射，0.3mL/羽；24～25日齡新城疫+禽流感H9二聯(lián)油乳劑疫苗肌肉注射，0.5mL/羽；35日齡禽流感H5+H7油乳劑疫苗肌肉注射，0.5mL/羽；45日齡及75日齡分別進(jìn)行新城疫Ⅳ系疫苗2羽份飲水免疫。

試驗(yàn)時(shí)間：2019年4—10月，A、B兩批次雞群飼養(yǎng)120d。

試驗(yàn)地點(diǎn)：昆明(A批)及玉溪(B批)兩個(gè)養(yǎng)殖點(diǎn)。

試驗(yàn)A批次日糧：昆明云嶺廣大種禽飼料公司121-123配合飼料。免疫疫苗：新城疫Ⅳ系疫苗、新-支二聯(lián)凍干苗(新勝威)購自廣東溫氏大華農(nóng)生物科技有限公司，新城疫+禽流感H9二聯(lián)油乳劑疫苗(新久安)購自肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司，禽流感H5+H7油乳劑疫苗為哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司生產(chǎn)。

試驗(yàn)B批次日糧為自配料，免疫疫苗為某公司提供。

1.4 血樣采集

A、B兩批次雞群分別在第2、30、42、70、80、120日齡按每次不少于20只雞隨機(jī)采血并分離血清，共收集124份血清樣本。

1.5 免疫效價(jià)測定

分離的血清用于ND、H5、H7、H9抗體的檢測，按常規(guī)方法進(jìn)行血凝試驗(yàn)(HA)和血凝抑制試驗(yàn)(HI)。操作方法按《GB/T 16550—2008新城疫診斷技術(shù)》的規(guī)定進(jìn)行。

1.6 結(jié)果計(jì)算與統(tǒng)計(jì)方法

HI抗體平均效價(jià)的計(jì)算：HI抗體平均效價(jià)(log2)=∑xn/∑n(x表示HI抗體效價(jià)，n表示該效價(jià)的血清份數(shù)) 。

抗體離散度(變異系數(shù)CV)=標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值×100%

檢測數(shù)據(jù)用Microsoft Excel 及SPSS統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

(1)不同日齡新城疫(ND)、禽流感(H5、H7、H9)平均抗體滴度(log2)檢測結(jié)果及抗體離散度(變異系數(shù))詳見表1。

表1 不同日齡ND、H5、H7、H9抗體檢測結(jié)果(log2)

(2)不同日齡“茶花雞2號”A、B雞群ND抗體水平(見圖1)。

圖1 “茶花雞2號”A、B雞群ND血清抗體檢測結(jié)果

(3)不同日齡“茶花雞2號”A、B雞群禽流感H5、H7、H9抗體水平(見圖2)。

圖2 “茶花雞2號”A、B雞群禽流感H5、H7、H9血清抗體檢測結(jié)果

3 小結(jié)與討論

疫苗免疫程序?qū)C(jī)體抗體的產(chǎn)生和維持有重要的影響，試驗(yàn)分別對兩批次的“茶花雞2號”商品雞群在不同日齡隨機(jī)采血進(jìn)行ND、H5、H7、H9病毒血清抗體檢測。圖1、圖2結(jié)果顯示雞群在30日齡新城疫、禽流感(H5、H7、H9)病毒血清抗體較低，母源抗體的抗體滴度隨著雛雞日齡的增長而逐漸減退，且基礎(chǔ)抗體水平越高下降幅度越大，5～7日齡及14～15日齡免疫的新城疫、禽流感H5+H7疫苗的抗體未能減緩抗體水平的下降，或未產(chǎn)生有效的抗體，4～5周齡后，隨日齡越大免疫效果越好，在4～5周齡時(shí)間段的病毒抗體水平未達(dá)到保護(hù)要求，因此在原有免疫程序的基礎(chǔ)上需要進(jìn)行合理調(diào)整。根據(jù)血清抗體檢測結(jié)果，并參考其他飼養(yǎng)日齡相近的新城疫、禽流感防控效果較好的土雜雞免疫措施，建議免疫程序如下：7～8日齡新-支二聯(lián)凍干苗1羽份點(diǎn)眼或滴鼻；14～15日齡禽流感H5+H7油乳劑疫苗頸部皮下注射，0.5mL/羽；24～25日齡新城疫+禽流感H9二聯(lián)油乳劑疫苗肌肉注射，0.5mL/羽、Ⅳ系或克降-30點(diǎn)眼或滴鼻；32日齡禽流感H5+H7油乳劑疫苗肌肉注射，0.5mL/羽；45日齡及75日齡分別進(jìn)行新城疫Ⅳ系疫苗2羽份飲水免疫。該免疫方法的抗體消長規(guī)律有待進(jìn)一步檢測，生產(chǎn)實(shí)踐中其免疫保護(hù)效果在臨床觀察中。

制定科學(xué)的免疫程序應(yīng)考慮雞場各種因素，如疫病的流行病學(xué)、免疫狀態(tài)、母源抗體的干擾、疫苗的特性和雞的品種、飼養(yǎng)管理?xiàng)l件以及疫苗的種類、性質(zhì)等[2]。國內(nèi)外沒有一個(gè)免疫程序可以適合所有地區(qū)的各個(gè)規(guī)模養(yǎng)雞場，不同規(guī)模雞場應(yīng)該根據(jù)當(dāng)?shù)貍魅静×餍刑攸c(diǎn)來確定免疫接種的疫苗種類、先后次序及間隔時(shí)間，制定出適合本場的免疫接種程序[3]。檢測A、B兩批次雞群的母源抗體及疫苗免疫后抗體水平有1～3個(gè)滴度的差異，提示同一個(gè)免疫程序在不同的地區(qū)、不同的養(yǎng)殖場不能長期應(yīng)用，應(yīng)根據(jù)免疫效果和免疫監(jiān)測情況適時(shí)調(diào)整。

“茶花雞2號”屬于優(yōu)質(zhì)本地雞，脫溫后大多以林下放養(yǎng)為主，本次檢測中發(fā)現(xiàn)雞群抗體離散度較大，抗體水平不整齊，放養(yǎng)狀態(tài)下新城疫抗體水平相差3～4個(gè)滴度，變異系數(shù)為0.35～0.42；禽流感H9抗體水平亦有3～4個(gè)滴度差值，變異系數(shù)到0.35。由于其養(yǎng)殖周期(120d)比較短及考慮免疫成本，出欄前疫苗免疫抗體水平基本處于中等水平，不具有足夠的保護(hù)力。因此，“茶花雞2號” 養(yǎng)殖場(戶)應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理水平和疫病防控意識，制定和執(zhí)行切實(shí)可行的生物安全控制措施，在堅(jiān)持免疫的基礎(chǔ)上做好圈舍消毒與隔離工作，防止外來野禽帶毒進(jìn)入養(yǎng)殖場。