金銀　韓書文

[摘要] 目的 探討胰島素樣生長因子2（IGF-2）在結(jié)直腸癌伴高脂血癥患者中的作用。 方法 選擇湖州市中心醫(yī)院2015年1月～2017年12月確診為結(jié)直腸癌的患者300例。采集患者的一般資料，包括年齡、性別、脂質(zhì)代謝水平、結(jié)直腸病變特性等，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析。在血清學(xué)層面，選擇結(jié)直腸癌伴高甘油三酯血癥的患者65例、結(jié)直腸癌不伴高甘油三酯血癥的患者40例及健康人群40例，對外周血中的IGF-2 進(jìn)行PCR檢測。在組織層面，選擇結(jié)直腸癌伴高甘油三酯血癥的患者25例和結(jié)直腸癌不伴高甘油三酯血癥的患者20例，對組織中的IGF-2進(jìn)行免疫組化和PCR檢測。 結(jié)果 結(jié)直腸癌患者的甘油三酯、游離脂肪酸、總膽固醇、低密度脂蛋白均高于正常人群，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在血清中，結(jié)直腸癌伴高甘油三酯血癥患者IGF-2基因的表達(dá)量高于不伴高甘油三酯血癥患者和正常人群，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在組織中，發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌伴高甘油三酯血癥的患者的IGF-2基因和IGF-2蛋白的表達(dá)量明顯高于結(jié)直腸癌不伴高甘油三酯血癥的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 胰島素樣生長因子2（IGF-2）可能參與結(jié)直腸癌伴高脂血癥的發(fā)生發(fā)展。

[關(guān)鍵詞] 結(jié)直腸癌;胰島素樣生長因子2;高脂血癥;高甘油三酯血癥

[中圖分類號(hào)] R735.3? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2020）07-0129-04

Expression and clinical significance of IGF-2 in colorectal cancer with hyperlipidemia

JIN Yin? ?HAN Shuwen

Department of Clinical Laboratory， Huzhou Central Hospital in Zhejiang Province， Huzhou? ?313000， China

[Abstract] Objective To investigate the role of insulin-like growth factor 2 （IGF-2） in colorectal cancer with hyperlipidemia. Methods A total of 300 patients with colorectal cancer diagnosed from January 2015 to December 2017 at Huzhou Central Hospital were selected. The clinical data of the patients including gender， age， lipid metabolism level， colorectal lesion characteristics， etc. were collected， and statistical methods were used for analysis. At the serological level， 65 colorectal cancer patients with hypertriglyceridemia， 40 colorectal cancer patients without hypertriglyceridemia， and 40 healthy people were selected. IGF-2 in peripheral blood was detected by PCR. At the tissue level， 25 colorectal cancer patients with hypertriglyceridemia and 20 colorectal cancer patients without hypertriglyceridemia were enrolled. IGF-2 in tissues was detected by immunohistochemistry and PCR. Results The levels of triglyceride， free fatty acid， total cholesterol and low density lipoprotein in colorectal cancer patients were higher than those in normal population， and the difference was significant（P<0.05）. In serum， the expression of IGF-2 gene in colorectal cancer patients with hypertriglyceridemia was higher than that in patients without hypertriglyceridemia and normal population， and the difference was statistically significant（P<0.05）. In tissues， the expression of IGF-2 gene and IGF-2 protein in patients with colorectal cancer with hypertriglyceridemia was significantly higher than that in colorectal cancer patients without hypertriglyceridemia， with significant difference（P<0.05）. Conclusion Insulin-like growth factor 2（IGF-2） may be involved in the development of colorectal cancer with hyperlipidemia.

[Key words] Colorectal cancer; Insulin-like growth factor 2; Hyperlipidemia; Hypertriglyceridemia

癌癥是導(dǎo)致死亡的第二大原因，而結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）位居癌癥相關(guān)性死亡的第三位。由于人們生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)的改變等原因，中國CRC的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢[1]。高脂血癥是結(jié)直腸癌患者常見伴發(fā)疾病，流行病學(xué)表明，高脂血癥患者的結(jié)直腸癌發(fā)病率有所增加。隨著研究的逐漸深入，人們發(fā)現(xiàn)胰島素樣生長因子（insulin-like growth factor，IGF）參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程[2，3]。此外，已有研究表明可以將胰島素樣生長因子2（IGF-2）作為多種腫瘤的預(yù)后分子學(xué)標(biāo)志[2-4]。為進(jìn)一步探討IGF-2 在結(jié)直腸癌伴高脂血癥患者中的作用，本研究對結(jié)直腸癌伴高脂血癥患者外周血和癌組織中IGF-2進(jìn)行了比較和分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集湖州市中心醫(yī)院2015年1月～2017年12月確診為結(jié)直腸癌的患者標(biāo)本及資料。共收集350例患者，有50例患者因體重未測、脂質(zhì)代謝水平數(shù)值不全、病理分期不明確等原因而剔除。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)臨床診斷及病理學(xué)檢查，確診為結(jié)直腸癌;（2）未行手術(shù)治療、化療等;（3）患者本人或其代理人簽署知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他部位的惡性腫瘤;（2）合并有心功能不全、慢性肺心病等嚴(yán)重心肺疾病;（3）患者入院前3個(gè)月使用調(diào)脂藥物史;（4）合并有結(jié)腸炎、腸息肉等其他腸道疾病。體質(zhì)指數(shù)（BMI）是體重公斤數(shù)除以身高米數(shù)平方所得（國際單位kg/m2）。結(jié)直腸癌患者中男189例，女111例;健康人群男65例，女35例。結(jié)直腸癌患者平均年齡（64.36±8.95）歲，健康人群平均年齡（62.55±7.40）歲。結(jié)直腸癌患者平均體重（61.81±9.28）kg，健康人群平均體重（62.11±9.39）kg。結(jié)直腸癌患者BMI（22.80±2.73）kg/m2，健康人群的BMI（22.65±2.46）kg/m2。最終納入的300例患者和100例健康人群在性別、年齡等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究已申請醫(yī)院倫理委員審批，并獲得批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集? 采集結(jié)直腸癌患者和健康人群的相關(guān)臨床資料，根據(jù)臨床特征進(jìn)行相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

1.2.2 qRT-PCR? 應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)對樣本中的IGF-2 表達(dá)水平進(jìn)行檢測。采集患者的清晨空腹外周血4 mL，在室溫條件下靜置5 min，然后再進(jìn)行總RNA的提取。為檢測其完整性，需要提取5 μL總RNA，然后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳操作。按照試劑盒說明書步驟進(jìn)行操作，通過逆轉(zhuǎn)錄操作合成cDNA，放置在-80℃條件下進(jìn)行保存以備用。根據(jù)操作說明提取cDNA后進(jìn)行qRT-PCR檢測。具體檢測條件如下：每個(gè)樣品需提前設(shè)置3 個(gè)復(fù)孔，在95℃條件下進(jìn)行10 min預(yù)變性，以95℃ 15 s，60℃ 1 min的原則，進(jìn)行40 個(gè)循環(huán)。以GAPDH作為內(nèi)參基因，GAPDH引物由上海生工公司合成，GAPDH引物序列為F：5'-GAAAAGAAGGACCCCAGAA-3'，R：5'-TGCTGTGTGTTGTGTGTGTC-3';IGF-2引物序列為F：5'-CTTGGACTTTGAGTCAAA-TTGG-3'，R：5'-GGTCGTGCCAATTACATTTCA-3'。

1.2.3 免疫組化? （1）對組織切片先進(jìn)行脫蠟處理，然后放置在提前配制的雙氧水中浸泡約20 min;（2）將組織切片用 PBS 緩沖液沖洗，至少3次，時(shí)間至少15 min;（3）加熱檸檬酸緩沖液，待緩沖液沸騰后，放入組織切片;（4）15 min后取出組織切片，在常溫下放置 5 min，待冷卻，使用PBS 緩沖液再次進(jìn)行沖洗，至少3次;（5）一抗處理，然后在 4℃條件下孵育至第2天，取出切片，再次沖洗;（6）二抗處理，在常溫下放置10 min，使用 PBS 緩沖液進(jìn)行沖洗;（7）顯色處理，先使用二氨基聯(lián)苯胺（DAB）溶液進(jìn)行顯色處理，清水沖洗后再用蘇木精對組織切片進(jìn)行襯染，最后封固;（8）鏡下觀察組織切片染色情況。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 常用臨床指標(biāo)? 患者首診時(shí)血清中甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、脂蛋白a[Lp（a）]、載脂蛋白B（Apo B）和游離脂肪酸（FFA）的數(shù)值。

1.3.2 qRT-PCR結(jié)果判定? △Ct=樣本Ct均值-內(nèi)參Ct均值，△△Ct=△Ct-（隨機(jī)陰性對照樣品Ct均值-該樣品內(nèi)參Ct均值），樣品中的目的基因相對表達(dá)量用2-△△Ct表示。

1.3.3 IGF-2結(jié)果判定[5]? 染色強(qiáng)度判定：0分表示無色;1分表示黃色;2分表示棕黃色;3分表示棕褐色。陽性細(xì)胞所占的百分比：≤1%為0分;2%～10%為1分;11%～50%為2分;51%～75%則為3分;≥76%則為4分。染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞所占的百分比的乘積：<3分表示陰性（-）;3～4分表示弱陽性（+）;5分表示中等陽性（++）;≥6分表示強(qiáng)陽性（+++）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用頻數(shù)和百分比表示計(jì)數(shù)資料。計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)或SNK檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌患者與健康人群的的脂質(zhì)代謝水平比較

將結(jié)直腸癌患者和健康人群的脂質(zhì)代謝水平進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌患者中甘油三酯、游離脂肪酸、總膽固醇和低密度脂蛋白均高于健康人群，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05），見表1。

2.2 三組研究對象外周血中IGF-2表達(dá)情況比較

將結(jié)直腸癌伴和不伴高甘油三酯血癥與健康人群的血清中的IGF-2表達(dá)情況進(jìn)行比較，統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌伴高甘油三酯血癥的患者中的IGF-2表達(dá)高于結(jié)直腸癌不伴高脂血癥和健康人群，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2及圖1。

2.3 IGF-2表達(dá)在組織層面上對結(jié)直腸癌伴高甘油三脂血癥和不伴高甘油三脂血癥患者的比較

將結(jié)直腸癌伴和不伴高甘油三酯血癥患者IGF-2基因與蛋白進(jìn)行免疫組化和PCR檢測，并對其表達(dá)情況進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)IGF-2在結(jié)直腸癌伴高脂血癥的患者的表達(dá)量明顯高于不伴高脂血癥的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），見表3、4、圖2。

3討論

CRC為全球最常見的惡性腫瘤之一，脂代謝異常被認(rèn)為是結(jié)直腸癌的主要促進(jìn)劑之一[6]。在這一腫瘤患者群體中，高脂血癥是一個(gè)危險(xiǎn)因素，可以導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生代謝異常而血糖升高，進(jìn)而引起胰島素抵抗、激活胰島素生長因子，從而誘發(fā)腫瘤[7-9]。Lim HS等[10]研究顯示，結(jié)直腸癌伴代謝綜合征患者存在攝入大量的高脂食物現(xiàn)象。Kim BC等[11]研究顯示，TG水平升高是CRC的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。李林海等[12]研究發(fā)現(xiàn)，伴高脂血癥的結(jié)直腸癌患者明顯高于正常人群，認(rèn)為高脂血癥與CRC的發(fā)生發(fā)展密切聯(lián)系。通過本研究發(fā)現(xiàn)，CRC患者的甘油三酯、游離脂肪酸、總膽固醇、低密度脂蛋白高于健康人群，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明結(jié)直腸癌患者多伴有脂質(zhì)代謝異常。

胰島素樣生長因子（IGF）作為一種生長激素，分為IGF-1 和IGF-2 兩種類型，結(jié)構(gòu)與胰島素相似。IGF-2主要來源于肝臟，參與了人體和腫瘤中許多組織的生長發(fā)育過程[13，14]。Ahmadi A等[15]研究顯示，代謝綜合征（MetS）可能通過不同的生物機(jī)制增加CRC的風(fēng)險(xiǎn)，尤其是與胰島素抵抗相關(guān)。Braun S等[16]研究發(fā)現(xiàn)，IGF-2與糖尿病等代謝疾病緊密相關(guān)。Wang Y等[17]研究表明，過表達(dá)的IGF-2 可以與胰島素受體-A共同促進(jìn)腫瘤生長。脂肪組織是機(jī)體中儲(chǔ)存能量的重要器官，其1/3為脂肪細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，脂肪細(xì)胞的異常分化會(huì)引起機(jī)體一系列的變化，如會(huì)引起細(xì)胞數(shù)量異常增多，脂質(zhì)在體內(nèi)過度堆積，從而導(dǎo)致糖尿病、肥胖、高脂血癥等多種代謝疾病[18]。IGF-2參與包括肝臟、骨骼肌、脂肪細(xì)胞等在內(nèi)的多種組織及器官的代謝過程;在肝臟中，它能夠通過抑制葡萄糖的輸出從而使糖原的合成增加;在外周組織中，具有增加葡萄糖的攝取，加速葡萄糖氧化、促進(jìn)脂質(zhì)、蛋白質(zhì)的合成作用[19]。宣麗萍[18]研究發(fā)現(xiàn)，社區(qū)代謝綜合征患者血清樣本中IGF-2表達(dá)水平高于非代謝綜合征對照組，不僅如此，在小鼠實(shí)驗(yàn)中也獲得了相似的結(jié)果，普通喂養(yǎng)組小鼠中的表達(dá)水平低于高脂喂養(yǎng)肥胖模型小鼠的表達(dá)水平。孟曉瑜等[20]研究顯示，妊娠期糖尿病患者胎盤內(nèi)IGF-1、IGF-2 水平升高，并存在血糖、血脂代謝紊亂，IGF-1、IGF-2水平與妊娠期糖尿病、巨大兒體質(zhì)量、空腹血糖及三酰甘油間存在密切關(guān)系。本研究將結(jié)直腸癌伴和不伴有高甘油三酯血癥患者與健康人群的血清中的IGF-2表達(dá)情況進(jìn)行比較，結(jié)直腸癌伴高甘油三酯血癥的患者中的IGF-2表達(dá)水平高于其他兩組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。本研究選擇結(jié)直腸癌伴有高脂血癥的患者（25例）和結(jié)直腸癌不伴有高脂血癥的患者（20例），對結(jié)直腸癌組織中的IGF-2進(jìn)行免疫組化和PCR檢測，發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌伴高脂血癥的患者中的IGF-2基因和蛋白的表達(dá)量明顯高于不伴高脂血癥的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。本研究認(rèn)為，IGF-2可能參與結(jié)直腸癌伴高脂血癥的發(fā)生發(fā)展。

探討組織學(xué)IGF-2的表達(dá)為血清學(xué)研究提供理論基礎(chǔ)，血清中檢測IGF-2基因可以為后續(xù)療效監(jiān)測及預(yù)后評(píng)估提供無創(chuàng)的檢測手段。盡管本文從血清學(xué)和組織學(xué)層面探討了IGF-2在結(jié)直腸癌伴高脂血癥患者中的作用，但仍存在樣本量相對較小，未進(jìn)行多中心研究的不足，后期將進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，從多個(gè)醫(yī)院收集患者病例，進(jìn)行多中心研究。

綜上所述，本研究認(rèn)為IGF-2可能參與結(jié)直腸癌伴高脂血癥的發(fā)生發(fā)展，可作為檢測結(jié)直腸癌伴脂質(zhì)代謝異常的一種預(yù)測參考指標(biāo)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Aguirreportolés C，F(xiàn)ernández LP，Ramírez ADM. Precision? nutrition for targeting? lipid? metabolism in? colorectal? cancer[J]. Nutrients，2017，9（10）：1076.

[2] Si ZH，Jin HY. Lipid metabolism abnormalities in patients with colorectal cancer：Distribution characteristics and clinical value[J].World Chinese Journal of Digestology，2011，16（43）：553-554.

[3] Siddiqui AA，Palmer BF. Metabolic syndrome and its association with colorectal cancer：A review[J]. American Journal of the Medical Sciences，2011，341（3）：227-231.

[4] El Tayebi HM，Salah W，El Sayed IH，et al. Expression of insulin-like growth factor-II， matrix metalloproteinases，and their tissue inhibitors as predictive markers in the peripheral blood of HCC patients[J]. Biomarkers，2011， 16（4）：346-354.

[5] Samani AA，Yakar S，Leroith D，et al.The role of the IGF system in cancer growth and metastasis：Overview and recent insights[J]. Endocrine Reviews，2007，28（1）：20.

[6] Han S，Pan Y，Yang X，et al. Intestinal microorganisms involved in colorectal cancer complicated with dyslipidosis[J].Cancer Biology & Therapy，2019，20（1）：81-89.

[7] Wang C，Li P，Xuan J，et al. Cholesterol? enhances? colorectal? cancer progression via ROS elevation and MAPK signaling? pathway activation[J]. Cellular Physiology & Biochemistry International Journal of Experimental Cellular Physiology Biochemistry & Pharmacology，2017，42（2）：729.

[8] Seminara P，Losanno T，Emiliani A，et al.Cancer chemotherapy and cardiovascular risks：Is capecitabine-induced hypertriglyceridemia a rare adverse effect？[J]. Cardiology，2010，116（1）：42-44.

[9] 吳為明，陳鳳娜.高脂血癥對直腸癌開腹及腹腔鏡手術(shù)合并癥的影響[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，11（13）：51-54.

[10] Lim HS， Shin EJ， Yeom JW，et al. Association between? nutrient? intake and metabolic syndrome in patients with colorectal cancer[J].Clinical Nutrition Research，2017，6（1）：38-46.

[11] Kim BC，Shin A，Hong CW，et al. Association of colorectal adenoma with components of metabolic syndrome[J]. Cancer Causes & Control，2012，23（5）：727-735.

[12] 李林海，劉輝.高脂血癥與結(jié)直腸腺瘤的關(guān)系[J]. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2015，（4）：436-437.

[13] Prieto DMC，Cheng Y，Chang CC，et al. Direct integrin binding to insulin-like growth factor-2 through the C-domain is required for insulin-like growth factor receptor type 1（IGF1R） signaling[J]. Plos One，2017，12（9）：e0184285.

[14] Saber MA，Abdelhafiz SM，Khorshed FE，et al. Differential expression of Glypican-3 and Insulin-Like growth? factor-II mRNAs and Alpha-Fetoprotein and Ki-67 markers in HCV related hepatocellular carcinomas? in? egyptian? patients[J]. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention Apjcp，2017，18（1）：121.

[15] Ahmadi A，Noroozi M，Pourhoseingholi MA，et al. Effect of metabolic syndrome and its components on survival in colorectal cancer：A prospective study[J]. Journal of Renal Injury Prevention，2015，4（1）：15-19.

[16] Braun S，Bitton-Worms K，Leroith D. The link between the metabolic syndrome and cancer[J]. International Journal of Bological Sciences，2011，7（7）：1003.

[17] Wang Y，Hua S，Tian W，et al. Mitogenic and anti-apoptotic effects of insulin in endometrial cancer are phosphatidylinositol 3-kinase/Akt dependent[J]. Gynecologic Oncology，2012，125（3）：734-741.

[18] 宣麗萍.胰島素樣生長因子2對3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖、分化和葡萄糖攝取的影響[D]. 浙江大學(xué)，2016.

[19] 葉希平，趙倩，陳曉蓉，等.胰島素樣生長因子-2的研究進(jìn)展[J].銅陵職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2017，16（2）：33-35.

[20] 孟曉瑜，王艷，思美麗，等.胎盤胰島素樣生長因子1、胰島素樣生長因子2與妊娠期糖尿病巨大兒糖脂代謝的關(guān)系[J]. 醫(yī)學(xué)綜述，2016，22（19）：3899-3901.

（收稿日期：2019-03-11）