付春杰，杜 鑫，楊 柳，高曉慶，蘇 操，張 丹，趙海源

吉林冠界生物技術(shù)有限公司，吉林梅河口 135000

禽流感病毒是由A 型禽流感病毒所引起禽類的一種急性高度致死性、傳染性病毒。禽流感被列為A 類傳染病，不僅是雞，其它一些家禽如鴨和野鳥(niǎo)都能感染禽流感。高致病性禽流感在全國(guó)范圍內(nèi)的突擊爆發(fā)和大面積的流行引起了世界各國(guó)的高度關(guān)注和重視[1]。為有效控制疫情爆發(fā)，國(guó)際上主要采取隔離補(bǔ)殺，但當(dāng)大面積流行性爆發(fā)擴(kuò)散時(shí)，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失難以估量，養(yǎng)殖戶也難以承擔(dān)。因此免疫接種就成了控制及預(yù)防疫情的關(guān)鍵措施之一，成為養(yǎng)殖的重中之重[2]。

本研究通過(guò)監(jiān)測(cè)重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗（細(xì)胞源，H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 H7-Re2 株）在2 ～8 ℃保存不同時(shí)間的質(zhì)量情況，為疫苗在有效期內(nèi)的有效使用提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料

1.1 疫苗

3 批重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗（細(xì)胞源，H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 H7-Re2 株）由吉林冠界生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為2019001-s、2019002-s、2019003-s。

1.2 SPF 雞

購(gòu)自北京某實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。

1.3 抗原及血清

重組禽流感病毒H5 亞型Re-11 株、Re-12 株和H7 亞型H7-Re2 株血凝抑制試驗(yàn)抗原及陽(yáng)性血清，均購(gòu)自哈爾濱某生物技術(shù)有限公司。

2 方法

將3 批重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗（細(xì)胞源，H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 H7-Re2 株）置2 ～8 ℃保存，分別于保存0、4、8、12、15 個(gè)月時(shí)進(jìn)行性狀檢驗(yàn)、效力檢驗(yàn)及甲醛殘留量測(cè)定。

2.1 性狀檢驗(yàn)

2.1.1 劑型：取一清潔吸管，吸取少量疫苗滴于清潔冷水中，觀察液滴擴(kuò)散情況。

2.1.2 穩(wěn)定性：吸取疫苗10 mL 加入離心管中，以3 000 r/min離心15 min，觀察管底析出的水相體積。

2.1.3 黏度：按《中國(guó)獸藥典》[3]2015 年版三部附錄進(jìn)行測(cè)定。

2.2 效力檢驗(yàn)

每組、每個(gè)保存時(shí)間段的疫苗需用3 ～4 周齡SPF 雞10 只，每只胸部肌肉注射疫苗0.3 mL。21 d后，連同對(duì)照雞5 只，分別采血，分離血清，分別用H5 亞型Re-11 株、Re-12 株和H7 亞型H7-Re2株抗原測(cè)定HI 抗體效價(jià)。

2.3 甲醛殘留量測(cè)定

按《中國(guó)獸藥典》2015 年版三部附錄進(jìn)行測(cè)定。

3 結(jié)果

3.1 性狀檢驗(yàn)

疫苗在2 ～8 ℃保存至15 個(gè)月，每批疫苗、每個(gè)保存時(shí)間段的劑型、黏度和穩(wěn)定性均符合要求。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 3 批疫苗不同保存時(shí)間的性狀檢驗(yàn)結(jié)果

3.2 效力檢驗(yàn)

將在2 ～8 ℃保存不同時(shí)間的3 批疫苗免疫SPF 雞，每次均于免疫后21 d 采血，分離血清，測(cè)定H5 亞型Re-11 株、Re-12 株和H7 亞型H7-Re2株HI 抗體效價(jià)，結(jié)果表明，疫苗的免疫效力未發(fā)生明顯變化，具體實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表2 3 批疫苗不同保存時(shí)間的效力檢驗(yàn)結(jié)果（log2）

3.3 甲醛殘留量

疫苗在2 ～8 ℃保存至15 個(gè)月，每批疫苗、每個(gè)保存時(shí)間段的甲醛殘留量維持在穩(wěn)定的數(shù)值范圍內(nèi)，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 3 批疫苗不同保存時(shí)間的甲醛殘留量測(cè)定結(jié)果

4 討論

3 批重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗（細(xì)胞源，H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 H7-Re2 株）在2 ～8 ℃保存至15 個(gè)月，分別于保存0、4、8、12、15 個(gè)月時(shí)測(cè)定相關(guān)參數(shù)，結(jié)果表明保存15 個(gè)月時(shí)，劑型、黏度和穩(wěn)定性均符合要求，未出現(xiàn)分層或破乳；免疫效力無(wú)明顯變化；甲醛殘留量也未發(fā)生明顯變化。這些檢測(cè)結(jié)果也間接驗(yàn)證了疫苗生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性。

在實(shí)際應(yīng)用中，疫苗按規(guī)定保存條件2 ～8 ℃儲(chǔ)存[4]，在有效期12 個(gè)月內(nèi)使用無(wú)任何質(zhì)量問(wèn)題，可放心使用。